تشخیص انواع MUC1 در بیمارانی که از نظر بالینی مبتلا به بیماری کلیوی توبولو بینابینی اتوزومال غالب تشخیص داده شده اند

معرفی

بیماری کلیه توبولو بینابینی اتوزومال غالب (ADTKD) -MUC1 عمدتاً به دلیل جهش های تغییر قاب به دلیل درج تک پایه در ناحیه تکرار پشت سر هم با تعداد متغیر (VNTR) در MUC1 ایجاد می شود. به دلیل پیچیدگی نوع هات اسپات، شناسایی با استفاده از ترتیب دهنده های کوتاه خواندن (SRS) چالش برانگیز است. اگرچه مطالعات اخیر سودمندی توالی‌سنجی‌های طولانی‌مدت (LRSs) را نشان داده‌اند، شیوع انواع MUC1 در بیماران مبتلا به ADTKD مشکوک بالینی ناشناخته باقی مانده است. هدف ما روشن کردن این شیوع و ویژگی‌های ژنتیکی و تظاهرات بالینی ADTKD-MUC1 در جمعیت ژاپنی با استفاده از SRS و LRS بود.

مواد و روش ها

از ژانویه 2015 تا دسامبر 2019، تجزیه و تحلیل ژنتیکی با استفاده از SRS در 48 بیمار مبتلا به ADTKD مشکوک بالینی انجام شد. تجزیه و تحلیل اضافی با استفاده از LRS در بیماران با نتایج SRS منفی انجام شد.

نتایج

نتایج توالی خوانی کوتاه، انواع MUC1 را در 1 بیمار که دارای درج سیتوزین در واحد تکرار دوم ناحیه VNTR بود، نشان داد. با این حال، مناطق عمیق تر VNTR نمی توانند توسط SRS خوانده شوند. بنابراین، ما تجزیه و تحلیل توالی خوانی طولانی 39 مورد را انجام دادیم و انواع MUC1 VNTR را در 8 بیمار (در مجموع، 9 بیمار از خانواده های غیر مرتبط) شناسایی کردیم. با گنجاندن بیماران مبتلا به خانواده (n ¼ 31)، میانگین سنی در توسعه مرحله نهایی بیماری کلیوی (ESKD) 45 سال بود (95 درصد فاصله اطمینان: 40-40 سال).

نتیجه

در ژاپن، میزان تشخیص انواع MUC1 در بیماران مشکوک به ADTKD 18.8 درصد بود. بیش از 20 درصد از بیماران با نتایج منفی SRS دارای انواع MUC1 بودند که توسط LRS شناسایی شدند.

کلید واژه ها

ADTKD؛ ADTKD-MUC1; توالی خواندن طولانی؛ MCKD; NGS; توالی یابی SMRT

برای دریافت اینجا کلیک کنیدمزایای سیستانچ

ADTKD گروهی از بیماری های ارثی کلیوی است که با فیبروز پیشرونده توبولو بینابینی و آتروفی توبولی منجر به ESKD می شود. ADTKD را می توان بر اساس نقایص ژنتیکی زمینه ای، از جمله ناهنجاری های UMOD، MUC1، REN، HNF1B و SEC61A1 به زیرگروه هایی تقسیم کرد. با توجه به غیر اختصاصی بودن ویژگی های مشترک ADTKD، از جمله ناهنجاری های رسوب ادراری ملایم و پروتئینوری خفیف تا منفی، ADTKD به شدت تشخیص داده نمی شود.

MUC1 یک گلیکوپروتئین گذرنده است که در غشای آپیکال اندام صعودی ضخیم حلقه هنله، لوله‌های پیچیده دیستال و مجاری جمع‌آوری به شدت بیان می‌شود. شایع ترین علت ژنتیکی ADTKD-MUC1 یک نوع تغییر فریم است که در اثر وارد کردن یک باز به پلی مورفیسم VNTR MUC1 (OMIM 158340؛ 1q22) در اگزون 2.5 ایجاد می شود. این جهش سنتز پروتئین MUC1 را پس از ناحیه VNTR خاتمه می دهد. یک پروتئین کوتاه شده جدید (MUC1fs) ایجاد می کند که فاقد دامنه C ترمینال است (شکل 1a). سپس MUC1fs در سیتوپلاسم به دلیل انتقال غیر طبیعی پروتئین درون سلولی تجمع می یابد. ناحیه VNTR تغییرات بین فردی قابل توجهی را نشان می دهد زیرا از واحدهای 60-نوکلئوتیدی تشکیل شده است که 20 تا 125 بار تکرار می شوند و هر آلل دارای تکرارهای منحصر به فرد است (شکل 1b). بنابراین، تشخیص گونه‌های ژنی با استفاده از SRSها به دلیل پیچیدگی کانون تنوع، چالش برانگیز بوده است.

