ارزیابی سم شناسی و اثرات محافظتی عصاره اتانولی برگ Cassia Spectabilis DC بر عملکرد کبد و کلیه موش های آلوده به پلاسمودیوم برگهی

1. معرفی

تا به امروز، مشکل ازپلاسمودیوممقاومت انگلی نسبت به داروهای ضد مالاریا موجود هنوز یک مشکل اصلی برای ریشه کنی مالاریا است [1-3]. بنابراین، تحقیقات در مورد کشف منابع جدید داروهای ضد مالاریا که یکی از آنها از گیاهان دارویی است، ادامه دارد [4].در داخل بدنودرونکشتگاهیمدل‌ها مدت‌هاست در آزمایش ضد مالاریا استفاده می‌شوند. در نیمه دوم قرن بیستم،پلاسمودیوم برگه اییاپلاسمودیوم yoeliiبرای آلوده کردن جوندگان استفاده شد. در همین حال،ص برگه ایرایج ترین گونه مورد استفاده برای مطالعه در مرحله کبدی، به ویژه تشکیل هیپنوزوئیت برای بررسی عود مالاریا شد [5-7].

برای دریافت فرمولاسیون گیاهی سیستانچ برای کلیه اینجا را کلیک کنید

یکی از گیاهان سنتی در اندونزی، Cassia spectabilis DC از خانواده Caesalpiniaceae، به طور تجربی در شرایط آزمایشگاهی علیه P. falciparum و در درمان مالاریا در داخل بدن در برابر P. berghei ثابت شده است [8، 9]، که نشان می دهد گیاه C. spectabilis DC است. پتانسیل زیادی برای توسعه بیشتر به عنوان کاندیدای داروهای ضد مالاریا دارد. مطالعات قبلی گزارش دادند که یک آزمایش in vivo بر روی 90 درصد عصاره اتانولی برگ C. spectabilis DC علیه P. berghei ANKA در موش‌های BALB/c نشان داد که مقدار ED50 131.5 میلی‌گرم بر کیلوگرم وزن بدن است [9] و به عنوان بسیار طبقه‌بندی می‌شود. فعالیت ضد مالاریا خوب [10].

علاوه بر این، عصاره، فراکسیون ها، زیربخش ها و ترکیبات جدا شده از C. spectabilis DC در شرایط آزمایشگاهی برای فعالیت های ضد مالاریا آزمایش شده اند. *e ترکیب فعال این گیاه با موفقیت به عنوان ترکیبی مشابه (–){{0}}هیدروکسی کاسین شناسایی شده است و آزمایش فعالیت ضد مالاریا در شرایط آزمایشگاهی آن IC50 بسیار پایین 0.016 میکروگرم در میلی لیتر را نشان داد. 11]، که به عنوان یک فعالیت ضد مالاریا بسیار قوی طبقه بندی می شود [12].

تحقیقات روی این گیاه در مورد غلبه بر مقاومت دارویی مالاریا با بررسی ایمنی و اثرات بهبود عصاره برگ C. spectabilis DC بر عملکرد کبد و کلیه در موش‌های آلوده به P. berghei به ANKA ادامه یافته است. مطالعات تحقیقاتی در مورد تأثیر گیاهان دارویی که دارای فعالیت ضد مالاریا بر عملکرد کبد و کلیه موش های آلوده به انگل هستند، به طور گسترده انجام شده است [13-16]، و همچنین آزمایش های سمیت حاد و تحت حاد [17-20]. کبد نقش مهمی در تنظیم فرآیندهای فیزیولوژیکی دارد. عضوی است که در چندین عملکرد حیاتی مانند متابولیسم، ترشح و ذخیره سازی نقش دارد. علاوه بر این، کبد نقش مهمی در سم زدایی و دفع ترکیبات درون زا و برون زا دارد [21-24].

عفونت مالاریا زمانی شروع می شود که اسپوروزویت ها توسط پشه آنوفل ماده آلوده به انگل مالاریا آلوده می شوند. در طول تغذیه با خون، آنوفل ماده آلوده مرحله اسپوروزویت انگل را تزریق می کند [25، 26]. پس از حدود یک ساعت سفر در بدن انسان، اسپوروزوئیدها سپس وارد کبد می شوند، به سلول های کبدی حمله می کنند و چرخه غیرجنسی اسکیزوگونی اگزواریتروسیتی را آغاز می کنند. در داخل سلول های کبدی، انگل ها به صورت غیرجنسی تکثیر می شوند تا زمانی که به شیزوت بالغ می رسند و در نهایت، تعداد زیادی مروزوئیت تولید شده و پس از آلوده شدن به ترکیدن هپاتوسیت وارد جریان خون می شوند. هپاتوسیت‌های آلوده E که باعث آسیب کبدی به دلیل پارگی سلول‌های کبدی و مروزوئیت‌های آلوده می‌شوند، وارد جریان خون شده و چرخه گلبول‌های قرمز خون را شروع می‌کنند [27، 28]. آسیبی که در سلول‌های کبدی ایجاد می‌شود می‌تواند آنزیم‌هایی را که روی عملکرد کبد کار می‌کنند، به ویژه آنزیم ترانس آمیناز، و تغییرات مورفولوژیکی در ظاهر کبد را افزایش دهد [29، 30]، مانند هپاتومگالی. هپاتواسپلنومگالی یک ویژگی مشترک عفونت مالاریا در انسان [31] و موش [32] است که در اثر مواجهه مزمن با انگل های مالاریا ایجاد می شود. با این حال، بدون بزرگ شدن کلیه در عفونت مالاریا.

