تثبیت همزمان اسکلت سلولی اکتین در چندین سلول خاص نفرون از کلیه در برابر آسیب های مختلف محافظت می کند Ⅱ

تثبیت دارویی اکتین قشر مغز از طریق دینامین AKI را بهبود می بخشد.

از دست دادن مرز برس لوله های کلیوی به دلیل جداسازی قشر اکتومیوزین یکی از ویژگی های غالب AKI است.2,29. یک داروی ضد سرطان که اغلب به AKI منجر می شود سیس پلاتین است30. پیامد اصلی آسیب سیس پلاتین در سلول های کلیوی، افزایش سطح گونه های اکسیژن فعال (ROS) است.31. علاوه بر این، افزایش سطوح ROS منجر به کاهش دینامیک اکتین می شود32که باعث اختلال در غشای میتوکندری می شود. این بیشترROS را تشدید می کندتولید33,34. بنابراین، ما بررسی کردیم که آیا تحریک دارویی دینامین'قابلیت اتصال متقابل کافی استفیبرای مقابله با آسیب ناشی از سیس پلاتین.

همانطور که قبل از 35 مشاهده شد، سیس پلاتین ارتفاع سلول MDCK، تعداد میکروویلی ها، و طول را کاهش داد و قطبیت سلولی را بدون تأثیر بر اندوسیتوز تحت تاثیر قرار داد (جدول 1، شکل تکمیلی 7a-d). تجزیه و تحلیل TEM نشان داد که این فنوتیپ ها را می توان به از دست دادن F-اکتین ناشی از سیس پلاتین نسبت داد (شکل 4a). افزودن Bis-T{7}} قبل از سیس پلاتین با تثبیت قشر اکتومیوزین در برابر آسیب ناشی از سیس پلاتین، اثرات آن را لغو کرد (شکل 4a-c). فنوتیپ های مشابهی در خوک مشاهده شدلوله پروگزیمال کلیهسلول های (LLC-PK1) (تصویر تکمیلی 8). این داده‌ها با هم شواهدی را ارائه می‌کنند که Bis-T{4}} قشر اکتومیوزین را از جداسازی قطعات ناشی از سیس پلاتین حفظ می‌کند.

در یک رویکرد مکمل فیزیولوژیکی مرتبط36، Bis T{1} با توانایی سیس پلاتین برای کاهش مقاومت الکتریکی ترانس اپیتلیال (TER) که در سراسر تک لایه اپیتلیال زنده با استفاده از یک سیستم کشت transwell اندازه‌گیری شد، مقابله کرد (شکل 4d). از آنجایی که TER یکپارچگی اتصالات محکم را در کشت سلولی اندازه گیری می کند، این داده ها بیشتر اثر مفید Bis-T{4}} را بر یکپارچگی سلول های اپیتلیال در هنگام آسیب نشان می دهد.

برای دریافت CISTANCHE برای CKD اینجا را کلیک کنید

از آنجایی که دینامیک اکتین تغییر یافته می تواند تولید ROS را افزایش دهد، در ادامه بررسی کردیم که آیا تثبیت شبکه اکتین توسط Bis-T{1}} می تواند با استرس اکسیداتیو در سلول های آسیب دیده از سیس پلاتین مقابله کند یا خیر. ما تصمیم گرفتیم وضعیت کربونیل‌های زیست مولکول سلولی را ارزیابی کنیم، یک نشانگر زیستی پایدار از آسیب اکسیداتیو تولید شده توسط سطوح بالای ROS، با استفاده از سنسور فلورسنت TFCH37 که اخیراً توسعه یافته‌ایم (شکل 4e). در واقع، افزودن Bis-T-23 قبل از سیس پلاتین تا حدی افزایش کربونیلاسیون ناشی از سیس پلاتین را کاهش داد (شکل 4f). روندهای مشابهی در مورد کربونیلاسیون پس از درمان با Bis-T{10}} و Depolymerizer اکتین LatA مشاهده شد (شکل تکمیلی 9a). این داده ها با هم شواهدی را ارائه می دهند که تثبیت شبکه های اکتین می تواند با حلقه بازخورد بین استرس اکسیداتیو و وضعیت اکتین در سلول های آسیب دیده مقابله کند.

