داروها برای بیماری کلیه: دوکسوروبیسین

برای اطلاعات بیشتر: Ali.ma@wecistanche.com

بررسی آسیب شناسی کلیه در موش های صحرایی نر تحت درمان با دوکسوروبیسین در استان دیالی

محمد عابد محمود الکراوی و همکاران 2019

خلاصه.

دوکسوروبیسینیک داروی ضد نئوپلاستیک است که در درمان هر نوع سرطان سینه و تخمدان مشابه تومور استفاده می شود. در این مطالعه، هدف شناسایی تغییرات هیستوپاتولوژیک بوددوکسوروبیسینبر رویکلیهموش‌های نر با وزن 200-225 گرم ودوکسوروبیسینبه صورت داخل صفاقی تزریق می شود. موش‌ها به دو گروه اصلی طبقه‌بندی شدند، اولین گروه اولیه (n{0}}) به شش گروه (هر گروه=5 موش) تقسیم شدند. زیرگروه اول 0.3 میلی لیتر نرمال سالین فیزیولوژیکی هر 84 ساعت به مدت سه هفته داد. سایر زیر گروه ها با دوز (1،2،3،4،5) میلی گرم بر کیلوگرم در صفاق تزریق شدند.دوکسوروبیسیندو بار در هفته (هر دوز=5 موش)، هر 84 ساعت به مدت سه هفته. گروه دوم اولیه (n=20) نیز به چهار گروه (هر گروه= 5موش) تقسیم شدند. زیرگروه اول 0.3 میلی‌لیتر نرمال سالین فیزیولوژیکی هر 84 ساعت به مدت شش داد. هفته ها سایر زیر گروه ها به صورت داخل صفاقی در دوز (1،2،3) میلی گرم بر کیلوگرم تزریق شدند.دوکسوروبیسیندو بار در هفته به مدت شش هفته آناتومی بر روی موش های صحرایی نر پس از 48 ساعت از آخرین تزریق انجام شد. ضایعات هیستوپاتولوژیک دژنراسیون، ترومبوز، گچ های لوله ای، احتقان، واکوئل سلولی تافت گلومرولی و خونریزی عروق خونی بودند. نمره آسیب افزایش معنی داری در درجه آسیب گلومرولی در موش های صحرایی نر که تزریق شده بودند را نشان داد.دوکسوروبیسیندر صفاق با دوز 5 میلی گرم بر کیلوگرم وزن بدن به مدت سه هفته و افزایش قابل توجهی در درجه آسیب گلومرول در دوز 3 میلی گرم بر کیلوگرم وزن بدن هنگام تزریق وجود دارد.دوکسوروبیسینبه مدت شش هفته در این مطالعه به اثر هیستوپاتولوژیک آن اشاره کردیمدوکسوروبیسینروی موش نرکلیه.

کلید واژه ها: دوکسوروبیسین، هیستوپاتولوژی، موش های صحرایی نر، دوز،کلیه، واکوئل

بازیابی عملکرد کلیه: سیستانچ و دوکسوروبیسین

کلیک کنید تا برای کلیه‌ها تلاش کنید

1. مقدمه

آسیب به سیستم کلیوی به ویژهکلیهمی تواند منجر به مرگ و میر بالا در حیوانات شود زیراکلیهیکی از ارگان های مهم را در عملکرد خود شامل سم زدایی و دفع دارو و مواد سمی، عملکرد تنظیم، دفع ادرار و کراتینین می داند (1). راکلیهدر معرض اثر سمی دارو قرار گرفت که منجر به آسیب کلیوی و ضایعه دیگری مانند نفروز نفرون، نفریت بینابینی و نفریت گلومرولی شد (2).دوکسوروبیسیندرمان ضد سرطان (که آدریامایسین نیز نامیده می شود) برای درمان تومورها در اندام ها و بافت های مختلف از جمله استئوسارکوم، لنفوم هوچکین، سرطان سینه، تومور تیروئید و نوروبلاستوم استفاده می شود. این دارو برخی از فعالیت های بیوشیمیایی را تحت تاثیر قرار دادکلیهدر مطالعات قبلی، کاهش سدیم و افزایش پتاسیم، اوره در سرم با تزریق در موش‌ها با دوزهای مختلف نشان داده شد.دوکسوروبیسین(4،5). همچنین، افزایش فسفرهای معدنی (5) و نشان دهنده اوره پروتئین، هیپوآلبومینمی و هیپرلیپیدمی بود (6،7). مطالعه دیگری که در آن به موش ها بادوکسوروبیسیندر یک دوز 5 میلی گرم بر کیلوگرم وزن بدن افزایش ترشح آنزیم لیزوزومی را نشان داد که علائم آسیب توبول کلیوی را در نظر می گیرد (7.8). افزایش فیبرونکتین، گلیکوزآمینوگلیکان و کلسترول در پلاسما مشاهده شد (6). مطالعه دیگری بر روی ماهی ماکسیما گلوتینوزا آتلانتیک برای روشن شدن پاتومکانیسم های اولیه که مسئول تغییر در متابولیسم پروتئین در گلومرول های تزریق شده با آدریامایسین هستند، انجام شد (نام تجاری:دوکسوروبیسین) افزایش تجمع پروتئین در سلول های گلومرولی و کاهش آنزیم پروتئولیتیک را نشان داد. همچنین کمبود RNA به دلیل عدم تجزیه پروتئین وجود داشت که منجر به افزایش پروتئین کل گلومرول می شود که مکانیسم پاتولوژیک مسئول افزایش پروتئین گلومرولی و وقوع سخت شدن گلومرولی حیوانات تزریق شده را توضیح می دهد. با ADR (9). چندین محقق به نقش مکمل در دژنراسیون کلیه ناشی از دارو اشاره کردند، زیرا فعال شدن مکمل در کاهش آسیب گلومرولواسکلروز گلومرولی در بدن و کمبود CD59 که کمپلکس حمله را تنظیم می کند، نقش دارد. غشاء منجر به آسیب لوله بینابینی می شود (10). دلیل سختی گلومرول ها افزایش بیان ژن محصول نهایی گلیکوزیون پیشرفته در محصول گلومرول ها بود، RAGE می تواند به آسیب محصول در هنگام سفتی گلومرولی، مانند اسکلروز گلومرولی نسبی در تزریق ADR کمک کند (9). به دلیل اثرات بیوشیمیایی و ژنتیکیدوکسوروبیسینبر رویکلیه هابنابراین تصمیم گرفتیم تا ضایعات هیستوپاتولوژیک را بررسی کنیمدوکسوروبیسینبرکلیه هادر موش های نر

