اثر رنگدانه ضد پوستی هم افزایی گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید Cistanche و گلابیدین

چکیده برای تحقیق در مورد هم افزاییتأثیر Cistancheطرف فنیل اتانول (PHGS) و گلابیدین (GLA) در برابر رنگدانه پوست ، نسبت جرم PHG و GLA توسط آزمایش مهار تیروزیناز آزمایشگاهی ، 1 ، {1} diphenyl {2}} trinitrophenylhyhydrazine (dpph) و trinitrophenylhydrazine (dpph) بررسی شد. 2 ، 2- diazo-bis (3- اتیل بنزوتیازول {8}} cat accation سولفونیک اسید دیامونیوم کاتیون (ABTS+) آزمایشات رادیکال آزاد. به عنوان شاخص ها.

درالتهاب دهندهمدل سلولهای HACAT ناشی از لیپوپلی ساکارید (LPS) ایجاد شد ، و اثر ضد التهابی دارو با مهار انتشار اینترلوکین {1}} (IL {2}}) و فاکتور نکروز تومور- (TNF-) بررسی شد. مدل استرس اکسیداتیو سلولهای HACAT ناشی از هیدروکلراید آزادییزوبوآمیدین (AAPH) بیشتر تأسیس شد ، و فعالیت پیشرفته سوپراکسید دیسموتاز (SOD) و کاتالاز (CAT) به عنوان شاخص ها برای ارزیابی اثر آنتی اکسیدانی دارو استفاده شد. نسبت جرم بهینه PHG و GLA توسط سه مدل فوق الذکر تعیین شد. نتایج نشان داد که محلول های آبی PHG/GLA (1∶1) ، PHGS/GLA (5∶1) و PHGS/GLA (10∶1) تهیه شده با M (PHGS) ∶M (GLA) {11}} ∶1 ، 5∶1 ، 10∶1 به نمایش گذاشته می شود مهار کننده خوب و عوارض در مورد Tyrosistication Activity Activity and Tyrosistication and tyrosinase فعالیت. نرخ مهار PHG/GLA (1∶1) ،
PHGS/GLA (5∶1) و PHGS/GLA (1 {4}}} ∶1) محلول های آبی با غلظت جرم 0.4 گرم در لیتر به ترتیب 94.37 ٪ ، 92.93 ٪ و 88.06 ٪ بود. نرخ قابل استفاده از رادیکال های آزاد DPPH به ترتیب 89.44 ٪ ، 88.72 ، ٪ و 88.10 ٪ بود.
نرخ قابل حمل ABTS+ رادیکال های آزاد به ترتیب 1 {4}} 0.13 ٪ ، 100.0،1 ٪ و 99.87 ٪ بود. هنگامی که غلظت جرم PHG/GLA 25 ug/ml ، PHGS/GLA (1∶1) ، PHGS/GLA (5∶1) و PHGS/GLA (10∶1) محلول های آبی هیچ سمیت سمی به سلولهای B16F10 و HACAT نشان نداد. مهار فعالیت تیروزیناز در محلول آبی PHG/GLA (1 ∶ 1) قوی تر بود (فعالیت تیروزیناز 23.80 ٪) ، و میزان ملانین (90.90 ٪) به طور قابل توجهی کاهش یافت. محلول آبی PHGS/GLA (1∶1) بهترین اثر مهار را بر روی IL {25}}}} و TNF- آزاد نشان داد و توانایی تقویت فعالیت SOD و CAT را نشان داد. ترکیبی از PHG و GLA عملکرد هم افزایی خوب ، برتر A تا یک داروی منفرد و بالاتر از PHGS/ GLA (5∶1) و محلول آبی PHGS/ GLA (10∶1) را نشان داد. ترکیبی از PHG و GLA با مهار تولید ملانین و اثرات ضد التهابی و آنتی اکسیدانی نقش هم افزایی در بهبود رنگدانه های پوستی داشتند.

 

کلمات کلیدی گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید cistanche؛ گلابیدین ؛ اثرات هم افزایی ؛ رنگدانه ضد پوست ؛ آنتی اکسیداسیون ؛ ضد التهاب؛ مواد مخدر

 

 

 

Cistanche فنیل اتانول برای سفید کردن

اکنون با ما تماس بگیرید

خدمات حمایتی Wecistanche- بزرگترین صادر کننده Cistanche در چین:
ایمیل: wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/TEL: +86 15292862950

 

برای اطلاعات بیشتر در مورد تخفیف های احتمالی ، لطفاً با تیم خدمات مشتری ما تماس بگیرید. آنها خوشحال خواهند شد که به شما کمک کنند!