یک موش خارج از بدنمدل کلیهبعداً برای تجسم حفاظت از BisT{0}}محور قشر اکتومیوزین در مرز قلم مو مورد استفاده قرار گرفت. سیس پلاتین باعث کاهش قابل توجه رنگ آمیزی F-اکتین در مرز براش لوله های پروگزیمال شد (شکل 4g). اخیراً با استفاده از تصویربرداری داخل ویروسی، کاهش مشابهی از F-اکتین در مرز قلم مو با شروع آسیب شدید ایسکمی-پرفیوژن مجدد مشاهده شد. قبل از درمان با Bis-T{8}} تا حدی از از دست دادن F-اکتین ناشی از سیس پلاتین در مرز براش توبول های کلیوی محافظت کرد (شکل 4g)، که بیشتر اثر Bis-T{13}} را بر اکتومیوزین نشان می دهد. قشر در غشای آپیکال سلول های اپیتلیال کلیه. همانطور که در کشت سلولی مشاهده می‌شود، Bis-T{15}} بر اندوسیتوز در برش‌های بافت تأثیری نداشت (شکل تکمیلی 9b)، بیشتر نشان می‌دهد که Bis-T{18}} بر نقش دینامین در اندوسیتوز در کلیه تأثیر نمی‌گذارد. لوله های پروگزیمال

در نهایت، ما اثر محافظتی مجدد Bis-T{2}} را در مدل موشی AKI39 ناشی از سیس پلاتین بررسی کردیم. موش‌های BL6 با Bis-T{7}} یا DMSO یک بار در روز از 24 ساعت قبل از تزریق سیس پلاتین تزریق شدند. همانطور که قبلا دیده شد، سطح کراتینین سرم (SCr) و نیتروژن ادرار خون (BUN) به طور قابل توجهی 3 روز پس از تزریق سیس پلاتین افزایش یافت (شکل 4h). DMSO به دلیل توانایی مهار اکسیدان خود، همانطور که قبلا دیده شده بود، محافظت ملایمی از نو را نشان داد. تجویز روزانه Bis-T{16}} از نظر محافظت مجدد از DMSO بهتر بود (شکل 4h). از آنجایی که همه حیوانات در روز 5 به دلیل سمیت سیستمیک سیس پلاتین قربانی شدند (تصویر تکمیلی 9c)، ما نتوانستیم مزایای طولانی مدت Bis-T{23}} را بررسی کنیم.عملکرد کلیه. با هم، این مطالعات به طور متقاعدکننده ای نشان می دهد که حفظ یکپارچگی سلول های کلیوی از طریق تثبیت قشر اکتومیوزین در غشای آپیکال، با سمیت کلیوی ناشی از سیس پلاتین مقابله می کند.

تثبیت شبکه های اکتین با AKI ناشی از آیوهگزول مقابله می کند.

در حالی که مکانیسم دقیق AKI ناشی از رنگ کنتراست به طور کامل کشف نشده است، اما یکی از دلایل اصلی AKI43 اکتسابی در بیمارستان است. از نظر فیزیولوژیکی، رنگ کنتراست بار اسمزی را افزایش می دهد، جریان خون کلیوی را کاهش می دهد و باعث انقباض شریان کلیه می شود. در سطح سلولی، ROS در مقایسه با AKI45 ناشی از رنگ، نقش مهمی دارد. با توجه به نقش ROS در تنظیم اسکلت سلولی اکتین و فرضیه ما مبنی بر اینکه تثبیت قشر اکتومیوزین می‌تواند با آسیب اکسیداتیو مقابله کند، ما اثرات Bis-T{7}} را بر روی AKI46 ناشی از رنگ کنتراست، iohexol بررسی کردیم.

