سیم کشی مجدد متابولیسم گلوکز و لیپید ناشی از خاموش کردن گیرنده 17 همراه با پروتئین G، انتقال پیش سازهای الیگودندروسیت را به سلول های میلین کننده امکان پذیر می کند.

3. نتایج

3.1. خاموش کردن GPR17 در متمایز کردن OPC ها به طور قابل توجهی بیان ژن های دخیل در متابولیسم لیپید و گلوکز را تغییر داد.

برای برجسته کردن فرآیندهای بیولوژیکی که به طور قابل‌توجهی تحت تأثیر بیان GPR17 در طول تمایز OL قرار می‌گیرند، با ترانسفکت کردن OPCهای موش صحرایی با siRNA‌های SMART-pool خاص برای GPR17 موش، با بیان آن تداخل کردیم. پس از تایید شکست موفقیت آمیز GPR17 توسط qRT-PCR (شکل S1)، ما یک تجزیه و تحلیل ریزآرایه از 30584 رونوشت موش در OPCهای GPR{8} خاموش شده در مقابل کنترل انجام دادیم و ژن‌های بیان شده متفاوت (DEGs) را با ابزارهای بیوانفورماتیک مختلف تجزیه و تحلیل کردیم. ابتدا، 640 DEG توسط Meta-Core مورد مطالعه قرار گرفته است تا تجزیه و تحلیل غنی سازی مسیر انجام شود و فرآیندهایی که پیش بینی می شود به طور قابل توجهی تحت تأثیر قرار گیرند شناسایی شود. این تجزیه و تحلیل، تغییر سیگنال دهی mTOR را پیشنهاد می کند، که قبلاً نشان داده شده است که با عملکرد GPR17 [37] مرتبط است، و سایر فرآیندهایی که برای بلوغ OPC مرتبط هستند، مانند "بازسازی اسکلت سلولی"و"تنظیم متابولیسم لیپید" (میز 1).

به علاوه

برای آشنایی با سیستانچ برای رشد استخوان اینجا را کلیک کنید

جدول 1. نرم افزار MetaCore برای انجام تجزیه و تحلیل غنی سازی مسیر بر روی DEG ها پس از خاموش کردن GPR17 استفاده شده است. جدول مهم ترین مسیرهای حاصل از تجزیه و تحلیل، تعداد ژن های مرتبط و ژن های مشترک موجود در مجموعه داده را نشان می دهد.

سپس، ابزار تجزیه و تحلیل مسیر Ingenuity (IPA) برای انجام یک تطابق تحلیلی مورد استفاده قرار گرفت، که به طور خودکار مجموعه داده‌های IPA را با شباهت‌ها و تفاوت‌های قابل‌توجهی در مقایسه با مجموعه داده‌های پرس و جو شناسایی می‌کند. این تجزیه و تحلیل پیوند پیش بینی شده بین بیان GPR17 و متابولیسم لیپید را تقویت می کند و نشان می دهد که تغییرات بیان 38 ژن در مجموعه داده ما (جدول S1) با سنتز اسیدهای چرب تغییر یافته مرتبط است (شکل 1). در این میان، خاموش کردن GPR17 باعث ایجاد دخیل در LXR (گیرنده X کبدی آلفا، NR1H3 در شکل 2 و جدول S1، یک گیرنده هسته ای در پاسخ به اکسیسترول ها) و SREBP1 (پروتئین اتصال دهنده عنصر تنظیم کننده استرول 1، SREBF1 در شکل 1 و جدول S) بازیگران کلیدی در سنتز اسیدهای چرب و کلسترول. در مجموعه داده ما، ما همچنین مشاهده کردیم که چندین ژن تغییر یافته، از جمله PDH (پیروات دهیدروژناز)، Ldha (لاکتات دهیدروژناز آلفا)، و Pdk1 (پیروات دهیدروژناز کیناز 1)، با متابولیسم گلوکز و چرخه کربس مرتبط هستند، که نشان دهنده درگیری بالقوه گیرنده GPR17 در تنظیم این فرآیندهای متابولیکی. بر این اساس، یک تجزیه و تحلیل غنی‌سازی مبتنی بر هستی‌شناسی ژن (مجموعه TopGene) روی DEGها تغییر در «فرایند متابولیک اسید مونو کربوکسیلیک» را نشان داد (GO:{{2{24}}}}}}}32787، p- مقدار: 0.02)، فراتر از سایر فرآیندهای مرتبط با توسعه CNS و متابولیسم سلولی، مانند "تنظیم توسعه سیستم عصبی" (GO:0051960، p-value: 0.033) و "فرایندهای متابولیک اسفنگولیپید" (GO:0006665، p-value). : 0.043) (شکل 2؛ فهرست کامل در جدول S2).

