یک نانوذره هدفمند کلیه برای افزایش تراکم لنفاوی کلیه، فشار خون را در موش‌های پرفشار خون کاهش می‌دهد.

1. معرفی

شناسایی ترکیبات غذایی با خواص تعدیل کننده سیستم ایمنی همراه با اهداف مولکولی مربوطه آنها در سال های اخیر توجه بیشتری را به خود جلب کرده است. با توجه به تنوع لیگاندی بالا، ابرخانواده بالقوه گیرنده گذرا کانال های یونی (TRPchannels) یک کلاس بسیار جالب از ساختارهای هدف بالقوه را نشان می دهد.

ابرخانواده کانال TRP پستانداران شامل شش خانواده پروتئینی مرتبط به نام‌های آنکیرین (TRPA)، متعارف (TRPC)، ملاستاتین (TRPM)، موکولیپین (TRPML)، پلی سیستین (TRPP) و خانواده وانیلوئید (TRPV) است. که معمولاً شش بخش گذرنده را به اشتراک می‌گذارند که به صورت تترامرها برای تشکیل منافذ نفوذپذیر کاتیونی با گزینش پذیری کاتیون‌های متفاوت به اشتراک می‌گذارند. TRPV1 در ابتدا به عنوان گیرنده فورکاپسایسین، جزء تند فلفل چیلی شناخته شد.[2] بعدها، همچنین مواد تند زنجبیل، جینجرول‌ها، نشان داده شد که TRPV1 را فعال می‌کنند.[3]

برای دریافت سیستانچ گیاهی برای کلیه ها اینجا را کلیک کنید

نقش بیولوژیکی TRPV1 در انواع سلول های غیر عصبی هنوز تحت بررسی گسترده است، اما نتایج موجود حاکی از عملکردهای بسیار فراتر از ادراک حسی و حرارتی است. برای مثال، یک مداخله 12-هفته ای با دوز روزانه 0 .15 میلی گرم از آگونیست TRPV1 nonivamide، یک آنالوگ ساختاری کپسایسین، از افزایش توده چربی بدن ناشی از رژیم غذایی و افزایش سطح سروتونین پلاسما در افراد دارای اضافه وزن سالم جلوگیری کرد.[4]

در سلول‌های چربی 3T{1}L1، فعال‌سازی TRPV1 توسط nonivamide باعث کاهش تجمع لیپید در طول تمایز و بلوغ با سرکوب بیان PPAR𝛾 شد.[5] در ماکروفاژها، کپسایسین و nonivamide آزادسازی سیتوکین‌های التهابی ناشی از LPS مانند IL6، CXCL8، و TNF-alpha را به روشی وابسته به TRPV کاهش دادند.[6] با این حال، عملکرد خاص TRPV1 در لکوسیت های خون انسان مبهم باقی می ماند. در سلول‌های NK انسانی، 10 و 50 میکرومولار کپسایسین باعث افزایش غلظت کلسیم درون سلولی شد که نشان‌دهنده یک کانال TRPV1 عملکردی است.[7]

با این حال، عملکردهای تأثیرگذار سلول‌های NK از قبیل گرانولاسیون سیتوتوکسیک و ترشح سیتوکین، ناشی از پیش تیمار سلول‌ها با کپسایسین به مدت 1 ساعت در محدوده غلظت 10-100 میکرومولار، تا حد زیادی مستقل از TRPV1 بودند.[7] در سلول‌های T، TRPV1 در فرآیندهای سیگنال‌دهی گیرنده سلول T، تکثیر و تمایز سلول‌های T و همچنین تولید سیتوکین نقش دارد.[8] کار قبلی از گروه ما نیز بیان عملکردی TRPV1 را در سلول‌های T اولیه انسانی نشان داد.[9] علاوه بر این، پاسخ دوز عدم تمرکز را از 0.03 تا 300 میکرومول L-1 تجزیه و تحلیل می‌کند که [6]-gingerol ترشح سیتوکین توسط سلول‌های انسانی اولیه با مقدار IC50 82.2 میکرومول L-1 را مهار می‌کند.