 

رنگدانه های پوستی یک بیماری پوستی است که در اثر عواملی مانند آسیب ، التهاب پوست و اشعه ماوراء بنفش [{0 {}}] ایجاد می شود. این عوامل ممکن است منجر به افزایش غیر طبیعی ملانین شود ، که به نوبه خود باعث ایجاد مشکلاتی مانند کلوازما ، فرسودگی و فشار خون پس از التهاب (PIH) [3-4] می شود و بر وضعیت روانی افراد و کیفیت زندگی تأثیر می گذارد. در حال حاضر ، درمان رنگدانه های پوستی عمدتاً بر مهار تیروزیناز ، یک آنزیم کلیدی در شکل گیری ملانین [3 {3}}] متمرکز است.
آخرین تحقیق [{{0}] نشان می دهد که رنگدانه پوست به ارتباط نزدیک بین کراتینوسیت ها و ملانوسیت ها در اپیدرم بستگی دارد. هنگامی که رادیکال های آزاد و عوامل التهابی آزاد شده توسط کراتینوسیت ها با ملانوسیت ها در تماس باشند ، آنها باعث افزایش فعالیت تیروزیناز می شوند و منجر به افزایش محتوای ملانین می شوند. آنها همچنین حمل و نقل ملانین را تسریع می کنند و باعث می شوند که ملانین روی سطح پوست قرار بگیرد. بنابراین ، درمان رنگدانه های پوستی نیاز به اقدامات مختلفی از جمله مهار تولید ملانین ، ضد التهاب و آنتی اکسیداسیون دارد.

در حال حاضر ، اگرچه آماده سازی داروهای سنتی ، مانند هیدروکینون و هیدروکینون ، در درمان رنگدانه های پوستی اثرات خاصی دارند ، اما روشهای عمل آنها نسبتاً مجرد است و ممکن است عوارض جانبی ایجاد کند [{{0}]. در مقایسه ، داروهای طبیعی از نظر طبیعی و خفیف هستند و به طور فزاینده ای توسط مصرف کنندگان شناخته می شوند و مورد ستایش قرار می گیرند [1 {1}}]. به طور خاص ، ترکیبی از عصاره های گیاهی چندگانه [{{2}] نه تنها می تواند تولید ملانین را مهار کند بلکه اثرات مختلفی مانند اثرات ضد التهابی و آنتی اکسیدانی نیز دارد ، و ایده ها و روش های جدیدی را برای درمان رنگدانه های پوستی ارائه می دهد.
Cistanche Deserticola MA دارای ارزش دارویی منحصر به فردی است و به عنوان "جینسنگ صحرا" شناخته می شود. مطالعات نشان داده اند که ماده خاص گلیکوزید فنیل اتانوئید موجود در Cistanche دارای فعالیت آنتی اکسیدانی خوبی است [15] و اثرات ضد التهابی [16] ، و همچنین دارای یک اثر مهاری تیروزیناز خاص است [17]. Glycyrrhizin یک جزء فلاونوئید در Glycyrrhiza Glabra L. است که دارای اثر سفید کننده قدرتمندی است و به عنوان "طلای سفید" شناخته می شود [18]. درمان طب سنتی چینی از رنگدانه های پوستی معمولاً شروع به افزایش سخل و کلیه می کند ، گرما و سم زدایی را از بین می برد و QI و خون را دوباره پر می کند [19].
گلیکوزیدهای فنیل اتانولی Cistanche Deserticola می تواند کلیه یانگ کلیه را دوباره پر کند و از ذات و خون بهره مند شود ، در حالی که گلیسیرریزا گلابرا می تواند طحال و چی را دوباره پر کند ، گرمای پاک را پاک کند و سم زدایی کند. این دو می توانند با هم کار کنند تا در برابر رنگدانه مقاومت کنند. ترکیبی از گلیکوزیدهای phenylethanoidc از cistanche deserticola و glabridin ممکن است در برابر رنگدانه های پوستی از ابعاد و اهداف متعدد مقاومت کند ، در برابر پرتوهای ماوراء بنفش در کل باند محافظت کند ، به طور هم افزایی فعالیت تیروزیناز را مهار می کند و تولید ملانین را کاهش می دهد و همچنین می تواند باعث کاهش و تسویه اسناد وراثت و عوامل مضر و هجومی شود. با این حال ، گزارش های کمی در ادبیات در مورد مهار هم افزایی رنگدانه های پوستی توسط گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید از Cistanche Desericola و Glabridin وجود دارد.
در این مقاله قصد دارد تا بررسی کند که آیا یک اثر هم افزایی بین pphenylethanoidglycosides cistanche deserticola (PHG) و گلابیدین (GLA) از طریق آزمایشات بیوشیمیایی آزمایشگاهی و ایجاد 3 مدل سلولی وجود دارد ، ND نسبت جرم بهینه بهینه را برای یک اثر هم افزایی بدست می آورد. انتظار می رود پشتیبانی نظری و راهنمایی های عملی برای توسعه محصولات طبیعی مراقبت از پوست گیاهان و کمک به ترویج صنعت مراقبت از پوست برای توسعه در جهت طبیعی ، سالم تر و کارآمدتر ارائه شود.