در سطح جهانی، این تغییرات نشان می‌دهد که خاموش کردن GPR17 ممکن است به عنوان محرکی برای رسیدگی به سلول‌ها به میلین‌سازی عمل کند، با تنظیم چندین ژن درگیر در تنظیم رونویسی هموستاز لیپید و گلوکز، و همچنین در استفاده از کلسترول و لیپیدها برای تولید میلین.

شکل 1. ابزار تجزیه و تحلیل مسیر هوشمندی (IPA، Qiagen) برای تجزیه و تحلیل مجموعه داده ها و کشف بیماری ها و فرآیندهای بیولوژیکی که بر اساس الگوی ژن های بیان شده متفاوت در مجموعه داده ها پیش بینی می شود در حال افزایش یا کاهش باشند، استفاده شد. از این تجزیه و تحلیل، ما طرح موجود در شکل را برون یابی کردیم که شامل ژن های مربوط به سنتز لیپید است که به طور متفاوت در مجموعه داده ما بیان شده است (p-value=9.67 × 10-4). نام کامل این ژن ها به همراه تغییر برابری نسبی (نسبت log2) در جدول S1 گزارش شده است. در قرمز، ژن های تنظیم مثبت؛ در ژن‌های سبز رنگ و تنظیم‌شده

شکل 2. مجموعه Toppgene برای تجزیه و تحلیل غنی سازی مبتنی بر GO بر روی DEG ها استفاده شده است. تصویر برخی از فرآیندهای بیولوژیکی مهم مربوط به سیستم عصبی مرکزی و متابولیسم سلولی را نشان می دهد که به طور بالقوه توسط خاموش کردن GPR17 تغییر می کند. نوارهای آبی کل ژن های مرتبط با هر عبارت را نشان می دهد. نوارهای قرمز نشان دهنده ژن های مشترک با مجموعه داده ما برای هر عبارت است. فهرست کامل فرآیندهای بیولوژیکی حاصل از این تجزیه و تحلیل و مقادیر p نسبی در جدول S2 گزارش شده است.

