مزایای پلی ساکارید سیستانچ بر عملکرد سیستم ایمنی چیست؟

مخاطب: emily.li@wecistanche.com

فعالیت ایمونولوژیکی و مکانیسم پلی ساکارید سیستانش

زنگ کونلی، ژنگ ییفان، لو ژیلیانگ

[خلاصه]هدف: مطالعهمصونفعالیت ازسیستانچپلی ساکارید(CDPS) و مکانیسم آنمصونتنظیم در شرایط آزمایشگاهی روش‌ها: برای مشاهده اثر تنظیمی CDPS از روش رنگ‌سنجی تیازول آبی (MTT) استفاده شد.سیستانچ پلی ساکاریددر مورد IQS DEX TNF که از تکثیر لنفوسیت های تیموس موش در شرایط آزمایشگاهی جلوگیری می کند. CDPS (سیستانچ پلی ساکارید) برای انجام آنالیز چرخه سلولی و چرخه سلولی با استفاده از فلوسیتومتری استفاده شد. تعیین Ca2 داخل سلولی. نتایج: CDPS (سیستانچ پلی ساکاریددر غلظت های بالاتر می تواند در برابر اثر مهاری ISQDEX بر تکثیر لنفوسیت ها و اثر مهاری TNF با غلظت بالا بر تکثیر لنفوسیت ها مقاومت کند و اثر ترویج تکثیر TN F با غلظت پایین بر روی لنفوسیت ها را هم افزایی کند؛ 100ug/ml 200سیستانچ پلی ساکارید) می تواند به طور قابل توجهی سلول ها را در مرحله تقسیم افزایش دهد. غلظت بالاتر (100 گرم در میلی لیتر) CDPS (سیستانچ پلی ساکارید) می تواند به طور قابل توجهی غلظت یون کلسیم را در تیموسیت های موش افزایش دهد. نتیجه گیری: CDPS (سیستانچ پلی ساکارید) می‌تواند سلول‌ها را برای ورود به فاز تقسیم تحریک کند، و استنباط می‌شود که اثر ترویجی آن بر تکثیر لنفوسیت‌های تیموس موش به ترویج آزادسازی کلسیم در لنفوسیت‌های تیموس موش مربوط می‌شود.

سیستانچ(سیستانچدسرتیکولاYC Ma) یک ماده دارویی چینی کمیاب و گرانبها در کشور من است. این به عنوان درجه برتر در "شن نونگ ماتریا مدیکا" ذکر شده است.سیستانچدارای عملکرد تغذیه کننده خون، تغذیه کلیه و کمک به یانگ، مرطوب کردن روده ها و به تاخیر انداختن پیری است. تحقیقات فارماکولوژیک مدرن نشان می دهد کهسیستانچپلی ساکاریدمی تواند بدن را بهبود بخشدمصونعملکرد، سنتز DNA را تقویت می کند، قدرت بدنی را تقویت می کند، هوش را بهبود می بخشد و اثرات ضد پیری آشکاری دارد [1]. نویسنده مقررات CDPS را مطالعه کرد(پلی ساکارید سیستانچ) یک جزء پلی ساکارید ازسیستانچ، بر رویمصونعملکردلنفوسیت های موش

سیستانچ پلی ساکاریدترویجتکثیرلنفوسیت ها

1 مواد و روش ها

1.1 معرف ها و داروها.

RPM، I 1640 متوسط: GIB-CO; HEPES: FARCO; ال-گلوتامین: کارخانه معرف دانگ فنگ شانگهای. پنی سیلین و استرپتومایسین: کارخانه داروسازی شمال چین. Concanavalin (ConA)، MTT: SIGM A Company; فیتوهماگلوتینین (PHA): آزمایشگاه پزشکی شانگهای. ایزوپروترنول (ISO): کارخانه داروسازی شانگهای تیانفنگ؛ مرکاپتواتانول: شرکت فلوکا; سرم گوساله نوزاد: شرکت مهندسی زیستی Sijiqing; دگزامتازون (DEX) توسط دکتر ما لیانگ، اولین بیمارستان وابسته دانشکده پزشکی دانشگاه ژجیانگ ارائه شد. فاکتور سرکوبگر تومور (TNF) توسط یو یوهان، پروفسور گروه سلولی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه ژجیانگ ارائه شد. مابقی معرف ها همگی گریدهای تحلیلی تولید داخل هستند.

