جوشانده Tongluo Digui با ترویج اتوفاژی پودوسیت ها آسیب کلیوی را در موش های دیابتی درمان می کند.

مخاطب:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساپ: 008618081934791

HAN Jiarui، ZHANG Yage، SHI Xiujie، PENG Zining، XING Yufeng، PANG Xinxin

خلاصه

هدف، واقعگرایانه:

بررسی اثرات جوشانده Tongluo Digui بر آسیب کلیوی و اتوفاژی پودوسیت ناشی از استرپتوزوتوسین در موش های صحرایی دیابتی.

مواد و روش ها:

موش های صحرایی نر نژاد Sprague-Dawley به طور تصادفی به شش گروه معمولی، مدل، جوشانده Tongluo Digui (دوز بالا، متوسط ​​و کم) و والسارتان تقسیم شدند. استرپتوزوتوسین به صورت داخل صفاقی برای تکرار مدل حیوانی دیابتی تزریق شد. پس از 8 هفته، پروتئینوری برای ایجاد مدل نفروپاتی دیابتی مورد بررسی قرار گرفت. درمان ها روزانه از طریق مسیر داخل معده انجام شد. در 16 هفته پس از گاواژ، غلظت پروتئین ادرار 24 ساعته، گلوکز خون، کراتینین سرم و غلظت نیتروژن اوره را تعیین کردیم. سپس موش‌ها قربانی شدند و کلیه‌ها برداشت و با اسید پریودیک شیف رنگ‌آمیزی شدند تا تغییرات پاتولوژیک در گلومرول‌ها از جمله پودوسیت‌های گلومرولی با میکروسکوپ الکترونی عبوری ارزیابی شود. از آنالیز وسترن بلات برای تعیین بیان پروتئین نفرین، پودوسین، p62، beclin{6}}، LC3Ⅱ/Ⅰ و p-mTOR/mTOR در بافت کلیه استفاده شد.

نتایج:

در مقایسه با گروه مدل، جوشانده Tongluo Digui با کاهش غلظت پروتئین ادرار 24 ساعته، گلوکز خون، هموگلوبین A1c، کراتینین سرم، غلظت نیتروژن اوره، پروتئین کل سرم و آلبومین همراه بود. به طور همزمان، گشاد شدن مزانژال مزانژال و همجوشی فرآیندهای پا کاهش یافت، غشای پایه گلومرولی به طور قابل توجهی ضخیم نشد و تعداد پودوسیت ها و تعداد اتوفاگوزوم ها در پودوسیت ها افزایش یافت. علاوه بر این، بیان پروتئین نفرین، پودوسین، LC3Ⅱ و beclin{3}} در بافت کلیه تنظیم شد، در حالی که بیان پروتئین p62 کاهش یافت و فسفوریلاسیون mTOR مهار شد.

نتیجه:

جوشانده Tongluo Digui ممکن است با مهار فسفوریلاسیون mTOR از پیشرفت نفروپاتی دیابتی جلوگیری کند، در نتیجه باعث افزایش اتوفاژی برای محافظت از سلول‌های بدن و کاهش پروتئینوری می‌شود.

کلید واژه ها:نفروپاتی های دیابتی؛ خویشتن خواری؛ پودوسیت؛ جوشانده Tongluo Digui

فواید ساقه سیستانچبرایعملکرد کلیه

مقدمه

نفروپاتی دیابتی (DN) یکی از عوارض میکروواسکولار شدید دیابت است که 30 درصد -40 درصد از بیماران دیابتی از بیماری کلیوی رنج می برند. با افزایش بروز دیابت، DN به علت اصلی بیماری کلیوی در مرحله نهایی در سراسر جهان تبدیل شده است. این یک بار اقتصادی سنگین برای خانواده ها و جامعه است.