3.2. تجزیه و تحلیل متابولومیک در طی تمایز OPC در شرایط آزمایشگاهی

برای ارزیابی همبستگی بین بیان GPR17 و فعال شدن مسیرهای متابولیک خاص، ما یک تجزیه و تحلیل متابولومیک OPCهای کشت شده را در طول بلوغ فیزیولوژیکی آنها انجام دادیم. OPCها در یک محیط تمایز نگهداری شدند و سپس در چهار نقطه زمانی مختلف (بعد از 0، 1، 3 و 5 روز در تمایز، DID)، که مربوط به مراحل مختلف بلوغ OL است، لیز شدند. به موازات آن، برای ارزیابی اینکه در تمام آزمایش‌ها بلوغ با زمان مورد انتظار رخ داده است، OPCها برای GPR17 و MBP کشت و رنگ‌آمیزی شدند. نتایج نشان داد که تعداد سلول‌های بیان‌کننده GPR در 3 DID به حداکثر خود رسید و سپس به سطح پایه در 5 DID بازگشت، در حالی که تعداد سلول‌های MBP مثبت به تدریج در طول بلوغ افزایش یافت (شکل 3a)، به طور مداوم با نتایج قبلی [37]. ارزیابی متابولومیک OPC توسط کروماتوگرافی مایع-طیف‌سنجی جرمی پشت سر هم (LC-MS/MS) همانطور که قبلاً توضیح داده شد [38] انجام شد، با تمرکز بر متابولیت‌های پرانرژی درگیر در گلیکولیز، مسیر پنتوز فسفات، چرخه کربس، اکسیداسیون اسیدهای چرب، کوفاکتورهای آنها. NADH، NAD plus، NADPH، NADP plus، ATP، ADP، AMP، اسیدهای آمینه و برخی از مشتقات آنها. پروفایل های متابولومیک نقاط چهار زمانه تحلیل شده در شکل 3b گزارش شده است. در روز 0، سطوح چندین متابولیت متعلق و/یا مرتبط با چرخه کربس (به عنوان مثال، سوکسینات، مالات، آلفا-کتوگلوتارات، گلوتامات، آسپارتات، آلانین و پرولین) بالاتر بود، همانطور که از سلول‌های آینده انتظار می‌رفت. از حالت بسیار در حال تکثیر (شکل 3c). در مراحل میانی (از DID 1 تا 3)، OPC ها تنظیم مثبت مشخصی از مولکول های دخیل در سنتز اسیدهای چرب و کلسترول را نشان دادند. بر این اساس، ما افزایش سطح استیل-CoA را مشاهده کردیم (شکل 3c)، که نشان دهنده پیش ساز کلسترول و اسیدهای چرب و مالونیل-CoA، یک واسطه خاص در سنتز اسیدهای چرب است. در DID 5، ما افزایش سطوح چندین آسیل کارنیتین و اسیدهای آمینه را به موازات افزایش قابل توجه گلوکز داخل سلولی آزاد مشاهده کردیم (شکل 3c). ما همچنین کاهش سطوح AMP و ADP را از روز 0 تا DID 5 و افزایش گذرا ATP بین DID 1 و DID 3 مشاهده کردیم. این داده ها نشان می دهد که، از روز 0 تا DID 3، مربوط به پنجره زمانی که طی آن GPR17 به حداکثر بیان خود می رسد، OPCها عمدتاً از گلوکز و اسیدهای آمینه برای حفظ بیوسنتز کلسترول و اسیدهای چرب استفاده می کردند. در DID 5، همانطور که با افزایش سطح آسیل کارنیتین مشخص شد، OPCها احتمالاً به استفاده از اسیدهای چرب متکی هستند. این داده‌ها با هم نشان می‌دهند که در طول تمایز فیزیولوژیکی، OPCها به تدریج متابولیسم انرژی خود را دوباره سیم‌کشی می‌کنند تا به OLهای میلین‌کننده بالغ تبدیل شوند.

3.3. تجزیه و تحلیل متابولومیک پس از خاموش کردن GPR17 در طول بلوغ OPC در شرایط آزمایشگاهی

برای آشکار کردن نقش گیرنده GPR17 در ایجاد تغییرات متابولیکی انرژی که در طول تمایز سلولی رخ می‌دهند، ما متابولومیک را روی OPCهای خاموش‌شده GPR در مقایسه با OPC‌های کنترلی که یک RNA درهم‌خورده دریافت می‌کنند، انجام دادیم. ما ابتدا تاثیر خاموش کردن GPR17 را بر بلوغ OPC با رنگ‌آمیزی ایمونوفلورسانس برای GPR17 و MBP بررسی کردیم. همانطور که انتظار می رفت، پس از خاموش کردن گیرنده، کاهشی در رنگ آمیزی GPR17 یافتیم که به وضوح در 3 DID قابل مشاهده است. ما همچنین افزایش قابل توجهی در تعداد OLهای بالغ مثبت MBP در هر دو 3 DID (نشان داده نشده) و 5 DID (شکل S2) مشاهده کردیم. به طور موازی، تجزیه و تحلیل دقیق qPCR در پنج نقطه ({11}}، 1، 2، 3 و 5 روز در تمایز، DID) انجام شد، که نشان داد، در OPCs کنترل، افزایش شدید بیان GPR17 بعد از 1 DID، که پس از 2 DID به سطوح قابل توجهی می رسد، افزایش تدریجی بیان MBP تا 5 DID و کاهش قابل توجهی در نشانگر اولیه NG2 (شکل 4a). برعکس، پس از خاموش کردن GPR17 (شکل 4b)، mRNA ژن GPR17 در DID1 به سطوح پایین تری رسید و سپس به طور پایدار پایین ماند، بیان MBP بیشتر افزایش یافت و NG2 بیشتر کاهش یافت. مقایسه مستقیم بیان NG2 و MBP در GPR{28}}خاموش شده در مقابل OPCهای کنترلی در هر نقطه زمانی در شکل 4c نشان داده شده است. در مجموع، این نتایج نشان می‌دهد که تحت این شرایط تجربی، خاموش کردن GPR17 در OPCها روند تمایز آنها را تسریع می‌کند. سپس، متابولومیک OPC توسط LC-MS/MS در پنج نقطه زمانی انتخاب شده انجام شد. مقایسه داده‌های متابولومیک به‌دست‌آمده از OPCهای خاموش‌شده و کنترل‌شده GPR در هر نقطه زمانی به ما امکان می‌دهد متابولیت‌هایی را شناسایی کنیم که به‌طور قابل‌توجهی تحت تأثیر خاموش کردن GPR17 هستند.