اختلال عملکرد کبد را می توان با ترانس آمیناسیون کبدی گلوتامیک اگزالواستیک ترانس آمیناز پلاسما (SGOT) و گلوتامیک پیروویک ترانس آمیناز پلاسما (SGPT) منتشر شده در پلاسما، یا با بررسی بافت شناسی بافت تشخیص داد [33]. شایع ترین آسیب، فعال شدن مرگ سلولی آپوپتوز یا نکروز سلول های کبدی است [34-36]. درگیری کلیه قابل توجه بالینی با عفونت P. falciparum و P. malariae همراه است. عفونت P. falciparum تظاهرات حاد را ایجاد می کند، از بدون علامت، تا اختلالات ادراری، و اختلالات الکترولیتی خفیف برای نارسایی حاد کلیوی (ARF) یا آسیب حاد کلیه (AKI) که نیاز به حمایت دیالیز دارند [27، 37]. * موارد AKI در عوارض مالاریا به میزان بالای مرگ و میر کمک می کند که حدود 75٪ موارد است. * مطالعه بافت شناسی وجود گلومرولونفریت، نکروز حاد توبولار و نفریت بینابینی را به عنوان عامل کلیدی همودینامیک در AKI مرتبط با مالاریا نشان می دهد [38]. به طور کلی، درجه اختلال عملکرد کلیه را می توان با وجود مقادیر کافی پروتئین در ادرار و افزایش سطح اوره، کراتینین و الکترولیت های پلاسما تشخیص داد [39].

* سمیت 90 درصد عصاره اتانولی برگ C. spectabilis DC (EECS) در موش BALB/c، و به دنبال آن بررسی آنزیمی، ممکن است بر هیستوپاتولوژی و عملکرد کبد و کلیه پس از تجویز EECS تأثیر بگذارد.

2. مواد و روشها

2.1. مواد گیاهی و تهیه EECS. *e C. spectabilis

برگ‌های DC در LIPI (مرکز تحقیقات اندونزی)، باغ گیاه‌شناسی، پورودادی، جاوا شرقی، اندونزی خریداری و تعیین شدند (B-160/IPH.06/KS.02/III/ 2019). *e نمونه به عنوان هرباریوم در گروه فارماکوژنزی و فیتوشیمی، دانشکده داروسازی، دانشگاه Airlangga سپرده شد. *برگ ها را با آب لوله کشی کاملاً شستشو داده تا آلاینده های خارجی از بین برود، در دمای 45 درجه خشک شده و با آسیاب به صورت پودر در می آیند. عصاره گیری با خیساندن مواد گیاهی پودر (500 گرم) در یک فلاسک حاوی 2500 میلی لیتر اتانول 90 درصد (در دمای 25 تا 30 درجه) به مدت 3 × 24 ساعت انجام شد. حلال استخراج e جدا شد، از طریق کاغذ صافی فیلتر شد و تحت فشار کاهش یافته توسط تبخیر چرخشی تبخیر شد. *بازده عصاره اتانولی 1000 گرم وزن خشک پودر برگ C. spectabilis DC 20/10 درصد (وزنی/وزنی) بود و در این آزمایش مورد استفاده قرار گرفت.

2.2. حیوانات.

در این مطالعه از موش‌های نر BALB/c 6 تا 8 هفته با وزن 30-25 گرم استفاده شد. همه موش ها از مرکز دامپزشکی فارما، اداره کل دام و وزارت بهداشت دام و کشاورزی، سورابایا، جاوا شرقی، اندونزی به دست آمدند. حیوانات e تحت شرایط استاندارد قرار گرفتند و با رژیم غذایی و آب به طور آزاد تغذیه شدند. *تایید الکترونیکی پروتکل مطالعه از کمیته اخلاق برای تحقیقات حیوانات، دانشگاه ایر لانگگا، اندونزی، شماره 2.KE.181.10.2018 به دست آمد.

2.3. تست سمیت حاد.