اثرات سلولی آیوهگزول در انسان مورد بررسی قرار گرفتکلیه لوله پروگزیمالسلول های (HK-2). همانطور که برای سیس پلاتین مشاهده می شود، آیوهگزول باعث از دست دادن F-اکتین می شود که با افزایش قابل توجهی در سطح مولکول های کربنیله همراه بود، که یک پیامد غیرقابل برگشت از افزایش سطوح ROS است (شکل 5a, b). هر دو فنوتیپ تا حدی با پیش تیمار با Bis-T{5}} خنثی شدند و باعث ایجاد هم افزایی بین وضعیت اسکلت سلولی اکتین و سطح استرس اکسیداتیو در این سلول ها شد. مکمل سنجش های مبتنی بر سلول، تجویز روزانه Bis T{7}} عملکرد کلیوی را بر اساس سطوح Scr و BUN در موش های BL6 که با رنگ کنتراست به چالش کشیده شده بودند، حفظ کرد (شکل 5c). پاسخ بسیار مطلوب از بهبود نرخ بقا نیز در حیواناتی که Bis-T{12}} را همراه با رنگ کنتراست دریافت کردند مشاهده شد (شکل 5d).

اخیراً نشان داده‌ایم که افزایش سطح سرمی گیرنده فعال‌کننده پلاسمینوژن محلول از نوع اوروکیناز (suPAR) کلیه را نسبت به AKI47 ناشی از یوهگزول حساس می‌کند. ما بعداً بررسی کردیم که آیا محافظت با واسطه دینامین از سلول‌های لوله‌ای می‌تواند در موش‌های BL6 که سطوح بالایی از suPAR از بافت چربی (suPAR-Tg) را بیان می‌کنند، محافظت مجدد را نیز انجام دهد. همانطور که انتظار می رفت، موش های suPAR-Tg 24 تا 48 ساعت پس از تزریق آیوهگزول کاهشی در عملکرد کلیه نشان دادند (شکل 5e). در مقابل، حیواناتی که دوز روزانه Bis-T-23 دریافت کردند، خود را نشان دادندعملکرد کلیه به طور قابل توجهی بهتر استبا وجود چالش رنگ کنتراست (شکل 5e). قابل توجه، کاهش قابل توجهی در میزان مرگ و میر در گروه موش هایی که Bis-T-23 دریافت کردند مشاهده شد (شکل 5f). همانطور که پیش‌بینی می‌شد، میزان آسیب اکسیداتیو (کربونیلاسیون بیومولکول) در سلول‌های HK{4}} که همزمان با Bis-T{6}} تیمار شده‌اند، به‌طور قابل‌توجهی کمتر از سلول‌هایی بود که فقط ترکیبی از suPAR و Iohexol دریافت کردند (شکل تکمیلی. 9d).