آسیب پودوسیت یکی از دلایل مهم پیشرفت DN است. به عنوان یک سلول نهایی تمایز یافته، اتوفاژی نقش مهمی در حفظ عملکرد فیزیولوژیکی پودوسیت ها ایفا می کند. 2،3 در یک حالت فیزیولوژیکی طبیعی، درجه بالایی از اتوفاژی در پودوسیت ها وجود دارد که پروتئین ها و اندامک های آسیب دیده را حذف می کند. در محیط، اتوفاژی پودوسیت مهار می شود، که نشان می دهد اتوفاژی پودوسیت نقش مهمی در پاتوژنز DN ایفا می کند. نظریه طب سنتی چینی این است که استاز خون ویین کمبودمهم ترین علل DN هستند. بنابراین، درمان DN باید گردش خون را بهبود بخشد و یین را تغذیه کند و جوشانده Tongluo Digui برای این کار ایجاد شد. ما قبلا دریافتیم که جوشانده Tongluo Digui اثر درمانی مفیدی در DN دارد. در این مطالعه، هدف ما استفاده از مدل موش DN نوع 1 با استرپتوزوتوسین (STZ) برای ارزیابی اثر جوشانده Tongluo Digui بر آسیب کلیوی، اتوفاژی و مسیر سیگنالینگ mTOR بود. ما همچنین مکانیسم مولکولی زیربنایی جوشانده Tongluo Digui را در به تاخیر انداختن پیشرفت DN بررسی کردیم و شواهدی برای پیشگیری و درمان بالینی DN ارائه کردیم.

مواد و روش ها

حیوانات

موش صحرایی اسپراگ داولی بدون پاتوژن خاص (SPF) [n=60، نر، (10±150) گرم. شماره گواهی صلاحیت: SCXK (Yu) 2017-0001] از مرکز حیوانات آزمایشی هنان (Zhengzhou، چین) خریداری شد. چرخه نور استاندارد (نور 14 ساعت، 10 ساعت شب)، دمای داخل خانه (2 ± 23) درجه، رطوبت (40 درصد -50 درصد)، محل نگهداری (سه حیوان در هر قفس)، و تغذیه (خوراک استریل شده و آب آشامیدنی) استفاده شد. این آزمایش در آزمایشگاه مرکز تصویربرداری سلولی بیمارستان طب سنتی چینی هنان (ژنگژو، چین) تکمیل شد. همه آزمایش ها بر اساس راهنمای مراقبت و استفاده از حیوانات آزمایشگاهی منتشر شده توسط مؤسسه ملی بهداشت انجام شد.

مواد مخدر

کپسول والزارتان (Val) از Novartis Pharma Schweiz AG (X2307 CN-b، پکن، چین) خریداری شد. جوشانده Tongluo Digui شامل Shuichi (Hirudo) 12 گرم، Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) 30 گرم، Dihuang (Radix Rehmanniae) 20 گرم، Huangqi (Radix Astragali Perparata) 20 گرم، Danggui (Radix 30، ژینسیس آنژیکا) Alismatis) 10 گرم، Dahuang (Radix et Rhizoma Rhei) 15 گرم، Gancio (Radix Glycyrrhizae) 6 گرم. گیاهان چینی از بیمارستان طب سنتی چینی هنان (Zhengzhou، چین) خریداری شد.

طراحی تجربی

موش ها به طور تصادفی به شش گروه شامل 10 موش تقسیم شدند: گروه کنترل (Ctrl)، گروه مدل DN (STZ)، مدل DN با گروه درمان Val (Val)، مدل DN با گروه درمان با جوشانده Tongluo Digui (HTL). مدل DN با گروه درمان با دوز متوسط ​​جوشانده Tongluo Digui (MTL) و مدل DN با گروه درمان با دوز کم جوشانده Tongluo Digui (LTL). شش گروه موش در 16 هفته پس از گاواژ قربانی شدند و کلیه ها جمع آوری شدند.

وال (1{19}} mg·kg-1·d-1) و جوشانده Tongluo Digui در سه دوز مختلف یک بار در روز به مدت 16 هفته به صورت گاواژ داده شد. دوزهای تجویز شده بر اساس معادله تبدیل دوزهای دارو بین حیوانات و انسان ها بود. دوز موش (mg/kg)=دوز انسان بالغ (mg/kg) × ضریب تبدیل (6.25). به گروه‌های با دوز بالا، متوسط ​​و دوز کم جوشانده Tongluo Digui به ترتیب 5.4، 2.7 و 1.35 گرم بر کیلوگرم - 1 · روز تا 1 گاواژ معده داده شد. موش ها به صورت هفتگی وزن شدند. ادرار 24- ساعت با استفاده از قفس‌های متابولیک در پایان هفته‌های 0، 12 و 24 جمع‌آوری شد. پس از پایان درمان (در هفته 24)، موش‌ها با تزریق زیر جلدی کلرال هیدرات بیهوش شدند و نمونه‌های کلیه و بافت خون برداشت و در دمای 80- درجه نگهداری شد. موش ها به رژیم غذایی حیوانات آزمایشگاهی معمولی و آب تمیز دسترسی آزاد داشتند (به جز مواردی که در زیر توضیح داده شده است).