 

 

جایی که: یک واکنش ، جذب محلول نمونه ، محلول L-Tyrosine ، PBS و محلول تیروزیناز است. کنترل واکنش ، جذب محلول نمونه ، محلول L- تیروزین ، محلول N و PBS است. جای خالی ، جذب محلول L- تیروزین ، محلول PBS و محلول تیروزیناز است. کنترل خالی جذب محلول های L-Tyrosine و PBS است.

'

1.3.2 تعیین توانایی اصلاح رادیکال آزاد DPPH

First, accurately weigh {{0}}.0197 g (0.05 mmol) of DPPH and dissolve it in 250 mL of anhydrous ethanol to prepare a DPPH working solution with a concentration of 0.2 mmol/l. سپس ، PHGS و GLA به محلول اتانول PHGS و محلول GLA اتانول با غلظت جرم 15 {15}}. {22 {22}} 01 ، 0.01 ، 0.4 ، 0.8 ، 1.2 ، 1.6 ، 2.0 میلی گرم در میلی لیتر با استفاده از 50 ٪ اتانول در همان روش و محلول VC اتانول تهیه شد. سپس ، محلول اتانول PHGS و محلول اتانول GLA به طور مساوی در M (محلول PHGS) ∶ M (محلول GLA) {24}} ∶1 ، 20∶1 ، 10∶1 ، 5∶1 ، 1∶1 ، 1∶5 ، 1∶20 ، 1∶40 برای به دست آوردن 9 نوع از Phgs/Gla Gla Soledutions Soleds An (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) راه حل های اتانول. در آخر ، 100 میکرولیتر از محلول های نمونه مختلف و 100 میکرولیتر از محلول کار DPPH را به صفحه چاه {49}} اضافه کنید ، خوب مخلوط کنید و به مدت 30 دقیقه از نور در دمای اتاق دور شوید. میزان جذب را در 517 نانومتر با یک نشانگر آنزیم اندازه گیری کنید. VC به عنوان کنترل مثبت استفاده شد و هر آزمایش 3 بار تکرار شد. میزان تعویض رادیکال آزاد DPPH (٪) را با توجه به فرمول (2) محاسبه کنید.
DPPH نرخ تنظیم رادیکال آزاد/٪=(1 𝐴1 - 3𝐴2) × 100 (2) که در آن: A1 جذب محلول نمونه + محلول کار DPPH است. A2 جذب 50 ٪ اتانول با حجم + محلول کار DPPH است. A3 میزان جذب محلول نمونه {13}} ٪ اتانول با حجم است.

1.3.3 تعیین ABTS+ توانایی اصلاح رادیکال آزاد

ابتدا وزن 1 گرم (1.82 میلی مول) ABTS را وزن کنید و آن را در آب دیونیزه حل کنید تا یک محلول کار ABTS با غلظت نهایی 7.4 میلی مول در لیتر تهیه شود. وزن 5 {5} 5 گرم پتاسیم پرسولفات و آن را در آب دیونیزه حل کنید تا یک محل کار پتاسیم پرسولفات با غلظت نهایی 2.6 میلی مول در لیتر تهیه شود. محلول کار ABTS و محلول کار پتاسیم پرسولفات را در حجم مساوی مخلوط کرده و به مدت 12 ساعت در تاریکی واکنش نشان دهید تا محلول کار ABTS+ را تهیه کنید. سپس ، طبق روش در بخش 1.3.2 ، محلول PHGS اتانول ، محلول GLA اتانول ، محلول N و VC اتانول و همچنین PHGS/GLA (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) محلول اتانول را تهیه کنید.
سرانجام ، 40 میکرولیتر از راه حل های نمونه مختلف و 160 میکرولیتر از ABTS+ محلول کار را به صفحه چاه {{3} اضافه کنید ، خوب مخلوط کنید ، در دمای اتاق در تاریکی به مدت 6 دقیقه واکنش نشان دهید و با استفاده از یک خواننده ELISA ، میزان جذب محلول را در 734 نانومتر اندازه گیری کنید. نرخ تعویض رادیکال آزاد (٪) را با توجه به فرمول (3) محاسبه کنید.