شکل 3. (الف) نمودار تغییرات درصد سلول های GPR17 plus و MBP plus را در طول تمایز نشان می دهد. n=3 در هر گروه; ANOVA یک طرفه با تست Tukey. * p < 0.05، ** p < 0.01) (ب) نقشه حرارتی فراوانی متابولیت را در هر نمونه منفرد در 0، 1 نشان می‌دهد. ، 3 یا 5 DID. فراوانی متابولیت های تجزیه و تحلیل شده با مقیاس رنگی از آبی تیره (فراوانی بسیار کم) تا قهوه ای تیره (فراوانی بسیار بالا) نشان داده می شود. n=4-5 در هر گروه. (ج) متابولیت هایی با فراوانی به طور قابل توجهی در بین شرایط متفاوت (0، 1، 3 و 5 روز در تمایز، DID؛ ANOVA یک طرفه با تست LSD فیشر).

در DID 1 (شکل 5a)، ما تغییرات قابل توجهی پیدا نکردیم. در DID 2 (شکل 5b)، افزایش قابل توجهی در برخی از متابولیت های چرخه کربس (مالات، فومارات سیترات)، افزایش متوسطی در کارنیتین آزاد (CO)، استیل-کارنیتین (C2)، پروپیونیل-کارنیتین (C3) یافتیم: 0)، بوتیریل-کارنیتین (C4:0)، والریل-کارنیتین (C5:{14}})، هگزادکانوئیل-کارنیتین (C16:{17}}و کاهش قابل توجهی در گلوکز لاکتات، کراتین و اورنیتین کاهش روغناکتات و کراتین و افزایش پروپیونیل کارنیتین (C3) نیز در DID3 مشاهده شد (شکل 5c). در DID 5 (شکل 5d)، ما همچنان افزایش کارنیتین آزاد را مشاهده کردیم CO)، استیل کارنیتین (C2)، پروپیونیل-کارنیتین (C3:{27}})، بوتیریل-کارنیتین (C4:{{3{33}}}})، والریل-کارنیتین (C5:{36}} تترادکانویل-کارنیتین (C14:0)، هگزادکانوئیل-کارنیتین (C16:{42}})، اکتادکانویل-کارنیتینC18:0)، اکتادسنوئیل-کارنیتین (C18:1)، مشابه آنچه در ابتدا در موارد دیگر مشاهده شد. سلول های تمایز یافته (نگاه کنید به شکل 3)، افزایش دی هیدروکسی استون{47}فسفات/گلیسرآلدئید{48}}فسفات (DHAP/GAP)، فومارات و سیترات، و کاهش استیل کوآ، مت- سوکراتین، تورین و کارنوزین

شکل 4. اثر خاموش کردن GPR17 بر بلوغ OPC. سطوح بیان GPR17 (سبز)، NG2 آبی) و MBP (قرمز) طی تمایز در شرایط کنترل (سلول‌های ترانسفکت شده با RNA درهم و پس از خاموش کردن GPR17 (b) توسط PCR بلادرنگ ارزیابی شد و در مقابل بیان در T{{ 6}} (تنظیم به 0) }.001 در مقابل DID 0-2-3-5، @ p < 0.05 در مقابل DID 3-5؛ ## p < 0.01 در مقابل روز 0؛ SSS p < {{30}}.001 در مقابل DID{ {21}}؛ (ب): *** p < 0.{42}}01 در مقابل DID 0-2-3-5، @@@ p < 0 .001 در مقابل روز 0، # p <0.05، ### p <0.001 در برابر روز 0.S p <0.05، SS p <0.01، SSS p <0.001 V. DID 5. (C) بیان NG2 و MBP در GPR{41}}OPCsvs. OPCهای کنترلی خاموش شده (تنظیم شده روی 0) در هر نقطه زمانی. تغییر فولد (FC) به عنوان LOG,(FC) گزارش شده است. یک آزمون t نمونه، * p < 0.05، * p < 0.01؛ *** p < 0.001 در مقابل DID نسبی در OPCهای کنترل.