گیاه سیستانچ

ایجاد مدل DN

STZ (سیگما، سنت لوئیس، MO، ایالات متحده آمریکا) برای القای دیابت همانطور که قبلاً توضیح داده شد استفاده شد. 7 همه 6 0 موش به مدت 12 ساعت قبل از آزمایش دسترسی محدودی به آب داشتند. از این تعداد، 50 موش یک بار تزریق داخل صفاقی STZ 60 میلی گرم بر کیلوگرم محلول در بافر سیترات (0.1 mol/L، pH 4.5) تجویز شد. دیابت با اندازه گیری غلظت گلوکز خون 72 ساعت پس از تزریق STZ تایید شد. حیوانات با غلظت گلوکز بیشتر یا مساوی 16.7 میلی مول در لیتر برای سه روز متوالی دیابتی در نظر گرفته شدند. پس از 8 هفته، موش ها در قفس های متابولیک جداگانه قرار گرفتند و ادرار به مدت 24 ساعت برای اندازه گیری میکروآلبومین ادرار (امارات متحده عربی) جمع آوری شد. مدل DN در به دست آوردن امارات متحده عربی بیشتر از یا برابر با 30 میلی گرم در 24 ساعت تأیید شد.

شاخص های بیوشیمیایی

برای ارزیابی عملکرد کلیوی حیوانات از ارزیابی سرم و ادرار استفاده شد. ادرار موش با استفاده از قفس متابولیک ارزیابی شد. نمونه خون موش با استفاده از روش دم برش گرفته شد. 8 نمونه سرم و ادرار تا زمان استفاده در دمای 80- درجه منجمد شد. غلظت کراتینین سرم، نیتروژن اوره خون، آلبومین و پروتئین ادرار با روش رادیوامونواسی اندازه گیری شد. سطوح هموگلوبین A1c (HbA1c)، پپتید C و انسولین با استفاده از کیت HbA1c ELISA (Crystal Chem INC، Elk Grove Village، IL، USA)، کیت C-peptide Elisa (Kainuo Bio Ltd.، پکن، چین) و انسولین اندازه گیری شد. کیت Elisa (شرکت Merck Millipore, Ltd., Bed Ford, MA, USA) به ترتیب دستورالعمل های سازنده را دنبال می کند. اسید اوریک، پروتئین تام سرم (TP)، آلبومین (ALB)، آلانین آمینوترانسفراز (ALT) و آسپارتات آمینوترانسفراز (AST) در موش‌ها توسط یک آنالایزر بیوشیمیایی خودکار تعیین شد.

بررسی هیستوپاتولوژیک

بافت کلیه تثبیت شده با فرمالین در پارافین جاسازی شد، در مقاطع ضخامت 3-4 میکرومتر برش داده شد و با اسید پریودیک شیف (PAS) رنگ آمیزی شد. تغییرات مورفولوژیکی در بافت کلیه، از جمله تکثیر سلول های مزانژیال، انفیلتراسیون سلولی، و تغییرات ماتریکس مزانژیال، برای هر بخش رنگ آمیزی شده توسط میکروسکوپ نوری (NIKON D3100) (400 ×) مورد بررسی قرار گرفت.

میکروسکوپ الکترونی عبوری

از TEM برای مشاهده مورفولوژی سلول‌های پودوسیت و مزانژیال در بافت کلیه استفاده شد. بافت های تازه کلیه به بلوک ها تقسیم شدند (< 1="" mm3="" ),="" were="" quickly="" fixed="" in="" 2%="" phosphate-buffered="" glutaraldehyde="" for="" at="" least="" 2="" h,="" washed="" three="" times="" with="" pbs,="" fixed="" in="" 1%="" osmium="" tetroxide="" for="" 2="" h,="" and="" then="" embedded="" in="" acetone="" wrap="" after="" dehydration.="" specimens="" were="" sliced="" in="" 50-60="" nm="" ultrathin="" sections,="" double-stained="" with="" 3%="" uranyl="" acetate="" and="" lead="" citrate,="" and="" then="" examined="" under="" a="" tem="" (jeol-jem-1400="" plus,="" japan="" electron="" optics="" laboratory,="">