 

از کجا: A1 جذب محلول نمونه + ABTS + محلول کار است. A2 جذب آب دیونیزه شده + ABTS + محلول کار است. A3 جذب محلول نمونه + آب دیونیزه شده است.

 

آزمایش سلولی 1.4

1.4.1 کشت سلولی

پس از احیای سلولهای B16F10 و HACAT ، آنها به محیط با گلوکز بالا DMEM (حاوی مخلوط 10 ٪ سرم گاوی جنین و 1 ٪ پنی سیلین استرپتومایسین توسط یک کسر جرم) تلقیح می شوند و در یک انکوباتور در 37 درجه ، 5 ٪ کسر حجم CO2 و 70 ٪ رطوبت به مدت 24 ساعت کشت می شوند. وضعیت رشد سلول در زیر میکروسکوپ مشاهده می شود و محیط با توجه به وضعیت رشد سلول جایگزین یا خرده کشت می شود.

 

1.4.2 گروه بندی آزمایشی

سلولهای B16F10 و HACAT در مرحله رشد لگاریتمی در صفحات {2}}}} با شماره سلول مناسب تلقیح می شوند و به مدت 24 ساعت کشت داده می شوند تا سلول ها بتوانند به دیوار چسبیده باشند. راه حل های نمونه غلظت جرم مختلف با استفاده از یک محیط کشت DMEM تهیه می شود. The normal group, model group, low-dose PhGs (125 ug/mL) group, medium-dose PhGs (250 ug/mL) group, high-dose PhGs (500 ug/mL) group, low-dose Gla (6.25 ug/mL) group, medium-dose Gla (12.5 ug/mL) group, high-dose Gla (25 ug/mL) group, and PhGs/Gla (1∶1) گروه ، گروه PHGS/GLA (5∶1) ، و PHGS/GLA (10∶1) گروه متوسط ​​کشت تنظیم شدند.

در مدل رنگدانه B16F10 ناشی از UVB ، سلولهای گروه مدل با 30 میکرولیتر از PBS (PH {4} 4) اضافه شدند و 3 سانتی متر مستقیماً زیر تابش UVB برای 110 ثانیه قرار دادند. گروه آزمایشی با 100 میکرولیتر از محلول نمونه غلظت جرم مختلف به مدت 1 ساعت تحت درمان قرار گرفت ، سپس با 30 میکرولیتر از PBS اضافه شد و 3 سانتی متر مستقیماً در زیر تابش UVB به مدت 110 ثانیه قرار گرفت. گروه عادی همیشه از محیط کشت DMEM با گلوکز بالا استفاده می کرد. گروه خالی با سلول تلقیح نشده است ، اما در عوض با مقدار مساوی از محیط کشت.

در مدل التهاب سلول HACAT ناشی از LPS ، گروه مدل با محلول PBS LPS در غلظت 20 Ug/ml به مدت 24 ساعت کشت داده شد. گروه آزمایشی با 100 میکرولیتر نمونه نمونه از غلظت جرم مختلف به مدت 24 ساعت تحت درمان قرار گرفت و سپس با 20 محلول LPS Ug/ml به مدت 24 ساعت اضافه شد. گروه عادی همیشه از محیط DMEM با گلوکز بالا استفاده می کرد. گروه خالی با سلولها تلقیح نشد ، اما با مقدار مساوی از محیط کشت.

در مدل استرس اکسیداتیو سلول HACAT ناشی از AAPH ، گروه مدل با 100 میلی لیتر AAPH (2.5 میلی مول) محلول با غلظت 25 میلی مول در لیتر به مدت 24 ساعت کشت داده شد. گروه آزمایشی با 100 میکرولیتر نمونه نمونه از غلظت جرم مختلف به مدت 24 ساعت تحت درمان قرار گرفت و سپس با محلول AAPH در غلظت 25mmol/L به مدت 24 ساعت اضافه شد. گروه عادی همیشه از محیط DMEM با گلوکز بالا استفاده می کرد. گروه خالی با سلولها تلقیح نشد ، اما با مقدار مساوی از محیط کشت.

هر گروه با 3 چاه تکراری تنظیم شده و در یک دستگاه جوجه کشی با 37 درجه ، 5 ٪ کسر حجم CO2 و رطوبت 70 ٪ کشت داده شد.