شکل 5. تغییرات متابولیک ناشی از خاموش کردن GPR17 در OPCها. (الف-د) فراوانی هر متابولیت پس از خاموش کردن GPR17 به مقدار موجود در نمونه شاهد نسبی نرمال شده است. تغییرات چین های حاصل برای ایجاد یک نمودار آتشفشانی برای هر نقطه زمانی (1، 2، 3، 5 روز در تمایز) استفاده شد. نقاط روی خط افقی نقطه چین متابولیت هایی را نشان می دهند که از نظر آماری تغییر معنی داری نشان داده اند (ال اس دی فیشر اصلاح شده توسط FDR؛ p.adj < 0.1). در سبز، متابولیت هایی با بیان کمتر، در قرمز، آنهایی که بیان بالاتری دارند، پس از خاموش کردن GPR17. n=7–۹ در هر گروه. DID: روز در تمایز.

3.4. GPR17 آزادسازی لاکتات را در طول بلوغ OPC تعدیل می کند

بر اساس نتایج متابولومیک شرح داده شده در بالا، خاموش کردن GPR17 برای کاهش سطوح داخل سلولی لاکتات یافت شد. برای ارزیابی اینکه آیا این کاهش منعکس کننده کاهش کلی در متابولیسم لاکتات یا افزایش انتشار این متابولیت است، ما سطوح آن را در لیزهای سلولی و در محیط‌های مربوطه در مقاطع زمانی مختلف اندازه‌گیری کردیم. همانطور که در شکل 6 نشان داده شده است، در شرایط کنترل، لاکتات درون سلولی در DID 2 (شکل 6a) به بالاترین فراوانی رسید (زمانی که بیان گیرنده GPR17 نیز حداکثر است)، و سپس زمانی که سلول ها بالغ شدند کاهش یافت. در عوض، پس از خاموش کردن GPR17، افزایش لاکتات درون سلولی لغو شد و سطوح آن بیشتر به سمت تمایز کاهش یافت. در واقع، مقایسه سطوح لاکتات در OPCهای خاموش شده GPR در مقابل OPCهای کنترل در هر نقطه زمانی، کاهش سطوح آن را در DID 2 و 3 برجسته کرد (شکل 6b). لاکتات خارج سلولی از سینتیک‌های متفاوتی پیروی می‌کند، که در مقایسه با DID 1 در DID 2-3-5 در شرایط کنترل کاهش قابل‌توجهی نشان می‌دهد، در حالی که در GPR{12}}OPC‌های خاموش شده به طور پایدار بالاتر باقی می‌ماند و سپس به طور قابل‌توجهی در DID 5 کاهش می‌یابد (شکل 6c) ). با این حال، هنگام مقایسه سطوح لاکتات در نقاط زمانی مختلف بین دو شرایط تجربی، خاموش کردن GPR17 مانع کاهش فیزیولوژیکی شد.افزایش حضور لاکتاتدر محیط DID 2 و 3 (شکل 6d)،افزایش انتشار را پیشنهاد می کند.