تجزیه و تحلیل وسترن بلات

پروتئین کل از بافت کلیه توسط بافر لیز پروتئین (Solarbio Biotech، پکن، چین) استخراج شد. غلظت پروتئین در مایع رویی توسط کیت سنجش BCA (Solarbio Biotech، Beijing، China، PC{21}}020) آزمایش شد. نمونه های حاوی 40 گرم پروتئین بر روی ژل الکتروفورز 12 درصدی SDS-پلی آکریل آمید (SDS PAGE) (Applygen, Beijing, China, B1004) جدا شدند و سپس به یک غشای فیلتر نیتروسلولزی (Solar bio Biotech, Beijing, China) منتقل شدند. پس از مسدود کردن با شیر بدون چربی 5 درصد در دمای اتاق به مدت 2 ساعت، -اکتین (Proteintech، شماره مقاله: 60008-1-lg)، LC3II/I (Ab cam، شماره مورد: ab48394)، P62 (Proteintech، شماره مورد: 18420-1-AP)، beclin-1 (تکنولوژی پروتئین، شماره مورد: 11306-1-AP)، p-mTOR (CST، شماره مورد: #5536)، mTOR (CST، شماره مورد: # 2983)، نفرین (Abcam، شماره مورد: ab58968)، و پودوسین (هر کدام پروتئین، شماره مورد: 20384 -1-AP) اضافه شده و در دمای 4 درجه یک شبه انکوبه شدند. سپس این مخلوط به مدت 5 دقیقه قبل از افزودن آنتی بادی ثانویه (1∶2000) قبل از انکوباسیون در اتاق، پنج بار با TBS به اضافه 0.05 درصد Tween{23}} (Solar bio Biotech، Beijing, China) (TBS-T) شسته شد. درجه حرارت به مدت 1 ساعت، شستشوی پنج بار با TBST به مدت 5 دقیقه، در معرض توسعه رنگ با افزایش نورتابی شیمیایی (ECL، Millipore، Billerica، MA، ایالات متحده آمریکا) و قرار گرفتن در معرض با استفاده از نرم افزار ImageJ برای تجزیه و تحلیل مقیاس خاکستری نواری.

تحلیل آماری

داده ها با استفاده از نرم افزار SPSS (آمار IBM SPSS برای ویندوز، نسخه 23.{1}}. 2014، Armonk، NY، USA) تجزیه و تحلیل شد. تفاوت بین گروه ها با استفاده از آنالیز واریانس یک طرفه و سپس آزمون توکی مورد آزمایش قرار گرفت. داده ها به صورت میانگین ± انحراف معیار بیان شد. P <0.05 معنی="" دار="" در="" نظر="" گرفته="">

لوتئولین

نتایج

اثر محافظتی جوشانده Tongluo Digui بر کلیه موش DN

شاخص‌های بیوشیمیایی مانند گلوکز خون، هموگلوبین گلیکوزیله، کراتینین سرم، غلظت نیتروژن اوره خون و غلظت پروتئین ادرار {{0}}ساعت 16 هفته پس از گاواژ اندازه‌گیری شد. (میز 1). نتایج نشان داد که در مقایسه با گروه نرمال، گلوکز خون، هموگلوبین گلیکوزیله، کراتینین سرم، غلظت نیتروژن اوره خون، غلظت پروتئین ادرار ساعتی، TP و ALB در گروه مدل به طور معنی‌داری بیشتر بود (P < {{="" 7}}.01)،="" بدین="" ترتیب="" نشان="" می‌دهد="" که="" گروه="" مدل="" دارای="" اختلال="" در="" عملکرد="" کلیه="" بودند.="" در="" گروه="" val،="" هم="" غلظت="" کراتینین="" سرم="" و="" هم="" غلظت="" پروتئین="" ادرار="" 24="" ساعت="" کاهش="" یافت="" (05/0=""> P). علاوه بر این، در گروه دوز بالا جوشانده Tongluo Digui کاهش قابل توجهی در غلظت گلوکز خون، HbA1c، کراتینین سرم و غلظت نیتروژن اوره و همچنین دفع ادرار 24 ساعته مشاهده شد (01/0 > P). این اثرات وابسته به دوز بودند. تفاوت معنی داری در سطوح اسید اوریک، انسولین، ALT و AST در هر گروه از موش ها وجود نداشت. در مجموع، یافته‌های ما نشان داد که جوشانده Tongluo Digui آسیب کلیوی را کاهش داده و عملکرد کلیه را در موش‌های DN به روشی وابسته به دوز بهبود می‌بخشد.