1.2 حیوانات آزمایشی.

موش ICR، نر، 68 هفته، با وزن 18-20 گرم، 22، از مرکز حیوانات آزمایشی ژجیانگ خریداری شد.

1.3 استخراج پلی ساکارید سیستانچ [2]:

سیستانچپلی ساکاریدتوسط آزمایشگاه ما استخراج می شود! پس از خرد کردن داروی خامسیستانچ، در اتانول داغ غوطه ور می شود، در آب جوش استخراج می شود و در اتانول رسوب می کند. ترکیب آنزیم خنثی با روش Sewag برای پروتئین زدایی، کروماتوگرافی تبادلی آنیون DEAE-Sephadex A- 50 و کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون Sephacry S{2}} برای به دست آوردن یک جزء واحد از CDPS (سیستانچ پلی ساکارید)). خشک نگه دارید، قبل از استفاده از RPMI1640 ناقص برای ایجاد غلظت مشخص استفاده کنید و با اولترافیلتراسیون استریل کنید.

1.4 آماده سازی لنفوسیت های طحال و تیموس [3]:

The mice were sacrificed by neck removal. The spleen or thymus was taken aseptically and sieved through a 200-mesh steel mesh. The Hanks solution containing porridge newborn calf serum was used to prepare a single-cell suspension. After centrifugation at 1500 r/min for 10 min, red blood cells were lysed with 0.01 mol/L Tris-NHCl hypotonic solution for 1 min, and then washed with Hanks liquid centrifugation. Finally, the cells were suspended in RPMI1640 containing 10% fresh calf serum for complete culture Solution (containing 2 mmol/LL glutamine, 100 mmol/L sodium pyruvate, 1 mmol/L mercaptoethanol, add penicillin 100 U/ml and streptomycin 100 μg/ml just before use), trypan blue count, live For cells>93، غلظت سلول های طحال را به X 10 در میلی لیتر و غلظت تیموسیت ها را بر روی 10 درجه در میلی لیتر تنظیم کنید.

1.5 واکنش تکثیر لنفوسیتی:با توجه به روش Mosmanmn [4] بهبود: 96-صفحه کشت سلول چاه، 10/ml سوسپانسیون سلول طحال یا آب 10/ml سوسپانسیون تیموسیت 100M1 و غلظت‌های مختلف دارو 10041 در هر چاه اضافه کنید. در انکوباتور CO2.37C به مدت 72 ساعت کشت کنید. 4 ساعت قبل از پایان کشت، 8μ1 MTT (5 میلی گرم در میلی لیتر) به هر چاهک اضافه کنید. در پایان کشت، 150 اینچ از مایع رویی را از هر چاه بیرون بکشید و 0.5 نیوتن ایزوپروپانول هیدروکلراید 150M1 اضافه کنید. به آرامی روی میکرو شیکر تکان دهید تا بلورهای آبی کاملا حل شوند. OD570 را روی میکروپلیت خوان اندازه بگیرید. هر آزمایشی را تنظیم کنید. به عنوان سه چاه تکراری اشاره کنید.

1.6 تعیین تأثیر بر چرخه سلولی [5]:

{{0}}صفحه کشت سلولی چاه، به هر چاهک 4 10 درجه / میلی لیتر سوسپانسیون تیموسیت اضافه کنید، معرف های مختلف و محلول پلی ساکارید را به 2 میلی لیتر در CO قوی اضافه کنید، 37 انکوباتور پس از کشت به مدت 72 ساعت، سانتریفیوژ کنید. با سرعت 1500r/min به مدت 15 دقیقه، مایع رویی را دور بریزید، 7 اتانول اضافه کنید تا سلول‌های رسوب‌شده را ثابت کند، در دمای 4 درجه سانتیگراد برای آزمایش آماده به کار نگهداری کنید، سلول‌ها را دو بار با PBS بشویید، سانتریفیوژ کنید با سرعت 1500r/min به مدت 15 دقیقه، دور بریزید. پس از هضم 0.5ml0.1 RNaseA در دمای 4C به مدت 30 دقیقه، 50ug/ml برمواستات به مدت 30 دقیقه در دمای 4C رنگ‌آمیزی شد و شدت فلورسانس نمونه‌های سلولی بر روی فلوسیتومتر FACScan اندازه‌گیری شد. 10،{22}} نقطه آزمایش سلولی برای هر نمونه جمع‌آوری شد و داده‌ها با استفاده از نرم‌افزار سه‌چرخه Mul تجزیه و تحلیل شدند.