مطالعات قبلی از روش‌های جایگزین، از جمله طیف‌سنجی جرمی و گسترش کاوشگر، برای شناسایی انواع مسبب استفاده کرده‌اند. با این حال، این روش ها از نظر فنی خواستار هستند. مطالعات اخیر سودمندی LRS ها را نشان داده است که از یک روش توالی یابی بیدرنگ مولکولی (SMRT) برای شناسایی انواع MUC1 VNTR استفاده می کنند. با این وجود، انواع MUC1 VNTR هنوز در جمعیت ژاپن مشخص نشده است. علاوه بر این، شیوع انواع MUC1 در بیماران مبتلا به ADTKD مشکوک بالینی ناشناخته باقی مانده است. بنابراین، هدف از این مطالعه، روشن کردن این شیوع، از جمله ویژگی های ژنتیکی و تظاهرات بالینی، ADTKD-MUC1 در جمعیت ژاپنی بود. در اینجا، ما 9 بیمار مبتلا به ADTKD-MUC1 را تشخیص دادیم که انواع VNTR با استفاده از SRS (n ¼ 1) یا LRS (n ¼ 8) در میان 48 مورد مشکوک بالینی ADTKD داشتند.

مواد و روش ها

1. شرکت کنندگان

بین ژانویه 2015 و دسامبر 2019، ما تجزیه و تحلیل ژنتیکی را در 48 بیمار مبتلا به ADTKD مشکوک بالینی انجام دادیم. شرکت کنندگان اختلال عملکرد کلیه به دلایل ناشناخته، با ناهنجاری های ادراری خفیف تا منفی داشتند. بیمارانی که دارای سابقه خانوادگی مثبت بیماری مزمن کلیوی و/یا هیپراوریسمی بودند یا اگر یافته های پاتولوژیک در بیوپسی کلیه، بیماری کلیه کیستیک مدولاری (اصطلاح قبلی ADTKD-MUC1 و ADTKD-UMOD) را نشان داد، از نظر بالینی مبتلا به ADTKD تشخیص داده شد. نفریت یا آسیب مزمن بینابینی. ما بیماران مبتلا به ناهنجاری های کلیوی و/یا علائم خارج کلیوی را حذف کردیم. نمونه های DNA ابتدا با استفاده از SRS مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند. سپس تحقیقات بیشتر در بیماران با نتایج SRS منفی (39 ¼ n) با استفاده از LRS انجام شد. تمام نمونه ها و اطلاعات بالینی از بیمارستان های ارجاع ژاپنی به دست آمد. آنالیزهای ژنتیکی پس از اخذ رضایت آگاهانه کتبی از بیماران و/یا سرپرستان آنها در صورتی که بیمار خردسال بود، انجام شد. این مطالعه توسط هیئت بازبینی نهادی دانشکده پزشکی دانشگاه کوبه (تأیید شماره 301) تأیید شد.