شکل 4 آگونیست دینامین با تثبیت قشر اکتومیوزین در غشای آپیکال از لوله های کلیوی در برابر آسیب ناشی از سیس پلاتین محافظت می کند. یک تصویر PR-EM از lamellipodium در سلول‌های MDCK تحت درمان با DMSO (0.1%) یا Bis-T-23 (5 µM، 0.1% DMSO) برای 1 ساعت قبل به افزودن سیس پلاتین (35 میکرومولار) به مدت 23 ساعت. قشر اکتومیوزین زرد رنگ بود. b تصاویر با بزرگنمایی بیشتر از مناطق کادر بندی شده در (a). سطوح متمایز ضخامت با کد رنگی مشخص می شوند. پانل های بالایی و پایینی شبکه هایی را نشان می دهند که به ترتیب از رشته های کوتاه تر و رشته های بلندتر تشکیل شده اند. c نموداری که چگالی رشته‌های اکتین را در لبه جلویی نشان می‌دهد (کادر زرد در (a)؛ 18-20 ناحیه شمارش شده است). d نمودار نواری که مقاومت الکتریکی نسبی ترانس اپیتلیال (%) را در سلول‌های زنده MDCK تحت درمان همانطور که در (الف) بیان شد، به جز غلظت‌های سیس پلاتین (50 میکرومولار) و Bis-T-23 (30 میکرومولار) نشان می‌دهد (12). قرائت در هر نمونه). داده ها به صورت میانگین ± SEM رسم می شوند (***P <0.001، ****P <0.0001، آزمون t دو دنباله بدون جفت). ns، قابل توجه نیست. e نمایش شماتیک تشخیص کربونیلاسیون ناشی از استرس اکسیداتیو با استفاده از روش TFCH. f تصاویری که سطوح کربونیل های زیست مولکول تعیین شده توسط TFCH را نشان می دهد. سلول ها همانطور که در (الف) توضیح داده شد، به جز غلظت سیس پلاتین (5 میکرومولار) تیمار شدند. نوار مقیاس، 20 میکرومتر. نمودار نشان دهنده سطوح نسبی فلورسانس TFCH مرتبط با کربونیل های زیست مولکول در هر سلول (نقاط داده (n)=83-116؛ هر نقطه نشان دهنده شدت متوسط ​​4-9 سلول است). گرم موش صحراییبرش های کلیهبا آنتی بادی ضد اکتین رنگ آمیزی شده است.برش های کلیهقبل از افزودن سیس پلاتین (200 میکرومولار) یا بافر به مدت 8 ساعت در بافر، DMSO (0.1%)، یا Bis-T-23 (30 میکرومولار) به مدت 1 ساعت انکوبه شدند. مناطق مربع سفید بزرگ شدند. میله های مقیاس، 40 میکرومتر. نموداری که شدت F-اکتین را در مرز قلم مو در هر لوله نشان می دهد (100-236). برای c، f، g، داده ها به صورت میانگین ± SD رسم می شوند (مقادیر P در شکل، ANOVA یک طرفه با آزمون مقایسه چندگانه توکی گزارش شده است). h نمودار نقطه پراکنده نشان دهنده AKI ناشی از سیس پلاتین تعیین شده توسط سطح نیتروژن اوره خون (BUN) یا کراتینین سرم (SCr). به حیوانات DMSO (1%) یا Bis-T{14}} (20 میلی گرم/کیلوگرم) (n=12، در هر شرایط برای SCr؛ n=17، در هر شرایط برای BUN) تزریق شد. یک بار در روز از 24 ساعت قبل از تزریق سیس پلاتین (15 میلی گرم بر کیلوگرم). اندازه گیری ها در زمان های مشخص شده انجام شد. داده ها به صورت میانگین ± SEM رسم می شوند (مقادیر P در شکل، آزمون t دو دنباله بدون جفت گزارش شده است). ns، قابل توجه نیست.

برخلاف آسیب سلولی با واسطه ROS ناشی از سیس پلاتین و آیوهگزول، suPAR تا حدی با افزایش نرخ مصرف اکسیژن (OCR) باعث آسیب سلولی لوله‌ای می‌شود. برای پیوند اثر فیزیولوژیکی Bis-T{3}} در موش‌های تراریخته suPAR به تأثیر آن بر متابولیسم سلولی، بررسی کردیم که آیا تثبیت شبکه اکتین از طریق دینامین OCR مبتنی بر suPAR را کاهش می‌دهد یا خیر. OCR در زمان واقعی در سلول‌های HK-2 تحت شرایط پایه و در پاسخ به تزریق‌های متوالی مهارکننده‌های میتوکندری با استفاده از آنالایزر شار خارج سلولی Seahorse XFe24 اندازه‌گیری شد (شکل 5g). افزودن یک آنتی بادی ضد suPAR یا Bis-T{11}} بهبود یافته مبتنی بر suPAR در تنفس پایه میتوکندری، تولید ATP، حداکثر سرعت تنفس و ظرفیت تنفسی اضافی افزایش می‌یابد (شکل 5f). این داده‌ها اثرات مثبت Bis-T{16}} را بر متابولیسم سلولی پس از آسیب نشان می‌دهند. این مطالعات با هم، امکان محافظت در برابر انواع مختلف AKI و در نتیجه بهبود میزان بقا در مدل‌های جوندگان از طریق دینامین به عنوان یک پروکسی را تایید می‌کنند.