با این حال، کمی سازی [6]-gingerol در نمونه‌های پلاسمایی افراد سالم، میانگین حداکثر غلظت پلاسمایی را تنها 42 نشان داد. از آنجایی که این غلظت‌های [6]-جینجرول تأثیر قابل‌توجهی بر ترشح سیتوکین در مطالعات قبلی نداشتند، [9] مشخص نیست که آیا غلظت مرتبط با رژیم غذایی 50 نانومول در لیتر در پلاسمای خون پس از مصرف 1 لیتر چای زنجبیل به دست می‌آید یا خیر. برای تعدیل پاسخ های ایمنی سلولی در سایر لکوسیت های اولیه انسان کافی است.

برای نوتروفیل های انسانی، دانش در مورد نقش عملکردی TRPV1 محدود است. در حالی که Köse و Nazıroglu˘ [10] نشان دادند که در نوتروفیل‌ها در پاسخ به کپسایسین 10 میکرومولار کلسیم جریان دارد تا توسط کپسازپین آنتاگونیست TRPV1 کاهش یابد، نتایج دیگر حین آزمایش کپسایسین برای القای غلظت کلسیم نشان ندادند. محدوده 1-100 میکرومولار، علیرغم بیان TRPV1RNA قابل تشخیص.[11]

نوتروفیل ها فراوان ترین لکوسیت ها در خون انسان هستند که 60 تا 70 درصد از کل گلبول های سفید در گردش را تشکیل می دهند. آنها اولین سلول های ایمنی هستند که به محل عفونت جذب می شوند. بنابراین آنها اغلب به عنوان اولین خط دفاع نامیده می شوند.[12] جذب نوتروفیل‌ها، از جمله، توسط ارکموکاین‌های N-Formylmethionine-leucyl-phenylalanine (fMLF) مانند CXCL8 (IL{8}}) ​​از باکتری یا پپتید مشتق از میتوکندری آغاز می‌شود.[13]

مکانیسم‌های دفاعی نوتروفیل‌ها شامل فاگوسیتوز، [14] آزادسازی آنزیم ضد میکروبی از طریق دگرانولاسیون، [15] تولید گونه‌های فعال اکسیژن (ROS)، [16] و تشکیل تله‌های خارج سلولی نوتروفیل است.[17] علاوه بر این مکانیسم‌های دفاعی مستقیم، نوتروفیل‌ها نیز هستند. از طریق آزادسازی سیتوکین‌ها و کموکاین‌های مختلف، به پاسخ‌های ایمنی بعدی کمک می‌کند.[18] همچنین، نوتروفیل‌ها می‌توانند تحت یک فرآیند پرایمینگ قرار گیرند که آنها را قادر می‌سازد تا به فعال‌سازی کامل بعدی واکنش قوی‌تری نشان دهند.[16b]

در سال‌های اخیر، شواهدی افزایش یافته است که مواد غذایی و یا گیاهان دارویی می‌توانند یک یا چند پاسخ دفاعی ذکر شده از نوتروفیل‌های انسانی را تغییر دهند. این تغییرات شامل افزایش فعالیت فاگوسیتوتیک [19] و تولید ROS، [20] افزایش کموتاکسی به سمت fMLF، [21] و تشکیل تله‌های خارج سلولی نوتروفیل است.[20] با این حال، ترکیب(های) فعال شناسایی نشدند. اجزای تشکیل دهنده Ferula akitschkensis (𝛽-پینن، سابینن، 𝛾-ترپینن، ژرانیل استون، و ایزوبورنیل استات) نوتروفیل ها را نسبت به fMLF- و CXCL حساسیت زدایی کردند8-هجوم Ca{8}} را القاء کردند و باعث مهار هجوم سلولی در fMLF شدند. اثرات از طریق TRPV1 واسطه شد.[22]