تغییرات در پاتولوژی کلیه موش DN با رنگ آمیزی PAS پس از درمان جوشانده Tongluo Digui ارزیابی شد (شکل 1). در مقایسه با گروه نرمال، افزایش معنی‌داری در سلول‌های مزانژیال گلومرولی و استرومای مزانژیال همراه با گشاد شدن ناحیه مزانژیال در گروه مدل مشاهده شد. ناحیه مزانژیال گلومرولی در هر یک از سه سطح دوز جوشانده Tongluo Digui و در گروه Val افزایش یافت. علاوه بر این، این چهار گروه درمانی در مقایسه با گروه مدل، عرض ماتریکس مزانژیال را کاهش داده بودند و ناحیه مزانژیال گلومرولی در گروه جوشانده Tongluo Digui با دوز بالا کمتر از گروه Val بود. این یافته ها نشان داد که جوشانده Tongluo Digui پیشرفت ضایعات گلومرولی DN را به تاخیر می اندازد.

اثر جوشانده Tongluo Digui بر آسیب پودوسیت گلومرولی در موش DN

از آنالیز وسترن بلات برای تعیین بیان پروتئین های نشانگر پودوسیت نفرین و پودوسین استفاده شد (شکل 2). در مقایسه با گروه نرمال، بیان هر دو پروتئین در گروه مدل به طور قابل توجهی کاهش یافت (P < 0.01)،="" که="" نشان="" دهنده="" آسیب="" سلولی="" است.="" علاوه="" بر="" این،="" بیان="" نفرین="" و="" پودوسین="" در="" گروه‌های="" جوشانده="" tongluo="" digui="" در="" مقایسه="" با="" گروه="" مدل="" تنظیم="" شد="" (05/0=""> P).

اثر جوشانده Tongluo Digui بر اتوفاژی پودوسیت گلومرولی در موش DN

تغییرات در اتوفاگوزوم ها در پودوسیت های گلومرولی تحت TEM مشاهده شد (شکل 3). نتایج اتوفاگوزومی را در پودوسیت‌های گلومرولی گروه نرمال نشان داد. اتوفاگوزوم‌های پودوسیت در گروه مدل وجود نداشتند و فرآیندهای پای پودوسیت نیز ناپدید شدند. در سه گروه دوز جوشانده Tongluo Digui و گروه والزارتان، ما اتوفاگوزوم های پودوسیت گلومرولی را مشاهده کردیم که نشان می دهد جوشانده Tongluo Digui اتوفاژی پودوسیت را در موش DN افزایش می دهد. وسترن بلات برای تشخیص بیان پروتئین های مربوط به اتوفاژی P62، beclin{3}} و LC3 Ⅱ استفاده شد (شکل 4). در مقایسه با گروه نرمال، بیان beclin-1 و LC3Ⅱ در گروه مدل به طور قابل توجهی کاهش یافت (P < 0.01)،="" در="" حالی="" که="" بیان="" p62="" به="" طور="" قابل="" توجهی="" افزایش="" یافت="" (p="">< 0.01).="" این="" یافته="" ها="" نشان="" داد="" که="" اتوفاژی="" در="" موش="" dn="" ضعیف="" شده="" است.="" در="" مقایسه="" با="" گروه="" مدل،="" گروه="" دوز="" بالای="" جوشانده="" tongluo="" digui="" بیان="" beclin-1="" و="" lc3ⅱ="" را="" تنظیم="" کرد="" (0.05="">< p)،="" همراه="" با="" بیان="" پایین="" تنظیم‌شده="" p62.="" با="" هم،="" این="" نتایج="" نشان="" داد="" که="" اثر="" محافظتی="" کلیوی="" جوشانده="" tongluo="" digui="" در="" موش‌های="" صحرایی="" با="" dn="" ممکن="" است="" با="" افزایش="" اتوفاژی="" در="" سلول‌های="" کلیه="" مرتبط="">

جوشانده Tongluo Digui با مهار فسفوریلاسیون mTOR، اتوفاژی پودوسیت گلومرولی را در موش DN افزایش می دهد.

مهار فسفوریلاسیون mTOR باعث افزایش اتوفاژی می شود (شکل 5). در مقایسه با گروه نرمال، فسفوریلاسیون mTOR در گروه مدل افزایش یافت (P < 0.01)،="" در="" حالی="" که="" در="" گروه‌های="" جوشانده="" tongluo="" digui="" مهار="" شد="" (p=""><0.05). این="" نشان="" می‌دهد="" که="" جوشانده="" tongluo="" digui="" با="" مهار="" فعال‌سازی="" مسیر="" سیگنالینگ="" mtor،="" اتوفاژی="" پودوسیت="" را="" افزایش="" می‌دهد.="" مطالعات="" قبلی="" نشان="" داده="" اند="" که="" اتوفاژی="" از="" سلول="" های="" پادوسیت="" محافظت="" می="" کند="" و="" عملکرد="" کلیه="" را="" بهبود="" می="">