1.7 تعیین غلظت یون کلسیم داخل سلولی [6]

تیموسیت های موش را به همان روش بالا مصرف کنید. در محیط کشت ناقص RPMIl640 تعلیق کنید و غلظت سلول را روی 10'/ml تنظیم کنید. 1 میلی لیتر سوسپانسیون تیموسیت و 1 میکرومولار به هر لوله آزمایشی محلول رنگ آمیزی Fluo{4}AM 5μ1، 2 درصد F-275μ1 اضافه کنید، پس از انکوباسیون در دمای 37 به مدت 30 دقیقه، دو بار با RPM1640 ناقص، 1500r/ شستشو دهید. دقیقه، به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید، مایع رویی را دور بیندازید و غلظت های مختلف پلی ساکارید و پلی ساکارید را به سلول های رسوب داده شده اضافه کنید. پس از ConA، شدت فلورسانس بر روی فلوسیتومتر FACScan اندازه گیری شد. داده های 10،{16}} نقطه آزمایش سلولی برای هر نمونه جمع آوری و توسط نرم افزار CELLQUEST تجزیه و تحلیل شد. 1.8 روش های آماری برای آنالیز واریانس استفاده شد و سیکل سلولی و اندازه گیری یون کلسیم توسط نرم افزار فلوسایتومتر آنالیز شد.

سیستانچ پلی ساکارید از سیستانش دسرتیکولا

2 نتایج

2.1 سیستانچ پلی ساکارید در شرایط آزمایشگاهی از تکثیر لنفوسیت های تیموس موش توسط ISO DEX TNF جلوگیری می کند.

آگونیست گیرنده آدرنرژیک ایزوپروترنول (ISO) و دسته ای از هورمون دگزامتازون قشر آدرنال (DEX) از تکثیر لنفوسیت CDPS جلوگیری می کنند.سیستانچ پلی ساکارید) در غلظت بالاتر (75 125ug/ml) می تواند در برابر اثر بازدارنده ISO DEX بر تکثیر لنفوسیت مقاومت کند (P<0.01) as="" shown="" in="" figure="" 1.="" tumor="" necrosis="" factor="" (tnf="" β)="" on="" lymphocytes="" at="" high="" concentration="" cdps="">سیستانچ پلی ساکارید(125 میکروگرم در میلی لیتر) در غلظت های بالاتر می تواند در برابر اثر مهاری TNF مقاومت کند و به طور هم افزایی تکثیر لنفوسیت ها با غلظت پایین TNF را تقویت کند (شکل 2)

2.2 تنظیم سیستانچ پلی ساکارید چرخه لنفوسیت تیموس

CDPS (سیستانچپلی ساکارید25 میکروگرم در میلی‌لیتر 100 میکروگرم در میلی‌لیتر 200# گرم بر میلی‌لیتر به مدت 72 ساعت روی لنفوسیت‌های تیموس موش اعمال شد، محتوای DNA سلول‌ها با FACS اندازه‌گیری شد و شاخص تکثیر (PI) محاسبه شد. طبق فرمول نتایج نشان می‌دهد که هر دو غلظت 100 میکروگرم بر میلی‌لیتر و 200 میکروگرم در میلی‌لیتر می‌توانند سلول‌ها را در مرحله تقسیم به طور قابل توجهی افزایش دهند و شاخص تکثیر (68.0 درصد، 56.6) هر دو به طور معنی‌داری بیشتر از گروه کنترل (44.6) و 200 میکروگرم در میلی‌لیتر است. گروه کمی کمتر از گروه 100 میکروگرم در میلی لیتر است زیرا در غلظت 200 میکروگرم در میلی لیتر، اثر آن بر تکثیر سلولی روند نزولی پیدا کرده است [7]. مقدار PI (5/47 درصد) در گروه 25 میکروگرم بر میلی‌لیتر به‌طور معنی‌داری بیشتر از گروه کنترل نبود.