بر اساس داده‌های موجود، ما فرض کردیم که فعال‌سازی TRPV1 توسط لیگاند توسط [6]-gingerol می‌تواند بر عملکردهای کلی نوتروفیل تأثیر بگذارد، چه به طور مستقیم یا از طریق افزایش پاسخ آنها به محرک‌های فعال‌کننده. در محدوده این فرضیه، هدف ما به ویژه روشن کردن این بود که آیا یک غلظت مرتبط با تغذیه تأیید شده برای تعدیل پاسخ های ایمنی سلولی در نوتروفیل های اولیه انسان به عنوان بخشی از جمعیت لکوسیتی کافی است یا خیر. '

علاوه بر این، ما به دنبال مقایسه سطوح بیان RNA همه اعضای ابرخانواده TRP پستانداران در پنج نوع از برجسته‌ترین نوع سلول در خون انسان بودیم تا یک مرور کلی کیفی و کمی جامع از بیان کانال TRP در لکوسیت‌های انسان به دست آوریم.

2. نتایج

2.1. فراوانی و سطوح رونوشت نسبی کانال‌های TRP در لکوسیت‌های انسانی

به منظور ارزیابی بیان RNA کانال TRP در لکوسیت های خون، پنج نوع از برجسته ترین سلول های لکوسیتی از خون اهداکنندگان سالم جدا شد و بیان RNA کانال های TRP از طریق RT-PCR کمی آنالیز شد (شکل 1).

رونوشت‌های خاصی از TRPV و همچنین خانواده TRPM با فرکانس‌های بالای ۷۵-۱0 ۰٪ در تمام انواع سلول‌های تجزیه‌وتحلیل‌شده شناسایی شدند. میانگین فرکانس کلی با در نظر گرفتن همه نوع سلولی 96 درصد برای خانواده TRPV و 98 درصد برای خانواده TRPM بود. رونوشت‌های اختصاصی TRPC بسیار کمتر بودند، از 0% در مونوسیت‌ها، سلول‌های NK، سلول‌های T و سلول‌های B تا 100% سلول‌های inNK، و سلول‌های T با میانگین کلی فرکانس تنها 53% (شکل 1A). رونوشت خاص TRPC{9}}فقط در نوتروفیل‌ها با فراوانی 70% شناسایی شد.

همچنین، رونوشت اختصاصی TRPA به طور کلی فراوانی نسبتاً کمی را در انواع سلولی با فراوانی 100 درصد در نوتروفیل‌ها، 25 درصد در مونوسیت‌ها، 80 درصد در سلول‌های NK، 100 درصد در سلول‌های T و 60 درصد نشان داد. سلول های B به همین ترتیب، رونوشت اختصاصی TRPML فرکانس پایینی در نوتروفیل‌ها (50%)، مونوسیت‌ها (25%)، سلول‌های NK (40%) و سلول‌های B (20%) نشان داد، اما فرکانس 100٪ در سلول های T رونوشت اختصاصی TRPV{12}}در همه انواع سلول شناسایی شد، که فراوانی 100% در مونوسیت‌ها، سلول‌های NK و سلول‌های T و فرکانس 90% در نوتروفیل‌ها و 80% در سلول‌های B را نشان می‌دهد.

با توجه به بیان نسبی RNA، در مقایسه با فرکانس‌های مربوطه، کانال‌های TRP الگوی بیان نوع سلولی خاص تری را نشان دادند، همانطور که با مقایسه مقادیر Δct مربوطه در انواع سلول‌های مختلف آنالیز شده مشهود است (شکل 1B). به عنوان مثال، TRPP3 با فرکانس 100٪ در همه انواع سلول شناسایی شد، اما به وضوح بالاترین سطح بیان را در مونوسیت ها نشان داد.

در مقابل، کانال TRPV2 در تمام انواع سلول‌های مورد بررسی، با سطح بیان RNA نسبتاً بالا و همچنین فرکانس بالا شناسایی شد. به همین ترتیب، سطوح رونوشت TRPV1 در تمام انواع سلول های مورد بررسی مشابه بود (شکل 1B).