بحث

DN عمدتاً با علائم و نشانه هایی مانند وجود پروتئین ادراری، گلوکز خون بالا، پلی دیپسی، پلی فاژی و پلی اوری مشخص می شود. علائم مشابه طب سنتی چینی است، مانند "Xiao Ke"، "Guan Ge" و "edema". وقوع و ایجاد DN از اساس پاتولوژیک کمبود یین و استاز خون جدایی ناپذیر است.6 با ایجاد کمبود یین و استاز خون، کلیه به تدریج آسیب می بیند و در نتیجه از دست دادن پروتئین ادراری را نشان می دهد که بیشتر منجر به تشکیل میکروترومبوز می شود. فیبروز کلیه بیماران DN به ناچار از بیماری کلیوی در مرحله پایانی رنج می برند.11

جوشانده Tongluo Digui توسط Zhang Binghou، پزشک معروف طب سنتی چینی ایجاد شد و بر اساس سالها تجربه او در درمان DN.12، جوشانده 13 Tougluo Digui شامل Shuichi (Hirudo)، Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) است. Dihuang (Radix Rehmanniae)، Huangqi (Radix Astragali Perparata)، Danggui (Radix Angelicae Sinensis)، Ze Xie (Rhizoma Alismatis)، داهوانگ (Radix et Rhizoma Rhei)، گانسیو (Radix Glycyrrhizae). در میان آنها، Shuizhi (Hirudo) و Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) داروهای سلطنتی هستند که معتقدیم در تغذیه یین و ترویج گردش خون در DN نقش دارند. Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) ایمنی و حالت ترشحی بدن را بهبود می بخشد و پیری را به تاخیر می اندازد. 14 Shuizhi (Hirudo) دارای اثرات ضد انعقادی، ضد توموری، ضد التهابی و ضد فیبروتیک در میان سایر اقدامات دارویی است و می تواند کلیه ها را بهبود بخشد. تغییرات پاتولوژیک در DN برای کاهش قابل توجه غلظت کراتینین سرم و نیتروژن اوره خون، و کاهش دفع پروتئین ادراری. 15،16 در DN، آسیب پودوسیت نقش مهمی در سد فیلتراسیون غشای پایه گلومرولی و در تشکیل پروتئینوری ایفا می کند. پودوسین هر دو پروتئین غشای منفذی روی سطح پودوسیت ها هستند. این دو پروتئین با هم تعامل می کنند تا یک کمپلکس را تشکیل دهند که نقش کلیدی در عملکرد سد فیلتراسیون گلومرولی ایفا می کند. 18 توزیع غیر طبیعی پروتئین منجر به درجات مختلف پروتئینوری می شود.19 در این مطالعه، موش های DN نوع 1 ناشی از STZ افزایش نشان دادند در دفع پروتئین از طریق ادرار و اختلال در عملکرد کلیه در 24 ساعت. علاوه بر این، رنگ‌آمیزی PAS نشان داد که تعداد سلول‌های مزانژیال و ماتریکس مزانژیال در گروه مدل افزایش می‌یابد، در نتیجه نشان می‌دهد که مدل با موفقیت ایجاد شده است. دوزهای مختلف جوشانده Tongluo Digui غلظت پروتئین ادرار و کراتینین سرم 24 ساعت را کاهش داد و آسیب شناسی کلیوی موش DN را با کاهش سلول های مزانژیال و ماتریکس بهبود بخشید. تجزیه و تحلیل وسترن بلات نشان داد که بیان نفرین و پودوسین در گروه جوشانده Tongluo Digui در مقایسه با گروه مدل بیشتر بود، که نشان می‌دهد این فرمول با محافظت از پودوسیت‌ها، پیشرفت DN را در موش‌ها به تاخیر می‌اندازد.