تثبیت همزمان اکتین درسلول های کلیه متمایزآسیب نفرون را کاهش می دهد. ما قبلا نشان داده‌ایم که فعال‌سازی دارویی پلیمریزاسیون اکتین مبتنی بر دینامین، ساختار و عملکرد سلول‌های پودوسیت را در مدل‌های مختلف موش CKD12 بازسازی کرد. در این مطالعه، ما توانایی دینامین را برای حفظ یکپارچگی سلول‌های لوله‌ای در هنگام آسیب حاد با اتصال متقابل اسکلت سلولی اکتین نشان دادیم. با هم، این بینش ها ما را به تصور امکان مقابله همزمان با هر دو آسیب گلومرولی و لوله ای با هدف قرار دادن داروی دینامین سوق داد.

برای آزمایش این فرضیه، بررسی کردیم که آیا Bis-T-23 می‌تواند از دست دادن آن را به تاخیر بیندازدعملکرد کلیهدر مدل موش سندرم آلپورت (AS). AS یک شکل ارثی استنارسایی پیشرونده کلیهبه دلیل جهش در ژن‌های COL4A3، COL4A4 یا COL4A5 که با هم کلاژن نوع IV، جزء اصلی غشای پایه گلومرولی (GBM) را کد می‌کنند. اگر چه نقص اولیه در AS، افتادگی فرآیند پا و پروتئینوری است.

برای آزمایش این فرضیه، بررسی کردیم که آیا Bis-T-23 می‌تواند از دست دادن آن را به تاخیر بیندازدعملکرد کلیهدر مدل موش سندرم آلپورت (AS). AS یک شکل ارثی استنارسایی پیشرونده کلیهبه دلیل جهش در ژن‌های COL4A3، COL4A4 یا COL4A5 که با هم کلاژن نوع IV، جزء اصلی غشای پایه گلومرولی (GBM) را کد می‌کنند. اگر چه نقص اولیه در AS، افتادگی فرآیند پا و پروتئینوری است.

بحث از زمان شناسایی برهمکنش‌های مستقیم دینامین-اکتین10، شواهد رو به رشدی این GTPase را به عنوان یکی از تنظیم‌کننده‌های اصلی اسکلت سلولی اکتین در سلول نشان می‌دهد. بر خلاف ABPهای متعارف، مکانیسم‌هایی که توسط آن دینامین بر اکتین تأثیر می‌گذارد، هم بسیار متنوع و هم از نوع سلولی خاص هستند. این به دلیل ترکیب حالت های الیگومریزاسیون چندگانه دینامین و توانایی آن در اتصال F-اکتین توسط دو محل اتصال مختلف است. فعل و انفعالات F-اکتین با حلقه‌ها و مارپیچ‌های دینامین از طریق PRD ترمینال C آن منجر به بسته‌های اکتین و هیپر-بسته‌ها می‌شود که در تشکیل filopodia56 و برآمدگی‌های غشایی در طول همجوشی میوبلاست نقش دارند. فعل و انفعالات بین دامنه میانی دینامین و F-اکتین در تنظیم شبکه های اکتین در lamellipodia26، سازمان اسکلت سلولی پس سیناپسی، و توسعه اتصال عصبی عضلانی27، سفتی بسته اکتین در اندوزوم ها در طول همجوشی میوبلاست25، و تشکیل فرآیند پادوسیت نقش دارد. در حالی که تشکیل فرآیندهای پا توسط پلیمریزاسیون اکتین تحریک شده توسط دینامین انجام می شود، این مطالعه نشان می دهد که مکانیسم مولکولی که توسط آن دینامین بر سایر فرآیندهای اکتین محور تأثیر می گذارد ممکن است تا حدی به دلیل توانایی آن در پیوند متقابل F-اکتین به شبکه های شاخه ای باشد. . مطالعه فعلی ما نقش تشکیل شبکه وابسته به دینامین را گسترش می‌دهد تا شامل تشکیل قشر اکتومیوزین در غشای آپیکال سلول‌های اپیتلیال پلاریزه و ایجاد سفتی سلولی شود.