2. توالی خواندن کوتاه

Genomic DNA was extracted from peripheral blood leukocytes using the QuickGene Mini 80 system (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Tokyo, Japan). For targeted sequencing using an SRS, samples were prepared using HaloPlex (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) according to the manufacturer's instructions. Paired-end sequencing was performed on the MiSeq platform (Illumina, San Diego, CA). HaloPlex was used for targeted sequencing of 128 genes (version 2, Supplementary Table S1), 172 genes (version 4, Supplementary Table S2), 159 genes (version 5, Supplementary Table S3), 164 genes (version 6, Supplementary Table S4), 181 genes (version 7, Supplementary Table S5), and 183 genes (version 8, Supplementary Table S6) associated with congenital anomalies of the kidney and urinary tract, cystic kidneys, ADTKD, and nephronophthisis. The HaloPlex version used for each patient is found in Supplementary Table S7. Reads were aligned to the reference human genome (GRCh37/Hg19) using SureCall 4.0, which is a desktop application combining algorithms for end-to-end next-generation sequencing data analysis from alignment to categorization of mutations (Agilent Technologies). We excluded called variants with minor allele frequencies >1 درصد در پایگاه داده های تنوع انسانی در دسترس عموم، مانند موارد زیر: پایگاه داده تغییرات ژنتیکی انسانی (http://www.genome.med.kyoto-u.ac.jp/SnpDB/)، gnomAD (https://gnomad.broadinstitute) .org/)، و پایگاه داده پروژه 1000 Genomes (1000G) (https://www. internationalgenome.org/data). انواع کاندیدها با استفاده از نرم افزار پیش بینی محاسباتی SIFT (https://sift.bii.astar.edu.sg/)، PolyPhen{4}} (http://genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) انتخاب شدند. ، Mutation Taster (http://www.mutationtaster.org/) و CADD (https://cadd.gs.washington.edu/snv) و سپس به عنوان بیماری زا، احتمالاً بیماری زا، یا اهمیت نامشخص طبقه بندی می شوند. رهنمودهای کالج آمریکایی ژنتیک پزشکی و ژنومیک.9

3. آماده سازی کتابخانه و توالی خوانی طولانی (توالی یابی SMRT)

آمپلیکون‌ها در نسبت‌های هم‌مولار ادغام شدند و برای کتابخانه‌های توالی SMRTbell با استفاده از کیت آماده‌سازی الگوی SMRTbell Express 2 آماده شدند.0 (Pacific Biosciences, Menlo Park, CA) طبق دستورالعمل‌های سازنده. متعاقباً، با اتصال پرایمر توالی نسخه 2 و DNA پلیمراز به آداپتورهای هر دو انتهای کتابخانه توالی، یک الگوی توالی ساخته شد و الگو بر روی یک سلول SMRT بارگذاری شد. توالی یابی SMRT با استفاده از سیستم PacBio Sequel II with Sequel II Sequencing Kit 2 انجام شد.{4}}. داده های توالی یابی شده با SMRT Link نسخه 9 تجزیه و تحلیل شد. پس از آن، خوشه‌بندی توالی با استفاده از ابزار تحلیل «pbaa» که برای تحلیل توالی‌های تکراری مناسب است، انجام شد. آماده سازی کتابخانه، توالی یابی، و تجزیه و تحلیل بیوانفورماتیک توالی یابی SMRT توسط Takara Bio (Kusatsu، Shiga، ژاپن) انجام شد. توالی نوکلئوتیدی، تعداد خوانده‌ها، و فراوانی آلل در یک فایل اکسل برای هر بیمار جمع‌آوری شد (داده‌ها مشخص نشد). برای هر دنباله شناسایی شده، ما به صورت دستی توالی را هر 60 پایه در هر خط بازسازی کردیم، همانطور که کربی و همکاران 5 توضیح دادند (شکل 1b). به دلیل خطاهای بالقوه PCR در توالی پیچیده VNTR، توالی های متعدد در هر بیمار شناسایی شد. توالی های صحیح با مقایسه نتایج LRS با الکتروفروگرام های آمپلیکون های به دست آمده با استفاده از یک بیوانالایزر شناسایی شدند (جدول تکمیلی S8). در بیشتر موارد، 2 دنباله برتر با بیشترین تعداد خوانده شده صحیح تشخیص داده شد. با این حال، در برخی موارد، اگر اندازه آنها با پیک های الکتروفورز شناسایی شده توسط بیوآنالایزر مطابقت داشته باشد، توالی هایی با سومین یا کمترین تعداد قرائت رایج، صحیح تشخیص داده شدند (SC449، SC511، SC534، SC560، SC566، SC593، SC616، و SC639) به دلیل ناکارآمدی تقویت PCR آلل های بلند زمانی که اندازه ناحیه VNTR از 2 آلل به طور قابل توجهی متفاوت بود.