2. مواد و روش ها

2.1. داروی شیمیایی

در مطالعه حاضر،دوکسوروبیسینهیدروکسی دانوروبیسین هیدروکلراید برای درمان برخی سرطان ها استفاده شد. داروی مورد استفاده به صورت تزریقی حاوی 50 میلی گرم در 25 میلی لیتر اسید کلریدریک 0.9 درصد تولید داروخانه Ebewe بود. bhUnterach اتریش این ملک دو بار در هفته داده می شود (10). دوزها در غلظت‌های مختلف با دوزهای mg/kg 1 (11)، mg/kg 2 (12) و دوز 3 mg/kg نیز استفاده شد (15).

2.2. حیوانات آزمایشی

این مطالعه در جمهوری عراق، دانشگاه دیاله، دانشکده دامپزشکی انجام شد. کلیه اقدامات تجربی، جراحی و پاتولوژیک در دانشکده دامپزشکی دانشگاه دیاله انجام شد. همه موش‌های نر در دمای {{0}} C، تغذیه استاندارد و آب و چرخه نور (12 ساعت روشنایی و تاریکی). پنجاه موش صحرایی نر با وزن 200-225 گرم و سن 2.5-3.5 ماهه به 2 گروه اصلی تقسیم شدند. اولین گروه اصلی از 30 موش نر استفاده کردند و 6 دوز دو بار در هفته به مدت سه هفته به آنها تزریق شد و به شش زیر گروه از هر گروه شامل 5 موش تقسیم شدند. به گروه اول 0.3 میلی لیتر محلول فیزیولوژیک فیزیولوژیک و به گروه دوم تزریق شد.دوکسوروبیسیندر غلظت mg/kg 1 به گروه سوم تزریق شددوکسوروبیسینبا غلظت 2 میلی گرم بر کیلوگرم، گروه چهارم همان دارو را با غلظت 3 میلی گرم بر کیلوگرم تزریق کردند، دارو با غلظت 4 میلی گرم بر کیلوگرم و با دوز 5 میلی گرم بر کیلوگرم تزریق شد.دوکسوروبیسیندومین گروه اصلی: 20 موش صحرایی نر با 12 دوز در مدت 6 هفته به میزان دو بار در هفته تزریق شدند. آنها به چهار زیر گروه از هر گروه شامل 5 موش تقسیم شدند. به گروه اول 0.3 میلی لیتر محلول فیزیولوژیک فیزیولوژیک و به گروه دوم تزریق شد.دوکسوروبیسینبا دوز mg/kg 1 دو بار در هفته به مدت 6 هفته، به گروه سوم تزریق شددوکسوروبیسینmg/kg 2 دو بار در هفته به مدت 6 هفته با mg/kg 3 دو بار در هفته به مدت 6 هفته تزریق شد. پس از گذشت 48 ساعت از آخرین تزریق(15)، حیوان با دی اتیل اتر بیهوش شد و سپس حفره قفسه سینه باز شد. راکلیهاستخراج و با نرمال سالین فیزیولوژیکی شسته شد تا خون خارج شود. نمونه ها با کاغذ صافی خشک شده و سپس در محلول رسمی خنثی 10 درصد قرار داده شدند.