بحث از زمان شناسایی برهمکنش‌های مستقیم دینامین-اکتین10، شواهد رو به رشدی این GTPase را به عنوان یکی از تنظیم‌کننده‌های اصلی اسکلت سلولی اکتین در سلول نشان می‌دهد. بر خلاف ABPهای متعارف، مکانیسم‌هایی که توسط آن دینامین بر اکتین تأثیر می‌گذارد، هم بسیار متنوع و هم از نوع سلولی خاص هستند. این به دلیل ترکیب حالت های الیگومریزاسیون چندگانه دینامین و توانایی آن در اتصال F-اکتین توسط دو محل اتصال مختلف است. فعل و انفعالات F-اکتین با حلقه‌ها و مارپیچ‌های دینامین از طریق PRD ترمینال C آن منجر به بسته‌های اکتین و هیپر-بسته‌ها می‌شود که در تشکیل filopodia56 و برآمدگی‌های غشایی در طول همجوشی میوبلاست نقش دارند. فعل و انفعالات بین دامنه میانی دینامین و F-اکتین در تنظیم شبکه های اکتین در lamellipodia26، سازمان اسکلت سلولی پس سیناپسی، و توسعه اتصال عصبی عضلانی27، سفتی بسته اکتین در اندوزوم ها در طول همجوشی میوبلاست25، و تشکیل فرآیند پادوسیت نقش دارد. در حالی که تشکیل فرآیندهای پا توسط پلیمریزاسیون اکتین تحریک شده توسط دینامین انجام می شود، این مطالعه نشان می دهد که مکانیسم مولکولی که توسط آن دینامین بر سایر فرآیندهای اکتین محور تأثیر می گذارد ممکن است تا حدی به دلیل توانایی آن در پیوند متقابل F-اکتین به شبکه های شاخه ای باشد. . مطالعه فعلی ما نقش تشکیل شبکه وابسته به دینامین را گسترش می‌دهد تا شامل تشکیل قشر اکتومیوزین در غشای آپیکال سلول‌های اپیتلیال پلاریزه و ایجاد سفتی سلولی شود.

به خوبی ثابت شده است کهCKD و AKIاگرچه از نظر مکانیکی متمایز هستند، اما ارتباط نزدیکی با یکدیگر دارند و AKI به عنوان یک عامل خطر برای توسعه و پیشرفت بیماری مزمن کلیه شناخته می شود. این امر به ویژه با توجه به همه‌گیری بیماری کروناویروس فعلی 2019 (COVID{3}})، که در آن بیماران بستری با COVID{4}} و سطح پلاسمایی suPAR بالا، AKI را با سرعت‌های هشداردهنده‌ای ایجاد می‌کنند، مرتبط است. سطوح بالای suPAR با هر دو AKI47 و CKD69 مرتبط است و پیوند مولکولی بین این دو را بیشتر تقویت می کند.بیماری های کلیوی مشخص. بنابراین، توسعه داروهایی که می‌توانند در برابر مجموعه‌ای از توهین‌های کلیوی روی انواع سلول‌های متعدد محافظت کنند، به طور فزاینده‌ای ضروری می‌شود. در اینجا ما اثر محافظتی مجدد یک آگونیست دینامین را در یک مدل ژنتیکی AS گزارش می‌کنیم که هم به سلول‌های پادوسیت و هم به سلول‌های لوله‌ای آسیب نشان می‌دهد. مطالعه ما یک رویکرد جامع برای توسعه درمان‌های جدید ایجاد می‌کند که با شبکه اکتین در انواع سلول‌های متعدد در نفرون درگیر هستند و تعداد بیشماری را درمان می‌کنند.بیماری های کلیویبدون توجه به محل آسیب.