پودر سیستانچ و عصاره سیستانش

بحث

طبق اطلاعات ما، این اولین گزارش از تجزیه و تحلیل ژنتیکی انواع MUC1 VNTR است که با استفاده از ترکیبی از SRS و LRS در یک گروه ژاپنی شناسایی شده است. ما جهش‌های MUC1 VNTR را در 9 بیمار از خانواده‌های غیر مرتبط شناسایی کردیم. علاوه بر این، میزان تشخیص انواع MUC1 در میان بیماران مشکوک به ADTKD 18.8 درصد بود.

به دلیل پیچیدگی هات اسپات متغیر، تشخیص انواع MUC1 VNTR با تجزیه و تحلیل ژنتیکی معمول با استفاده از SRS چالش برانگیز است و روش‌های دیگری مانند روش عکس فوری یا طیف‌سنجی جرمی معمولاً مورد نیاز است. متأسفانه، این روش‌ها از نظر فنی نیازمندند و فقط در چند آزمایشگاه در سراسر جهان انجام می‌شوند. ونزل و همکاران 7 توالی‌یابی SMRT را انجام دادند و تمام تشخیص‌ها را در شرکت‌کنندگان اروپایی از 9 خانواده با انواع MUC1 VNTR شناسایی شده قبلی با استفاده از روش عکس فوری تأیید کردند. وانگ و همکاران 8 نیز سودمندی توالی یابی SMRT را برای تشخیص جهش های MUC1 VNTR در یک خانواده بزرگ چینی نشان دادند. با این وجود، به دلیل طراحی مطالعه خود، این 2 مطالعه میزان تشخیص انواع MUC1 VNTR را در بیماران مبتلا به ADTKD مشکوک بالینی تعیین نکردند. در این مطالعه، ما روشن کردیم که میزان تشخیصی واریانت‌های MUC1 در بیماران مشکوک بالینی ADTKD 18.8 درصد بود که ممکن است احتمالات دقیق‌تری را به‌ویژه در طول مشاوره ژنتیک تسهیل کند.

داده‌های مربوط به شیوع ADTKD-MUC1 محدود است، اگرچه مطالعات قبلی شیوع 0.7 تا 4 در میلیون را در ایالات متحده و ایرلند نشان داده‌اند.3،13 مطالعه‌ای در انگلستان شیوع تخمینی ADTKD را نشان داد. -UMOD 9 در میلیون، نشان می دهد که ADTKD-UMOD شایع ترین بیماری کلیه غیر پلی کیستیک است.14 در مطالعه ما، 9 بیمار دارای انواع MUC1 بودند، در حالی که 6 بیمار دارای واریانت های UMOD بودند، که نشان می دهد ADTKD-MUC1 می تواند یکی از شایع ترین زیرگروه های بیماری باشد. ADTKD.

علیرغم پیچیدگی ساختاری ناحیه MUC1 VNTR، SRS می‌تواند واریانت‌ها را در 3 بیمار تشخیص دهد، که همگی دارای جهش مشابه بودند: یک سیتوزین در 7 سیتوزین متوالی در انتهای واحد نوکلئوتیدی در دومین تکرار قرار داده شد. VNTR فرض بر این بود که واریانتهای موجود در قسمت کم عمق MUC1 VNTR (تا سومین تکرار VNTR) قابل تشخیص هستند حتی اگر DNA قطعه قطعه شده باشد (100-200 جفت باز در هر خواندن) به عنوان بخشی از آماده سازی نمونه برای تجزیه و تحلیل SRS. یاماموتو و همکاران 15 جهش تغییر قاب دیگری را که قبل از ناحیه MUC1 VNTR قرار دارد با استفاده از یک SRS (توالی اگزوم کامل) شناسایی کردند. این جهش همچنین یک پروتئین ناقص غیرطبیعی را به همان روشی که جهش در VNTR قرار می‌گیرد تولید می‌کند.

در مطالعه ما، 7 بیمار از 9 بیمار مبتلا به واریانت های MUC1 VNTR دارای همان 60-توالی واحد نوکلئوتیدی حاوی سیتوزین درج شده بودند (جدول 2). در مطالعات قبلی که در آن تجزیه و تحلیل ژنتیکی توالی خوانی طولانی مدت برای MUC1 VNTR انجام شد، همین نوع در 9 خانواده در یک گروه اروپایی و یک خانواده بزرگ چینی شناسایی شد. به عنوان "27dupC" تعریف شد. 12 Olinger و همکاران 16 گزارش کردند که شیوع نوع 27dupC 93.5 درصد در 2 ثبت ADTKD در اروپا و ایالات متحده بود. با این یافته ها، داده های ما نشان داد که نوع 27dupC شایع ترین جهش MUC1 در یک گروه ژاپنی است.