شکل 6. خاموش کردن GPR17 در OPC ها متابولیسم لاکتات را تغییر می دهد. (الف) فراوانی لاکتات در طول بلوغ OPC در شرایط کنترل (خط سبز) و پس از خاموش کردن GPR17 (خط نارنجی). n=7-9 در هر گروه. ANOVA یک طرفه با تست مقایسه چندگانه توکی. * p < 0.05، ** p < 0.01 در مقابل DID2 CTL; §§ p < 0.01، §§§ p < {{30}}.001 در مقابل DID1 siGPR17 (b ) سطوح لاکتات پس از خاموش کردن GPR17 در مقابل نمونه‌های شاهد (تنظیم شده روی 1) در هر نقطه زمانی (n=7-9) نرمال شد. ** p < 0.01; یک نمونه آزمون تی محیط های شرطی شده از GPR{24}}خاموش شده و OPCهای کنترل از همان کشت مورد استفاده برای تجزیه و تحلیل متابولومیک جمع آوری شد. سطوح لاکتات در محیط ها توسط LC-MS/MS ارزیابی شد. ج) فراوانی لاکتات در فضای خارج سلولی در طول بلوغ OPC در شرایط کنترل (خط سبز) و پس از خاموش کردن GPR17 (خط نارنجی). ANOVA یک طرفه با تست مقایسه چندگانه توکی. ** p <0.01، *** p <0.001 در مقابل DID1 CTL; § p < 0.05 در مقابل DID5 siGPR17. (د) سطوح لاکتات خارج سلولی پس از خاموش کردن GPR17 در مقابل نمونه‌های کنترل (تنظیم شده روی 1) در هر نقطه زمانی نرمال شد. * p <0.05; ** p < 0.01; یک نمونه آزمون تی اثر مهار MCT1 در OPCهای کنترل (e,g) و GPR{45} خاموش شده (f,h) با تجزیه و تحلیل بیان MBP در نمونه‌های تیمار شده با مهارکننده در مقابل کنترل‌های نسبی (تحت درمان با وسیله نقلیه) ارزیابی شده است. در 3 و 5 روز تمایز. n=6 در هر گروه.

یکی از مکانیسم هایی که توسط آنOPC ها می توانند لاکتات آزاد کننداز طریق ناقل مونوکربوکسیلات MCT1 است. علاوه بر این، مطالعات اخیر گزارش کردند که OPCها خود می‌توانند لاکتات خارج سلولی را از طریق گیرنده‌های MCT بدست آورند که چرخه سلولی و تمایز آنها را تقویت می‌کند [39]. بنابراین، ما تعجب کردیم که آیا افزایش آزادسازی لاکتات ناشی از خاموش کردن GPR17 می تواند توسط MCT1 واسطه شود و آیا این ممکن است تا حدی مسئول تأثیر مشاهده شده بر بلوغ OPC در شرایط مشابه باشد (شکل 4). برای این هدف، ما OPCها را با AR-C155858، یک بازدارنده انتخابی MCT1، در طول تمایز طبیعی و پس از خاموش کردن GPR17 درمان کردیم. همانطور که انتظار می رفت، انتشار لاکتات با موفقیت در هر دو شرایط مهار شد (شکل S3). اثر مهار MCT1 بر بلوغ OPC در شرایط مختلف تجربی با تجزیه و تحلیل سطوح بیان MBP مورد ارزیابی قرار گرفت. کاهش متوسطی در بیان ژن MBP، که نزدیک به اهمیت آماری است (p=0.07)، تنها در نمونه‌های ترانسفکت شده با siRNA اختصاصی برای GPR17 یافت شده است (شکل 6e–h). با این حال، هیچ تنوع قابل توجهی در نمونه های ترانسفکت شده با RNA کنترل (siNEG) ظاهر نشد. این نتایج نشان می‌دهد که افزایش لاکتات خارج سلولی به واسطه کاهش GPR17، بلوغ OPCs را تقویت می‌کند. با این حال، میزان کم کاهش MBP نشان می دهد که این متابولیت تنها عامل دخیل در این فرآیند نیست.

3.5. تجزیه و تحلیل لیپیدومی پس از خاموش کردن GPR17 در طول بلوغ OPC

نتایج تجزیه و تحلیل transcriptomic پس از خاموش کردن GPR17 همچنین یک پیوند بالقوه بین عملکرد آن و مسیرهای مصنوعی لیپیدها و کلسترول، که اجزای اصلی میلین هستند، برجسته کرد. برای بررسی بیشتر نقش GPR17 در متابولیسم لیپید، ما LC-MS/MS را برای تجزیه و تحلیل لیپیدومی OPCهای خاموش شده GPR پس از 2، 3 و 5 روز در تمایز، در مقایسه با روز 0 اعمال کردیم. لیست لیپیدهای تجزیه شده، تغییرات برابری نسبی و مقادیر p در جدول S4 گزارش شده است. دو دسته از فراوان ترین لیپیدها در گروه های تجربی اسیدهای چرب و خانواده دی اسیل فسفاتیدیل کولین (PCaa) بودند. در طول تمایز OPC های کنترل، ما هیچ تغییر قابل توجهی در فراوانی هیچ کلاس لیپیدی پیدا نکردیم. درعوض، OPCهای خاموش‌شده GPR در مقایسه با OPCهای کنترل، به ویژه در DID 3 و 5، روندی به سمت فراوانی تغییر یافته اسیدهای چرب آزاد، سرامیدها، آسیل آلکیل فسفاتیدیل کولین (PCae) و فسفاتیدیل‌لینوزیتول (PI) نشان دادند. اما فقط دی اسیل-فسفاتیدیل اتانول آمین (PEaa) و اسفنگومیلین (SM) تغییر آماری معنی داری را نشان دادند (شکل 7).