اتوفاژی مسیری برای تخریب پروتئین‌های لیزوزومی در سلول‌ها است و نقش مهمی در پاکسازی پروتئین‌های آسیب‌دیده یا بیان بیش‌ازحد که هموستاز و یکپارچگی سلولی را حفظ می‌کنند، ایفا می‌کند. 20 اتوفاژی جدایی‌ناپذیر هموستاز لیزوزومی پودوسیت در دیابت است و افزایش اتوفاژی می‌تواند آسیب سلول‌های پودوسیت را کاهش دهد. .5 پس از از بین بردن ژن مربوط به اتوفاژی Atg5 در پودوسیت ها، موش ها به تدریج تجمع پروتئین در همه جا، آسیب میتوکندری و فعالیت اتوفاژی را در سلول های پادوسیت نشان دادند. پودوسیت ها آسیب دیدند و فرآیندهای پا ناپدید و ادغام شدند، که نشان می دهد اتوفاژی حفظ شده است. حفظ عملکرد طبیعی پودوسیت مهم است. در این مطالعه، ما اثر جوشانده Tongluo Digui را بر اتوفاژی در پودوسیت‌های گلومرولی با استفاده از آنالیز TEM و وسترن بلات بررسی کردیم. TEM نشان داد که تعداد اتوفاگوزوم‌های پودوسیت در هر گروه دوز جوشانده Tongluo Digui در مقایسه با گروه مدل افزایش یافته است. علاوه بر این، وسترن بلات بیان پروتئین های مرتبط با اتوفاژی LC3، beclin-1 و p62 را نشان داد. در مقایسه با گروه مدل، بیان LC3Ⅱ و beclin{11}} در گروه جوشانده Tongluo Digui به طور قابل توجهی افزایش یافت، در حالی که بیان پروتئین p62 به طور قابل توجهی کاهش یافت. این یافته ها نشان داد که جوشانده Tongluo Digui باعث افزایش سطح اتوفاژی در پودوسیت های گلومرولی می شود.

پروتئین هدف راپامایسین (mTOR) یکی از تنظیم کننده های اصلی اتوفاژی است.23 این پروتئین به طور گسترده در قشر کلیه و بصل النخاع توزیع می شود و در ایجاد آسیب پودوسیت DN نقش دارد. mTOR فعال و فسفریله می شود که منجر به فسفوریلاسیون اهداف پایین دست آن و مهار اتوفاژی می شود. لیو و همکاران 26 نشان دادند که مهارکننده mTOR، راپامایسین، به طور خاص به mTOR کیناز متصل می شود و فعالیت mTOR را مهار می کند، اتوفاژی پودوسیت را افزایش می دهد و از عملکرد کلیه محافظت می کند. ما دریافتیم که فسفوریلاسیون mTOR در گروه مدل افزایش یافته است و جوشانده Tongluo Digui این فرآیند را مهار می‌کند، که نشان می‌دهد جوشانده Tongluo Digui اتوفاژی را در پودوسیت‌ها افزایش می‌دهد و ممکن است فعال‌سازی مسیر سیگنالینگ mTOR را مهار کند.

به طور خلاصه، جوشانده Tongluo Digui ممکن است اتوفاژی را در پودوسیت ها مهار کند، از پودوسیت های گلومرولی محافظت کند، یکپارچگی غشای فیلتراسیون گلومرولی را حفظ کند، دفع پروتئین ادرار 24 ساعته را کاهش دهد و با مهار فعال شدن mTOR، پیشرفت DN را به تاخیر بیاندازد. این یافته‌ها بینش‌هایی را برای درک بیشتر اثر محافظتی جوشانده Tongluo Digui در DN ارائه می‌کنند، با این حال، مکانیسم زیربنایی درگیر باقی مانده است که روشن شود.