مکمل های سیستانچ

تعداد تکرارهای VNTR 20 تا 253 گزارش شده است. با این حال، در مطالعه ما، تعداد تکرار VNTR از 30 تا 82 متغیر بود که 80 درصد از آلل‌ها 30 تا 36 تکرار داشتند. یک مطالعه قبلی در اروپا گزارش داد که درصد آلل‌هایی با 30 تا 36 تکرار 39 درصد بود که ممکن است به دلیل همگنی قومی جمعیت ژاپنی باشد. مطالعه حاضر نشان داد که میانگین سنی در ابتلا به ESKD در بیماران مبتلا به ADTKD-MUC1، از جمله بیماران مبتلا به خانواده در یک گروه ژاپنی (9 خانواده، 31 ¼ n) 45 سال (95 درصد فاصله اطمینان: 40-50 سال) بود. مطالعه قبلی 147 فرد، از جمله بیماران مبتلا به جهش MUC1 و اعضای خانواده آسیب دیده آنها را مورد ارزیابی قرار داد و نشان داد که میانگین سنی در ابتلا به ESKD 44.9 15.4 سال بود. در مقابل، تحقیقات اخیر با استفاده از گروه های مختلف نشان داد که میانگین زمان بقای کلیه در 104 بیمار مبتلا به ADTKD-MUC1 36 ساله بودند (محدوده بین چارکی: 30-46 سال)، که ممکن است با حذف اعضای خانواده مبتلا که تحت آنالیز ژنتیکی قرار نگرفته اند توضیح داده شود. با انواع MUC1، 8،17،18، اگرچه وجود ژن های اصلاح کننده یا سایر عوامل ناشناخته باقی مانده است. در همان دوره مطالعه، ما همچنین جهش‌هایی را در HNF1B، یک ژن مسبب ADTKD، در 19 بیمار شناسایی کردیم. با این وجود، بیماران مشکوک به جهش HNF1B از نظر بالینی در هنگام ثبت نام از مطالعه ما حذف شدند، زیرا اکثر این بیماران از نظر بالینی از بیماران مبتلا به ADTKD-MUC1 قابل تشخیص بودند به دلیل ناهنجاری های مورفولوژیک در سیستم مجاری ادراری کلیوی و/یا سابقه خانوادگی اتوزومال غالب. دیابت با شروع زودرس و/یا هیپومنیزیمی، و ما قبلاً در مورد این جمعیت بیمار گزارش داده‌ایم.19 در واقع، یک بیماری کلیوی: گزارش اجماع جهانی بهبود نتایج و بررسی اخیر ADTKD پیشنهاد می‌کند که عبارت ADTKD-HNF1B فقط برای مواردی در نظر گرفته شود. که فیبروز توبولو بینابینی کلیه تظاهر اصلی است زیرا فقط چند مورد تنها با بیماری توبولو بینابینی تظاهر می کنند. تصور می شود که کم خونی دوران کودکی، افت فشار خون خفیف و هیپرکالمی خفیف از ویژگی های خاص ADTKD-REN باشند. با این وجود، یک مطالعه کوهورت بین‌المللی اخیر روی ویژگی‌های بالینی 111 بیمار ADTKD-REN گزارش داد که تقریباً 70 درصد از بیماران برای بیماری مزمن کلیوی یا نقرس به موسسات پزشکی مراجعه کردند. بر اساس این گزارش، کم خونی دوران کودکی در 75.8 درصد از بیماران وجود داشت. بیماران اما شدت آن نسبتا خفیف بود. میانگین سطح هموگلوبین برای سنین 9.6، 10.1 و 10.5 گرم در دسی لیتر بود.<10 years, 10 to <15 years, and 15 to <20 years, respectively.21 Although hypotension was not reported in the article, the severity of hyperkalemia was mild and the mean serum potassium level in patients who were not taking fludrocortisone was 4.8 mEq/l.21 Childhood anemia, hypotension, or hyperkalemia may often be overlooked, and they are not always specific to ADRKD-REN; thus, we did not exclude participants with these findings. ADTKD-SEC61A1 is much rare than other ADTKD subtypes, with 6 families reported as of date.22 Patients harboring SEC61A1 mutation present with specific features, such as intrauterine growth retardation, cleft palate, congenital anemia, neutropenia, and immunodeficiency.3,22 Although the clinical manifestations of ADTKD-REN have not been completely clarified owing to the small number of reported cases, patients presenting with these specific features can be clearly distinguished from those with ADTKD-MUC1.