شکل 7. تغییرات در فراوانی طبقات لیپیدی ناشی از خاموش کردن GPR17 در طول تمایز OPC. فراوانی هر کلاس چربی در شرایط کنترل در مقاطع زمانی مختلف گزارش شده است (الف) سینتیک هر کلاس لیپید پس از خاموش کردن GPR17 مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت: (ب) اسیدهای چرب، (C) سرامیدها (د) LysoPC (lysophosphatidyl-cholines)، (ه) LysoPE (لیزوفسفاتیدیل اتانول آمین ها)، (f) PCaa (دیاسیل-فسفاتیدیل-کولین)، (g) PCae (آسیل-آلکیل-فسفاتیدیل-کولین)، (h) PEaa (دی-آسیل فسفاتیدیل-اتانول آمین)، (i) PEae (آسیل-آلکیل-فسفاتیدیل-اتانول آمین)، (i) PI (فسفاتیدیلینوزیتول)، (k) PS (فسفاتیدیل-سرین)، (D SM (اسفنگومیلین). n=5 برای هر گروه. سینتیک: دو طرفه ANOVA به دنبال تست مقایسه چندگانه Tukey. siGPR17: ANOVA دوطرفه و به دنبال آن تست مقایسه چندگانه Sidak. * p.adi < 0.05، ** p.adi <0.01.

مقایسه داده‌های لیپیدومی به‌دست‌آمده از GPR{0}}خاموش‌شده و کنترل‌ها در هر نقطه زمانی به ما اجازه می‌دهد تا لیپیدهایی را شناسایی کنیم که به طور قابل‌توجهی تحت تأثیر خاموش کردن GPR17 قرار گرفته‌اند. پس از 2 DID، هیچ تغییر قابل توجهی یافت نشد (داده ها نشان داده نشده اند). پس از 3 DID، دی اسیل فسفاتیدیل کولین (PCaa) C40:4 کمتر و دی اسیل-فسفاتیدیل اتانول آمینPEaa) C34:3 در OPCهای خاموش شده GPR (شکل 8a) فراوانتر بود (شکل 8a). پس از 5 روز تمایز، خاموش کردن GPR17 منجر به چندین تغییر در فراوانی لیپید شد: کاهش چندین دی‌اسیل PC و دی‌اسیل PE و افزایش همزمان چندین پلاسمالوژن (آسیل آلکیل-PC) همراه با اسفنگومیلین (SM) C18:1 و SM. (OH) C16:1 (شکل 8b). این داده ها نشان می دهد که کاهش GPR17 پروفایل لیپیدی جزء اصلی میلین را به عنوان PC و PE تغییر می دهد.

شکل 8.تغییرات لیپیدومی ناشی از خاموش کردن GPR17 در OPCها. (الف، ب) فراوانی هر لیپید پس از خاموش کردن GPR17 به مقدار موجود در نمونه کنترل نسبی نرمال شده است. تغییرات چین حاصل برای ایجاد یک نمودار آتشفشانی برای هر نقطه زمانی (3، 5 روز در تمایز) استفاده شد. نقاط روی خط افقی نقطه چین متابولیت هایی را نشان می دهند که از نظر آماری تغییر معنی داری نشان داده اند (ال اس دی فیشر تصحیح شده توسط FDR؛ p.adj < 0.1). در سبز، لیپیدها با بیان کمتر، در قرمز، آنهایی که بیان بالاتری دارند، پس از خاموش کردن GPR17. n=5 در هر گروه.

بیشتر بخواهید:

ایمیل:wallence.suen@wecistanche.com

واتساپ٪2fTel٪3a ٪7b٪7b0٪7d٪7d

فروشگاه:

https٪3a٪2f٪2fwww.xjcistanche.com٪2fcistanche-shop