EECS وزن شده و با 0.5% سدیم کربوکسی متیل سلولز (Na CMC) مجدداً معلق شد تا دوزهای مورد نظر به دست آید. موش‌های BALB/c قبل از تغذیه با عصاره به مدت 24 ساعت ناشتا بودند. حیوانات به سه گروه تقسیم شدند که هر گروه شامل 5 موش بود. * دوز e برای هر گروه 1250 بود. 2500; و 5، 000 میلی‌گرم بر کیلوگرم وزن بدن، به ترتیب. رفتار کلی هر موش به طور مداوم به مدت یک ساعت پس از هر دوز، به طور متناوب هر چهار ساعت، و پس از آن در یک دوره 24 ساعته مشاهده شد [40-42].

2.4. تست سمیت تحت حاد.

در تست سمیت تحت حاد، موش ها به سه گروه تقسیم شدند و هر گروه یک بار، پنج بار و ده بار با دوز خوراکی روزانه 150 میلی گرم بر کیلوگرم وزن بدن به مدت 28 روز تحت درمان با EECS قرار گرفتند. به گروه کنترل عادی فقط به طور آزاد غذا و نوشیدنی داده شد [43]. * حیوانات به مدت 28 روز برای هرگونه علامت سمیت مشاهده شدند. در پایان دوره مشاهده، همه حیوانات تحت بیهوشی اتر قربانی شدند و اندام های حیاتی مانند کبد و کلیه برای بررسی های کلی و هیستوپاتولوژیک از همه حیوانات خارج شدند.

2.5. انگل جوندگان.

حساسیت کلروکین Plasmodium berghei ANKA از مؤسسه بیومولکولی Eijkman، جاکارتا، اندونزی به دست آمد و با پاساژ سریالی که در این مطالعه استفاده شد، حفظ شد.

2.6. اثر EECS بر سطح پلاسمایی SGOT و SGPT.

*آزمایش یک آزمایش سرکوبگر بر اساس پیترز [44] بود. *آزمون سرکوب کننده قبل از ارزیابی EECS در سطح پلاسمایی SGOT و SGPT انجام شد. حیوانات e به P. berghei ANKA آلوده شدند و به پنج گروه A، B، C، D و E تقسیم شدند. و روزانه به مدت سه روز (D1-D3) ادامه یافت. گروه A به عنوان کنترل منفی 0.5% Na CMC را به صورت خوراکی دریافت کرد. به گروه‌های B و C به‌عنوان گروه‌های تحت درمان، EECS با دوز خوراکی 150 و 200 میلی‌گرم بر کیلوگرم وزن بدن به‌ترتیب داده شد. گروه D یک کنترل مثبت بود که کلروکین را با دوز خوراکی 100 میلی گرم بر کیلوگرم وزن بدن دریافت کرد. همچنین گروه E به عنوان کنترل سالم آلوده به انگل نبود و فقط به طور آزاد به آنها غذا و نوشیدنی داده شد. در روز چهارم (D4)، اسمیر خون هر موش تهیه و مورد بررسی میکروسکوپی قرار گرفت. علاوه بر این، پلاسما قبل از اندازه گیری سطوح SGOT و SGPT جمع آوری شد.

2.7. تأثیر EECS بر هیستوپاتولوژی کبد و کلیه.

در پایان دوره مشاهده، همه حیوانات تحت بیهوشی اتر قبل از برداشتن کبد و کلیه قربانی شدند. پس از توزین اندام‌ها، بافت‌ها در محلول فرمالدئید 10 درصد تثبیت شدند و برای رنگ‌آمیزی هماتوکسیلین-ائوزین (H&E) پردازش شدند. *مشاهده هیستوپاتولوژیک برای بررسی اثر سمی EECS بر روی سلول های دژنراتیو و نکروز بافت ها انجام شد. * e خسارت بر اساس Gibson-Corley و همکاران درجه بندی شد. [45].

2.8. تحلیل آماری.

* داده های e به صورت میانگین ± انحراف معیار (SD) نشان داده شد. از آنالیز واریانس یک‌طرفه (ANOVA) برای مقایسه داده‌های توزیع شده نرمال در بین تیمارها استفاده شد و پس از آن از یک آزمون مقایسه چندگانه تعقیبی زمانی که معنی‌داری متفاوتی بدست آمد، استفاده شد. هنگامی که داده ها به طور معمول توزیع نشد، از آزمون U-test Kruskal-Wallis و Mann-Whitney برای ارزیابی تفاوت بین تیمارها استفاده شد.

خدمات حمایتی Wecistanche - بزرگترین صادرکننده سیستانچ در چین:

ایمیل:wallence.suen@wecistanche.com

واتساپ/تلفن:+86 15292862950

خرید برای جزئیات بیشتر مشخصات:

https٪3a٪2f٪2fwww.xjcistanche.com٪2fcistanche-shop

برای دریافت عصاره طبیعی سیستانچ ارگانیک با 25% اکیناکوزید و 9% آکتئوزید برای کلیه اینجا را کلیک کنید