سیستانچه توبولوزا

مطالعات اخیر بر روی مکانیسم‌های مولکولی و سلولی ADTKD-MUC1 نشان داده است که این وضعیت یک پروتئینوپاتی سمی ناشی از تجمع درون سلولی پروتئین MUC1 اشتباه تا شده است. Dvela-Levitt و همکاران 24 استفاده از یک مولکول کوچک به نام BRD4780 را گزارش کردند. برای تغییر مسیر مسیر ترشحی به لیزوزوم‌ها، MUC1fs آشکار در موش‌های موش و ارگانوئیدهای بیمار حذف شد و پتانسیل درمانی BRD4780 را برجسته کرد. بر این اساس، تشخیص دقیق انواع MUC1 ممکن است برای توسعه عوامل درمانی موثر حیاتی باشد. مطالعه ی ما چندین محدودیت داشت. اول، همه شرکت کنندگان در مطالعه ما ژاپنی بودند و حجم نمونه ما به دلیل کوتاه بودن مدت مطالعه کوچک بود. با توجه به ماهیت گذشته نگر این مطالعه، ما همچنین نتوانستیم اطلاعات بالینی طولی مانند پیش آگهی کلیه را به دست آوریم. دوم، درج های تک پایه حتی در آلل های بدون جهش مشاهده شد. به دلیل میزان خطای بالا، دستیابی به مونتاژ با کیفیت بالا برای شناسایی انواع تک نوکلئوتیدی یا ایندل ها با استفاده از LRS چالش برانگیز بود. لازم بود فناوری‌های توالی‌یابی برای شناسایی انواع مختلف تغییرات ژنتیکی ترکیب شود که هزینه و پیچیدگی پروژه‌ها را افزایش می‌دهد. بنابراین، PacBio یک سیستم توالی یابی جدید ابداع کرد که توالی یابی اجماع دایره ای نام داشت. توالی اجماع دایره‌ای خوانش‌هایی با وفاداری بالا با دقت 99.8 درصد و طول متوسط ​​13.5 کیلو باز ایجاد می‌کند، که به شدت میزان خطای توالی‌یابی را کاهش می‌دهد. این روش توالی‌یابی نیز در مطالعه ما به کار گرفته شد. از این رو، با توجه به بهبود دقت توالی، درج‌های تک پایه احتمالاً به دلیل خطای PCR ایجاد می‌شوند. حتی اگر KOD Hot Start DNA پلیمراز برای تقویت سخت ترین اهداف بهینه شده بود، 26 DNA پلیمراز دیگر، که وفاداری آنها بالاتر از KOD (به عنوان مثال، Phusion) است، ممکن است در کاهش میزان خطای PCR کمک کنند. مطالعات یک پروتکل بدون تقویت را برای غنی سازی هدفمند با استفاده از سیستم تکرارهای کوتاه پالیندرومیک/Cas9 که به طور منظم در فواصل مختلف قرار دارند، پیدا کرده اند. این روش جدید احتمالاً نتایج بهتری را ارائه می دهد. سوم، ما روش جایگزینی را تایید نکرده‌ایم که بتواند تشخیص را تسهیل کند، مانند رنگ‌آمیزی ایمنی نمونه‌های کلیه یا سلول‌های مشتق شده از ادرار. کربی و همکاران، 5 که برای اولین بار جهش ایجاد کننده ADTKD-MUC1 را گزارش کردند، یک آنالیز ایمونوهیستوشیمی از نمونه های کلیه بیماران مبتلا به جهش MUC1 انجام دادند. آنها گزارش کردند که، اگرچه رنگ‌آمیزی ایمنی در کنترل‌های عادی منجر به رنگ‌آمیزی غیراختصاصی می‌شود، اما بیماران مبتلا به جهش‌های MUC1 یک الگوی رنگ‌آمیزی داخل سلولی خاص را در حلقه هنله، لوله‌های دیستال و مجاری جمع‌آوری نشان دادند. آنالیزهای رنگ‌آمیزی ایمنی مشابهی از پروتئین MUC1 جهش یافته گزارش شده است. 11،13،18،30 یاماموتو و همکاران 15 پروتئین MUC1 جهش یافته را در اگزوزوم های ادرار شناسایی کردند. اگرچه تظاهرات بالینی ADTKD-MUC1 غیر اختصاصی است، این تجزیه و تحلیل های غیر ژنتیکی ممکن است از تشخیص بالینی پشتیبانی کند. بنابراین، لازم است سودمندی این تجزیه و تحلیل های غیر ژنتیکی را در ارتباط با نتایج مطالعه ما تأیید کنیم. در نتیجه، مطالعه ما نشان می دهد که تجزیه و تحلیل ژنتیکی ترکیبی با SRS و LRS برای تشخیص انواع MUC1 VNTR در یک گروه ژاپنی مفید است و اینکه شیوع ADTKD-MUC1 ممکن است در این جمعیت بالا باشد. تجزیه و تحلیل ژنتیکی ترکیبی با استفاده از SRS و LRS به احتمال زیاد میزان تشخیص ADTKD-MUC1 را بهبود می بخشد و ممکن است به توسعه رویکردهای درمانی بهینه کمک کند.