2.2. بیان سطحی TRPV1 روی نوتروفیل ها

دانش فعلی در مورد عملکرد TRPV1 در نوتروفیل های انسانی هنوز نامشخص است. برای بررسی بیشتر نقش TRPV1 در نوتروفیل های انسانی، در مرحله بعدی بررسی کردیم که آیا کانال TRPV1 بر روی سطح نوتروفیل های اولیه انسانی با استفاده از فلوسیتومتری سلول زنده بیان می شود یا خیر (شکل 2).

نوتروفیل های جدا شده برای CD15 به عنوان نشانگر سطحی برای نوتروفیل ها رنگ آمیزی شدند (شکل 2A,B) و به طور همزمان یا با آنتی بادی ایجاد شده در برابر یک اپی توپ در اولین حلقه خارج سلولی پروتئین TRPV1 (شکل 2B) یا ایزوتایپ مربوطه به عنوان شاهد رنگ آمیزی شدند. جایگزینی برای اندازه گیری اتصال غیر اختصاصی (شکل 2A). در جمعیت CD{5}}، شدت فلورسانس برای FITC آنالیز شد. رنگ آمیزی نوتروفیل ها با آنتی بادی TRPV1 منجر به یک سیگنال فلورسانس به وضوح قابل تشخیص در مقایسه با کنترل ایزوتیپ شد، در نتیجه بیان سطحی TRPV1 در نوتروفیل های اولیه انسانی را تایید کرد (شکل 2C). تجزیه و تحلیل نوتروفیل های چهار اهداکننده منفرد بیان سطحی قابل مقایسه TRPV1 را نشان داد (شکل 2D).

2.3. [6]-افزایش ناشی از جینجرول در کلسیم داخل سلولی{4}}

از آنجایی که فعال‌سازی TRPV1 ناشی از لیگاند منجر به هجوم Ca{2}} می‌شود، غلظت‌های کلسیم داخل سلولی [23] نوتروفیل‌ها از طریق رنگ حساس به Ca-2 تعیین شد. بر اساس یافته‌های قبلی ما، [9] غلظت 5{21}} نانومولار از لیگاند معروف TRPV1 [6]-gingerol و زمان انکوباسیون 2 ساعت انتخاب شد. تجزیه و تحلیل‌ها نشان داد که انکوباسیون نوتروفیل‌ها با 50 نانومولار [6]-جینجرول منجر به افزایش غلظت کلسیم داخل سلولی شد که به طور متوسط ​​1.0 ± 18.4 درصد از حداکثر مقدار بود، همانطور که با اعمال 1 میکرومولار یونوفوریونومایسین تعیین شد. افزایش القا شده توسط DMSO در 1.2 ± 4.7٪ بود (شکل 3).

2.4. تأثیر [6] - جینجرول بر بیان TRPV1

در مرحله بعد، هدف ما تجزیه و تحلیل تاثیر تحریک TRPV1 توسط [6]-gingerol بر بیان TRPV1 در سطح رونوشت از طریق q-RTPCR و همچنین در سطح پروتئین سطحی از طریق رنگ‌آمیزی سلول‌های زنده بود. برای این منظور، نوتروفیل‌های انسانی با 50 نانومولار [6]-جینجرول به مدت 2 ساعت انکوبه شدند و سطح بیان مربوطه اندازه‌گیری شد.

این انکوباسیون 2 ساعته روی سطح پروتئین و رونوشت TRPV1 تأثیری نداشت (شکل 4)، و همچنین تغییری نکرد، به جز IL6، IL17A، IL24، C5، و GDF5، بیان RNA ژن های رایج سیتوکین و کموکاین مورد بررسی قرار گرفت (شکل S1، جدول S2). ، اطلاعات پشتیبانی).

2.5. تأثیر [6] - جینجرول بر بیان نشانگرهای سطحی نوتروفیل

خدمات حمایتی Wecistanche - بزرگترین صادرکننده سیستانچ در چین:

ایمیل:wallence.suen@wecistanche.com

واتساپ/تلفن:+86 15292862950

خرید برای جزئیات بیشتر مشخصات:

https٪3a٪2f٪2fwww.xjcistanche.com٪2fcistanche-shop

عصاره طبیعی سیستانچ ارگانیک با 25% اکیناکوزید و 9% آکتئوزید دریافت کنید