سیستانچ چیستبرای بیماری کلیوی

منابع
1 Tesch GH. نفروپاتی دیابتی - آیا این یک اختلال ایمنی است؟ Clin Sci 2017; 131(16): 2183-2199.
2 Li JJ، Kwak SJ، Jung DS، و همکاران. بیولوژی پودوسیت در نفروپاتی دیابتی Kidney Int Suppl 2007; (106): S{3}}S42.
3 Liu N، Xu L، Shi Y، Zhuang S. اتوفاژی پودوسیت: یک هدف درمانی بالقوه برای جلوگیری از پیشرفت نفروپاتی دیابتی. J Diabetes Res 2017; 2017 (4): 1-6.
4 Mizushima N، Komatsu M. Autophagy: بازسازی سلول ها و بافت ها. سلول 2011; 147(4): 728-741.
5 Tagawa A, Yasuda M, Kume S, et al. اختلال در اتوفاژی پودوسیت، پروتئینوری را در نفروپاتی دیابتی تشدید می کند. دیابت 2016; 65(3): 755-767.
6 Sun C، Xie QY، Meng QG. بررسی قانون توزیع سندرم TCM نفروپاتی دیابتی. Beijing Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao 2015; 38(4): 266-270.
7 Szkudelski T. مکانیسم اثر آلوکسان و استرپتوزوتوسین در سلول های B پانکراس موش صحرایی. Physiol Res 2001; 50(6):{4}}.
8 Dang WY، Hou LY، Wu HM، Yan XM، Zheng XF، Hao J. اثربخشی جوشانده Qingre Lishi Yishen بر فیبروز گلومرولی نفروپاتی ایمونوگلوبولین A در مدل موش صحرایی. J Tradit Chin Med 2019; 39(4): 516-523.
9 Lu MK، Gong XG، Guan KL. mTOR در عملکرد پودوسیت: آیا راپامایسین برای نفروپاتی دیابتی خوب است؟ سیکل سلولی 2011; 10(20): 3415-3416.
10 Hartleben B, Godel M, Meyer-Schlesinger C, et al. اتوفاژی بر حساسیت بیماری گلومرولی تأثیر می گذارد و هموستاز سلولی را در موش های مسن حفظ می کند. J Clin Invest 2010; 120(4): 1084-1096.
11 Sun GD، Li CY، Cui WP، و همکاران. مروری بر طب سنتی چینی گیاهی برای درمان نفروپاتی دیابتی. J Diabetes Res 2016; 2016: 5749857.
12 Zhao WJ، Cai Z، Meng Y، و همکاران. کاربرد روش تغذیه کننده کلیه یین ژانگ بینگو در درمان بیماری مزمن کلیه. پکن ژونگ یی یائو 2016; 35(4): 341-343.
13 Duan YF، Zhang HB. معرفی تجربه کاربردی پروفسور ژانگ بینگو. شین ژونگ یی 2012; 44 (4): 147-149.
14 یو XJ، چن SH، لو جی. بررسی تحقیق در مورد فارماکودینامیک لاک لاک پشت "Ziyin Bushen". Dang Dai Yi Xue 2009; 15(10): 15-17.
15 Pang XX، Tong Y، Li HP، Han JR. پیشرفت تحقیقات زالو و عصاره های آن در درمان نفروپاتی دیابتی. گوانگ مینگ ژونگ یی 2019; 34(1): 168-171.
16 Zhang ZL، Dong H. پیشرفت تحقیقاتی زالو و مواد موثره آن در درمان نفروپاتی دیابتی Zhong Xi Yi Jie He Yan Jiu 2018; 10 (02): 106- 110.
17 دای اچ، لیو کیو، لیو بی. پیشرفت تحقیقات در مورد مکانیسم کاهش سلول های بدن در نفروپاتی دیابتی. J Diabetes Res 2017; 2017: 2615286.
18 مارتین CE، Jones N. Nephrin سیگنالینگ در پودوسیت: نمای به روز شده تنظیم سیگنال در دیافراگم شکاف و فراتر از آن. Front Endocrinol (لوزان) 2018; 9: 302.
19 Jaakko P، Karl T. آرایش مولکولی سد فیلتراسیون گلومرولی. Biochem Bioph Res Co 2010; 396(1): 164-169.
20 Noboru M، Beth L، Ana Maria C، Klionsky DJ. اتوفاژی از طریق خود هضم سلولی با بیماری مبارزه می کند. طبیعت 2008; 451 (7182): 1069.
21 Lenoir O, Jasiek M, Henrique C, et al. سلول اندوتلیال
و اتوفاژی پودوسیت به طور هم افزایی از گلومرولواسکلروز ناشی از دیابت محافظت می کند. اتوفاژی 2015; 11(7): 1130-1145.
22 Ilatovskaya DV، Levchenko V، Lowing A، Shuyskiy LS، Palygin O، Staruschenko A. آسیب پودوسیت در نفروپاتی دیابتی: پیامدهای فعال سازی وابسته به آنژیوتانسین Ⅱ کانال های TRPC. Sci Rep 2015; 5: 17637.
23 Rabanal-Ruiz Y, Otten EG, Korolchuk VI. mTORC1 به عنوان دروازه اصلی اتوفاژی. Essays Biochem 2017; 61 (6): 565-584.
24 Kim YC، Guan KL. mTOR: یک هدف دارویی برای تنظیم اتوفاژی. J Clin Invest 2015; 125(1): 25-32.
25 Li XY، وانگ SS، Han Z، و همکاران. تریپتولید اتوفاژی را برای کاهش فیبروز کلیه دیابتی از طریق مسیر miR-141-3p/PTEN/Akt/mTOR بازیابی می‌کند. Mol Ther Nucleic Acids 2017; 9: 48-56.
26 Liu L, Yang L, Chang B, Zhang J, Guo Y, Yang X. اثرات محافظتی راپامایسین بر اتوفاژی سلولی در بافت کلیه موشهای صحرایی مبتلا به نفروپاتی دیابتی از طریق مسیر سیگنالینگ mTORS6K1-LC3 Ⅱ. Ren Fail 2018; 40(1): 492-497.