روش ها کشت سلولی سلول های MDCK (کلیه سگ مدین-داربی) (ATCC CCL{1}}) و سلول های مجرای جمع کننده مدولار داخلی موش (mIMCD-3) (ATCC CRL-2123) در DMEM/F12 (ThermoFisher) رشد کردند. علمی) حاوی 10٪ سرم جنین گاوی (FBS) و 1X آنتی بیوتیک-ضد قارچ (پنی سیلین، استرپتومایسین، و آمفوتریسین B؛ Gibco). سلول های LLC-PK1 (Lilly Laboratories Cell-Porcine Kidney 1) (ATCC CL{12}}) در DMEM با 4.5 گرم در لیتر گلوکز، ال-گلوتامین، پیروات سدیم (Corning)، 10% FBS و 1X آنتی بیوتیک رشد کردند. -ضد قارچ سلول های MDCK و LLC-PK1 به ترتیب برای 24 ساعت و 72 ساعت قبل از شروع آزمایش رشد کردند. HK{23}} (کلیه انسان 2سلول‌های لوله‌ای پروگزیمال (ATCC CRL-2190) در محیط DMEM/Ham's F12 (Corning) حاوی 10٪ FBS، 100 U/ml پنی‌سیلین و 100 ug/ml استرپتومایسین برای آزمایش‌های انرژی زیستی کشت داده شدند. برای تجزیه و تحلیل وضعیت اسکلت سلولی اکتین و کربونیلاسیون سلولی، سلول‌های HK{5}} در DMEM F{6}} (ATCC) حاوی 10% FBS، 1X آنتی‌بیوتیک-آنتی‌میکوتیک و 1X ITS (انسولین، ترانسفرین و سدیم سلنیت) مکمل رسانه مایع (Sigma-Aldrich). برای ایجاد رده سلولی نابودکننده دینامین 2 (Dyn2) (mIMCD Dyn2KD)، سلول‌ها با لنتی ویروس‌های حامل shRNA ژن DNM2 (5'CGGCCTAGTGGACATGACAATGAACTCGAGTTCATTGTCATGTC CACTAGGTTTTTG3rambled-10) آلوده شدند. میکروگرم بر میلی لیتر). پس از 24 ساعت، محیط یک روز در میان با محیط های حاوی پورومایسین برای انتخاب ترانسفکتنت های پایدار جایگزین شد. میزان ناک داون Dyn2 با وسترن بلات ارزیابی شد. تمام رده های سلولی روی ورقه های شیشه ای پوشش داده شده با کلاژن رشد کردند.