منابع

1. Eckardt KU، Alper SL، Antignac C، و همکاران. بیماری کلیه توبولو بینابینی اتوزومال غالب: تشخیص، طبقه بندی و مدیریت - گزارش اجماع KDIGO. کلیه بین المللی 2015؛ 88:676-683. https://doi.org/10. 1038/ki.2015.28

2. Bolar NA، Golzio C، Zivná M، و همکاران. جهش های هتروزیگوت از دست دادن عملکرد SEC61A1 باعث بیماری توبولو بینابینی اتوزومال غالب و بیماری کلیه گلومرولوسیستیک همراه با کم خونی می شود. من جی هوم ژنت هستم. 2016؛ 99:174-187. https://doi.org/ 10.1016/j.ajhg.2016.05.028

3. Devuyst O، Olinger E، Weber S، و همکاران. بیماری کلیه توبولو بینابینی اتوزومال غالب. پرایمرهای Nat Rev Dis. 2019؛ 5: 60. https://doi.org/10.1038/s41572-019-0109-9

4. Patton S، Gendler SJ، Spicer AP. موسین اپیتلیال، MUC1، شیر، غده پستانی و سایر بافت ها. Biochim Biophys Acta. 1995؛ 1241: 407-423. https://doi.org/10.1016/0304-4157 (95){10}}

5. کربی A، Gnirke A، Jaffe DB، و همکاران. جهش های ایجاد کننده بیماری کلیه کیستیک مدولاری نوع 1 در یک VNTR بزرگ در MUC1 نهفته است که توسط توالی یابی موازی انبوه از دست رفته است. نات ژنت. 2013؛ 45: 299-303. https://doi.org/10.1038/ng.2543

6. Ekici AB، Hackenbeck T، Morinière V، و همکاران. فیبروز کلیه ویژگی مشترک بیماری های کلیه توبولو بینابینی اتوزومال غالب است که در اثر جهش در موسین 1 یا اورومودولین ایجاد می شود. کلیه بین المللی 2014؛ 86: 589-599. https://doi.org/10.1038/ki. 2014.72

7. Wenzel A, Altmueller J, Ekici AB, et al. توالی یابی زمان واقعی تک مولکولی در ADTKD-MUC1 امکان مونتاژ کامل VNTR و موقعیت یابی دقیق جهش های ایجاد کننده را فراهم می کند. Sci Rep. 2018; 8:4170. https://doi.org/10.1038/s41598-018-22428-0

8. Wang GQ، Rui HL، Dong HR و همکاران. توالی یابی SMRT نشان داد که یک روش موثر برای تشخیص ADTKD-MUC1 از طریق تجزیه و تحلیل پیگیری یک خانواده چینی است. Sci Rep. 2020; 10:8616. https://doi.org/10.1038/s41598-020-65491-2