2.3 اثر پلی ساکارید سیستانچ بر غلظت یون کلسیم در تیموسیت های موش

نتایج تجربی نشان می دهد که غلظت بالاتر (100 میکروگرم بر میلی لیتر) CDPS (سیستانچ پلی ساکاریده) می تواند به طور قابل توجهی افزایش غلظت یون کلسیم در تیموسیت موش را افزایش دهد در مقایسه با گروه کنترل، تفاوت معنی داری وجود دارد (P<0.01), and="" there="" is="" a="" certain="" effect="" relationship="" with="" the="" action="" time="" (figure="">

3 بحث

سیستانچ، معمولاً به عنوان شناخته شده است"جین سینگ صحرا"، ساقه گوشتی خشک و فلس دار استسیستانچ.سیستانچدارای عملکردهای تغذیه کننده یانگ کلیه، جوهر تغذیه کننده، خون و روده است. به نوعی هیجان قشر هیپوفیز-آدرنال تعلق دارد یا اثری هورمون مانند شبیه قشر آدرنال دارد. یک داروی با ارزش چینی که می تواند تنظیم کندمصونعملکرداز بدن. نتایج تحقیقات قبلی ما نشان می دهد که CDPS (سیستانچ پلی ساکاریددر شرایط آزمایشگاهی می‌تواند تکثیر لنفوسیت‌های T تیموس را که توسط ConA PHA فعال یا فعال نشده‌اند، افزایش دهد. در ترکیب با ConA PHA، دو نوع محرک سلول T وجود دارد، ما معتقدیم که CDPS (سیستانچ پلی ساکارید) یک باجوانت برای سلول های T است و ما همچنین دریافتیم که CDPS (سیستانچ پلی ساکاریدمی تواند ترشح لنفوسیت های طحال موش را در غلظت های بالاتر به طور قابل توجهی افزایش دهد [8]

برخی مطالعات نشان داده‌اند که TNF نوترکیب می‌تواند باعث آپوپتوز خوشه‌های لنفوسیت T طبیعی موش و انسان در شرایط آزمایشگاهی شود، و این اثر می‌تواند به طور بالقوه توسط IIL-2 IL-1 IFN و IIL-4 مهار شود. با دگزامتازون (DEX) می تواند با مهار بیان لنفوسیتی و ترشح IL{3}} و کاهش تولید IL با میل ترکیبی بالا، تکثیر لنفوسیت را مهار کند. این آزمایش نشان داد که غلظت بالاتر CDPS (سیستانچپلی ساکاریدمی تواند اثرات غلظت بالای TN F بر تکثیر لنفوسیت ها را خنثی کند. مهار، هم افزایی با غلظت کم TNF برای ترویج تکثیر لنفوسیت ها، و می تواند با اثر مهاری ISQ DEX بر تکثیر لنفوسیت مقابله کند. این اثرات دقیقاً از طریق CDPS (سیستانچپلی ساکارید) برای ترویج تکثیر لنفوسیت های T و اتوکرین توسط سلول های T IL-2 و سایر سیتوکین ها تکمیل می شود.