شکل 6 فعال سازی فارماکولوژیک دینامین به طور همزمان اسکلت سلولی اکتین را در دو سلول مجزای نفرون هدف قرار می دهد. یک موش Col4a3-/- با DMSO (1%) یا Bis-T{5}} (2{8}} میلی‌گرم/کیلوگرم) یک بار در روز در سن 42 روزگی (روز 0) تزریق شد. تعداد مساوی از موش‌های تحت درمان با DMSO یا Bis-T{10}} (n=10 برای ACR؛ n=8 برای BUN) استفاده شد. نمودار نقطه پراکندگی سطح پروتئینوری (نسبت آلبومین به کراتینین، ACR) وآسیب کلیهتوسط سطح BUN تعیین می شود. نوارهای خطا، میانگین ± SD (مقادیر P در شکل، آزمون t دو دنباله جفت نشده گزارش شده است). b آزمون Log-Rank (Mantel-cox) برای تجزیه و تحلیل منحنی های بقای دو گروه درمانی انجام شد. c هیستوپاتولوژی نماینده کلیه با رنگ آمیزی اسید پریودیک شیف (PAS) و H&E بر روی نمونه های بدست آمده از موش Col4a3-/- که در (الف) شرح داده شده است، تعیین شد. حیوانات 62 روزه بودند (روز 20 درمان Bis-T{10}} یا DMSO). گلومرولوپاتی در حیوانات تحت درمان با Col4a3-/- DMSO با گسترش مزانژیال مشاهده شده در رنگ‌آمیزی PAS (پیکان سیاه)، افزایش سلولی و افزایش فضای بومن مشخص شد. تغییرات دژنراتیو در لوله ها شامل تشکیل گچ (*) و وجود اسکلروز توبولار بود. درمان Bis-T{15}} طی 20 روز تا حدی مورفولوژی گلومرول‌ها (کاهش انبساط مزانژیال) و توبول‌ها (عدم گچ‌گیری) را حفظ کرد. d شماتیک نفرون (تصویر اعتباری به موسسه ملی دیابت و گوارش وبیماری های کلیوی، مؤسسه ملی بهداشت) و مکانیسم درگیر در محافظت مجدد توسط دینامین. در سلول‌های اپیتلیال پلاریزه شده لوله‌های کلیوی، دینامین با اتصال رشته‌های اکتین به شبکه‌ها، قطبیت سلولی را ایجاد می‌کند (این مطالعه). توانایی Dynamin برای اتصال متقابل رشته ها به بسته ها در تشکیل میکروویلی ها دخیل است. آسیب حاد تولید ROS را افزایش می دهد، متابولیسم سلولی را تغییر می دهد و پویایی اکتین را مختل می کند، که باعث افزایش بیشتر تولید ROS می شود که منجر به آسیب اکسیداتیو سلولی بارزتر می شود (کربونیلاسیون بیومولکول). افزایش قابلیت اتصال متقابل دینامین در قشر اکتومیوزین، یکپارچگی سلول های لوله ای را حفظ می کند، که تا حدی آنها را از آسیب اکسیداتیو محافظت می کند. علاوه بر این، دینامین برای ساختار و عملکرد پودوسیت ها ضروری است. فعال سازی فارماکولوژیک دینامین با القای پلیمریزاسیون اکتین، فرآیندهای پا را بازیابی می کند. مطالعه ما نشان می‌دهد که فعال‌سازی دارویی الیگومریزاسیون دینامین با هدف قرار دادن دو مکانیسم مولکولی متمایز، یک اثر مفید دوگانه بر نفرون نشان می‌دهد: حفظ یکپارچگی پودوسیت‌ها (پلیمریزاسیون اکتین) و سلول‌های لوله‌ای کلیوی (پیوند متقاطع رشته‌های اکتین).

منابع

1. Basile، DP، Anderson، MD & Sutton، TA پاتوفیزیولوژی آسیب حاد کلیه.مقایسه فیزیول. 2, 1303–1353 (2012).

2. Bonventre, JV & Yang, L. پاتوفیزیولوژی سلولی آسیب حاد کلیه ایسکمیک.جی. کلین. سرمایه گذاری. 121, 4210–4221 (2011).

3. Campanale، JP، Sun، TY & Montell، DJ توسعه و پویایی قطبیت سلول در یک نگاه.J. Cell Sci. 130, 1201–1207 (2017).

4. Salbreux، G.، Charras، G. & Paluch، E. مکانیک قشر اکتین و مورفوژنز سلولی.Trends Cell Biol. 22, 536–545 (2012). 

5. Vicente-Manzanares, M., Ma, X., Adelstein, RS & Horwitz, AR Nonmuscle myosin II در چسبندگی و مهاجرت سلولی در مرکز قرار می گیرد.نات. کشیش مول. سلول بیول. 10, 778–790 (2009). 

6. Chugh, P. et al. ساختار قشر اکتین تنش سطحی سلول را تنظیم می کند.نات. سلول بیول. 19, 689–697 (2017). 7. Nguyen، LT & Hirst، LS چند شکلی شبکه های F-اکتین بسیار متقابل: کاوش در مقیاس های طولی چندگانه.فیزیک Rev. E Stat. Nonlin Soft Matter Phys. 83, 031910 (2011).

خدمات حمایتی Wecistanche - بزرگترین صادرکننده سیستانچ در چین:

ایمیل:wallence.suen@wecistanche.com

واتساپ/تلفن:+86 15292862950

فروشگاه:

https٪3a٪2f٪2fwww.xjcistanche.com٪2fcistanche-shop