1.4.3 سنجش سمیت سمیت

از روش CCK8 برای تعیین سمیت سمیت استفاده شد. سلولهای B16F1 {3}} و HACAT در مرحله رشد لگاریتمی با تریپسین 0.25 ٪ به مدت 3 دقیقه هضم شدند. پس از خاتمه هضم ، محیط کشت به طور مکرر دمیده شد تا سیستم تعلیق سلول با چگالی 104 × 104 سلول در میلی لیتر ایجاد شود. سلولها به طور مساوی در صفحه چاه {8} ، 100 میکرولیتر در هر چاه تلقیح شدند و PBS به چاههای اطراف سلول ها اضافه شد. پس از رعایت سلولها به دیوار ، غلظت های مختلف جرم محلول نمونه اضافه شد ، 3 چاه تکثیر در هر گروه ، و در یک انکوباتور در 37 درجه ، 5 ٪ از حجم CO2 و 70 ٪ رطوبت برای 24 ، 48 و 72 ساعت کشت داده شد و سپس محلول دور ریخت. همه گروه ها با 100 میکرولیتر از محیط کشت کامل حاوی 10 ٪ کسر حجمی CCK8 اضافه شدند و به مدت 60 دقیقه انکوبه شدند. میزان جذب محلول در 450 نانومتر با استفاده از یک خواننده ELISA اندازه گیری شد. زنده ماندن سلول (٪) با توجه به فرمول (4) محاسبه شد.

 

 

جایی که: یک گروه آزمایشی جذب چاههای حاوی سلول و محلول نمونه تحت تابش UVB است. یک گروه عادی جذب چاههای حاوی سلول و محلول نمونه بدون تابش UVB است. یک گروه خالی جذب چاههای حاوی محیط کشت اما سلول نیست.

 

1.4.5 تعیین محتوای ملانین

محتوای ملانین با استفاده از روش لیز NaOH تعیین شد. پس از درمان سلولها به مدت 72 ساعت با توجه به روش در بخش 1.4.2 ، مایع رویی دور ریخته شد و دو بار با PBS شسته شد و 100 میکرولیتر محلول آبی NaOH حاوی 10 ٪ DMSO با حجم (غلظت 1 مول در لیتر) اضافه شد. پس از قرار دادن در یک اجاق 90 درجه به مدت 1 ساعت ، جذب محلول در 490 نانومتر توسط یک نشانگر آنزیم تعیین شد. این آزمایش 3 بار تکرار شد. محتوای ملانین (٪) با توجه به فرمول (5) محاسبه شد.

 

1.5 تعیین محتوای التهابی و شاخص استرس اکسیداتیو

پس از درمان سلولها به مدت 48 ساعت با توجه به روش در بخش 1.4.2 ، سلولهای HACAT در هر گروه با یک اسکریپت سلولی جمع آوری شده ، سانتریفیوژ جمع آوری شد و مایع رویی جمع آوری شد. محتوای IL {4}} و TNF- مطابق دستورالعمل کیت ELISA تعیین شد.
پس از درمان سلولها به مدت 48 ساعت با توجه به روش در بخش 1.4.2 ، سلولهای HACAT در هر گروه با یک اسکرابر سلول جمع آوری شدند و سلول ها با انجماد و ذوب مکرر شکسته شدند. سلولها در 12000 R/دقیقه در 4 درجه به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ شدند و مایع رویی جمع آوری شد. فعالیت SOD و محتوای CAT مطابق دستورالعمل کیت ELISA تعیین شد.

1.6 تعیین شاخص ترکیبی
از روش شاخص ترکیبی (CI) [20] برای تعیین اینکه آیا PHGS و GLA در نسبت های مختلف جرم در مهار فعالیت تیروزیناز و آنتی اکسیداسیون اثر هم افزایی دارند ، استفاده شد. شاخص ترکیبی طبق فرمول (6) محاسبه شد:

Wherein: D1 and D2 are the mass concentrations (mg/mL) of the two drugs when the activity reaches x% in the combined treatment; DX is the mass concentration (mg/mL) required for the activity to reach x% when the two substances are used alone. Compusyn software was used for calculation. CI>1 اثر آنتاگونیستی را نشان می دهد ، ci {1}} یک اثر افزودنی و CI را نشان می دهد<1 indicates a synergistic effect.

 

1.7 تجزیه و تحلیل داده ها

تمام داده ها به عنوان "میانگین حسابی انحراف استاندارد (𝑥̅ ±)" بیان شده اند. نمودار منشور 9.5. 0 برای تجزیه و تحلیل آماری استفاده شد. از تجزیه و تحلیل واریانس یک طرفه برای مقایسه بین چندین گروه استفاده شد. ص.<0.05 was considered statistically significant.