9. ریچاردز اس، عزیز ان، بیل اس، و همکاران. استانداردها و دستورالعمل‌ها برای تفسیر انواع توالی: یک توصیه مشترک مشترک از کالج آمریکایی ژنتیک پزشکی و ژنومیک و انجمن آسیب‌شناسی مولکولی. ژنت مد. 2015؛ 17:405-424. https://doi.org/10.1038/ gim.2015.30

10. Kanda Y. بررسی نرم‌افزار با استفاده آسان «EZR» برای آمار پزشکی. پیوند مغز استخوان. 2013؛ 48:452-458. https://doi.org/10.1038/bmt.2012.244

11. Robinson JT، Thorvaldsdóttir H، Winckler W، و همکاران. نمایشگر ژنومیک یکپارچه. Nat Biotechnol. 2011؛ ​​29:24-26. https://doi. org/10.1038/nbt.1754

12. Zivná M, Kidd K, P ristoupilová A, et al. تشخیص ایمونوهیستوشیمی غیرتهاجمی و جهش‌های جدید MUC1 که باعث بیماری کلیه توبولو بینابینی اتوزومال غالب می‌شوند [تصحیح منتشر شده در J Am Soc Nephrol ظاهر می‌شود. 2020؛ 31: 892]. جی ام سوک نفرول. 2018؛ 29:2418-2431. https://doi.org/ 10.1681/ASN.2018020180

13. Cormican S, Connaughton DM, Kennedy C, et al. بیماری کلیه توبولو بینابینی اتوزومال غالب (ADTKD) در ایرلند. رن فایل. 2019؛ 41:832-841. https://doi.org/10.1080/ 0886022X.2019.1655452

14. گاست سی، ماریناکی آ، آرناس-هرناندز ام، و همکاران. بیماری کلیه توبولو بینابینی اتوزومال غالب - UMOD شایع ترین بیماری کلیه ژنتیکی غیر پلی کیستیک است. BMC Nephrol. 2018؛ 19:301. https://doi.org/10.1186/s12882-018- 1107-y

15. Yamamoto S, Kaimori JY, Yoshimura T, et al. تجزیه و تحلیل یک خانواده ADTKD با یک جهش تغییر قاب جدید در MUC1 ویژگی های مشخصه پروتئین MUC1 جهش یافته را نشان می دهد. پیوند نفرول دیال. 2017؛ 32:2010–2017. https://doi.org/10. 1093/ndt/gfx083

16. اولینگر ای، هافمن پی، کید ک، و همکاران. طیف بالینی و ژنتیکی بیماری کلیه توبولو بینابینی اتوزومال غالب ناشی از جهش در UMOD و MUC1. کلیه بین المللی 2020؛ 98:717-731. https://doi.org/10.1016/j.kint.2020.04.038

17. Bleyer AJ، Kmoch S، Antignac C، و همکاران. تظاهرات بالینی متغیر یک جهش MUC1 که باعث بیماری کلیه کیستیک مدولاری نوع 1 می شود. Clin J Am Soc Nephrol. 2014؛ 9:527– 535. https://doi.org/10.2215/CJN.06380613

18. Ayasreh N, Bullich G, Miquel R, et al. بیماری کلیه توبولو بینابینی اتوزومال غالب: تظاهرات بالینی بیماران مبتلا به ADTKD-UMOD و ADTKD-MUC1. جی کیدنی دیس هستم. 2018؛ 72:411-418. https://doi.org/10.1053/j.ajkd.2018.03. 019

Eri Okada1,2, Naoya Morisada1,3, Tomoko Horinouchi1, Hideki Fujii4, Takayuki Tsuji5, Masayoshi Miura6, Hideyuki Katori7, Masashi Kitagawa8, Kunio Morozumi9, Takanobu Toriyamayukamurashi, Takanobu Toriyamayuta10,1 1، آتسوشی کوندو1، یویا آئوتو1، شینیا Ishiko1، Rini Rossanti1، Nana Sakakibara1، China Nagano1، Tomohiko Yamamura1، Shingo Ishimori1، Joichi Usui2، Kunihiro Yamagata2، Kazumoto Iijima13،14، Toshiyuki Imasawa11 و Kandai