در سال های اخیر، مطالعات زیادی در مورد اثرات ایمونوفارماکولوژیک پلی ساکاریدهای گیاهی انجام شده است، اما مطالعات کمی در موردمصونمکانیسم تنظیم پلی ساکاریدها، به ویژه مسیر انتقال سیگنال پلی ساکاریدهایی که روی لنفوسیت ها با Ca2 به عنوان پیام رسان دوم عمل می کنند. گزارشی وجود ندارد. این آزمایش تحقیقات مقدماتی را در این زمینه انجام داد. مولکول های سیگنال دهی داخل سلولی شامل cAM R Ca، IP3 DG cGMP و غیره است که در میان آنها Ca» تأثیر فیزیولوژیکی بسیار مهمی بر سلول ها دارد. افزایش غلظت Ca2 داخل سلولی یک پدیده مهم در مراحل اولیه فعال شدن و تکثیر لنفوسیت ها است. این فرآیند عمدتاً در ده‌ها ثانیه تا چند دقیقه اول رخ می‌دهد که سلول‌ها توسط محرک‌ها فعال می‌شوند. راه کلاسیک فعال سازی سلول های T فسفاتیدیلینوزیتول (PIB) برای متابولیسم عضله فسفاتیدیل است. متابولیت الکل 1،4.{4}}اینوزیتول تری فسفات (IP3) می‌تواند با اتصال به گیرنده‌های مش داخلی، افزایش سطح Ca2 داخل سلولی و غلظت کلسیم داخل سلولی، آزادسازی Ca ذخیره شده در مش داخلی را افزایش دهد. * افزایش می‌یابد. بالا می‌تواند باعث تولید NF-AT (فاکتور برهنه سلول T فعال شده) شود، این دومی تأثیری بر بیان ژن IIL{8}} دارد. نتایج تجربی نشان می‌دهد که غلظت بالاتر (100 میکروگرم در میلی‌لیتر) ) از CDPS (سیستانچپلی ساکارید) برای 5 10 دقیقه مؤثر است زمان تأثیر قابل توجهی بر افزایش غلظت Ca* در تیموسیت‌های موش دارد و اثر هم افزایی با ConA دارد. بنابراین، ما حدس می زنیم که CDPS (سیستانچ پلی ساکارید) باعث آزادسازی کلسیم در لنفوسیت های تیموس موش برای افزایش غلظت یون کلسیم داخل سلولی می شود. افزایش بیان ژن IL{0}} را افزایش می دهد و منجر به تکثیر سلول های T می شود که یکی از پایه های نظری است.سیستانچپلی ساکاریدهااثر تنظیمی بر بدن

سیستانچ پلی ساکارید

منابع

1. در XiuHin، SU Yuke (وضعیت کلی تحقیقات فارماکولوژی درسیستانچاسکا 【J】. داروهای سنتی و گیاهی چینی ((داروهای گیاهی چینی). 1993.24(10. 550-552(به چینی))

2. ZHANG Weijiee (تکنولوژی بیوشیمیایی پلی ساکارید ترکیبی [M]. انتشارات دانشگاه هانگژو ژجیانگ (انتشارات دانشگاه ژجیانگ)، 1994. 16-17 (به چینی)

3. MA Bo- (Ma Baoli). تکنیک ایمونولوژی【M1. انتشارات دانشگاه پزشکی شانگهای (انتشارات دانشگاه پزشکی شانگهای)، 1984 188-190. (n چین))

4. Mosmann T. Rapiloloimeric assay برای کاربرد آسان تر رشد و بقا برای تکثیر و دفع سمیت سلولی[JJ Immun Meth.1983,6 55- 58.

5. WU is-hi، WU shailing، Acai-n، و همکاران (Wu Jiahui، Wu Shuibing. Li Carian، و غیره)، اثر زین بر تکثیر سلول های حلقوی درمصونتجزیه و تحلیل اندام با استفاده از فلوسیتومتری [J]. ایمونولوژی چینی (ژورنال ایمونولوژی چینی)، 1994، 10X5: 278-281. (در چین)

6. اکسین TAO. JIYong-yong، GAO Qi-rong، و همکاران (Tao Jiaxian، Ji Yongpu Gao Qirong، و غیره). تجزیه و تحلیل FACS تغییرات در C2 داخل سلولی در طول فعال سازی [J] مجله ایمونولوژی چینی (ژورنال ایمونولوژی چین)، 1993، 9 (2): 97-10 L. (به زبان چینی)

7. ZENGQu-li.MAO Jum-hao، LU Suchiang; تصفیه د پلی سادارید ازسیستانچدسرتیکولاYC Mfa و اثرات تعدیل‌کننده ایمنی آن بر Tellfunction[J].burnal of Zhejiang Medical University (Journal of Zhejiang Medical University), 1998.27 (3: 108-111. (به چینی)

8. Sarin A، Michelle C. Perre AH Cytotoxic Efed TNF و Lymphotoxin در T Lymphoblak. جی ایمونول، 1995، 1553716-3721.