2.3. مطالعه هیستوپاتولوژیک

راکلیه هامحلول فرمالین طبیعی (10 درصد) به مدت 24 ساعت نگهداری شد، به مدت 15 دقیقه با آب لوله کشی شسته شد و سپس با یک سری الکل اتیل 70 درصد، 95 درصد و 100 درصد، در موم پارافین در دمای 59 درجه به مدت 3 ساعت عبور داده شد. و در دو مرحله میکروتوم (Leica RM2235) نمونه را به ضخامت 4-5 میکرومتر برش داده و سپس لامها با رنگ آمیزی هماتوکسیلین و ائوزین رنگ آمیزی شدند. برای بررسی اسلایدها از یک میکروسکوپ جدید استفاده شد (17).

2.4. امتیاز آسیب

تعداد آسیب های گلومرولی بر اساس معاینه گلومرولی {{0}} محاسبه شد. در هر مقطع 40 گلومرول از ابتدای قشر تا عمق برداشته شد. 20 نمونه از حیوانات تزریق شده با mg/kg 5 به مدت 3 هفته گرفته شد، در مقابل گروه شاهد و حیواناتی که mg/kg 3 به مدت 6 هفته تزریق کردند. شدت ضایعه بسته به درصد آسیب گلومرول ها از O تا 4 پلاس محاسبه شد، 1 پلاس (ضایعه) شامل 25 درصد آسیب گلومرول ها می شود، در حالی که 4 به علاوه نشان دهنده آسیب 100 درصدی گلومرولی است. نمره آسیب با ضرب شدت آسیب (0 تا 4 به علاوه) در درصد گلومرول های آسیب دیده با همان درجه آسیب به دست می آید. بنابراین امتداد آسیب به هر نمونه بافت با افزودن این عدد به دست می آید. به عنوان مثال، اگر 5 گلومرول از 40 گلومرول دارای 1 ضایعه بعلاوه و 10 مورد از 40 دارای 3 ضایعه مثبت باشند، امتیاز آسیب (1*5/40) به علاوه (3*10/40)* 100=87 خواهد بود. درصد درصد آسیب گلومرولی برای هر نمونه بر اساس روش است (19).

3. نتایج

نتایج بررسی هیستوپاتولوژیککلیهاز موش های گروه کنترل ظاهر ساختار طبیعی موش ها را نشان دادکلیهقشر (شکل 1). بخش های بافتی ازکلیه هادر تیمار با غلظت 1 میلی گرم بر کیلوگرم دارو، ظهور احتقان در عروق خونی، انقباض تافت گلومرولی، اتساع کپسول بومان، نکروز سلول های مزانژیال، پیکنوز تافت گلومرولی، دژنراسیون، نکروز اپیتلیوم توبولار کلیوی، انفیلتراسیون مشاهده شد. سلول های التهابی بینابینی، تورم اپیتلیال لوله ای و کیست (شکل 2). در غلظت 2 میلی گرم بر کیلوگرم به مدت 3 هفته، انبساط در کپسول بومن و توبول های کلیوی، احتقان، خونریزی، نکروز سلولی مزانژیال، لوبولاسیون تافت گلومرول، فیبروز همراه با ائوزینوفیل و انفیلتراسیون کانونی سلول های التهابی مشاهده شد (شکل 3). هنگامی که با دوز 3 میلی گرم بر کیلوگرم به مدت 3 هفته درمان شد، احتقان همراه با ضخیم شدن دیواره عروق، نکروز گلومرول، دژنراسیون سلول های اپیتلیال لوله های کلیوی، لوبولاسیون و کیست مشاهده شد (شکل 4). نفوذ سلول های التهابی در اطراف گلومرول های کلیوی، خونریزی، تجزیه غشای پایه گلومرول های کلیوی، باریک شدن لوله های کلیوی و گسترش سایرین، وجود واکوئل و خونریزی (شکل 5). هنگامی که با دوز 4 میلی گرم بر کیلوگرم به مدت 3 هفته درمان شد، احتقان در رگ های خونی، التهاب بافت بینابینی، تورم سلول های اپیتلیال توبول های کلیوی و گسترش سایر لوله ها، خونریزی و وجود گچ های هیالین لوله ای مشاهده شد (شکل 6). ). کیست، واکوئل گلومرول و اتساع کپسول بومان (شکل 7). در حین تزریق mg/kg 5 به موشهادوکسوروبیسینبه مدت سه هفته، تغییرات چربی در اپیتلیوم لوله های کلیوی را نشان داد (شکل 8). احتقان، نفوذ سلول های التهابی، لوبوله (شکل 9). تزریق Img/kg به موش‌های صحرایی نر به مدت 6 هفته، اثرات کمتری نسبت به غلظت قبلی داشت، احتقان عروق خونی و تنگ شدن برخی از لوله‌های کلیوی مشاهده شد (شکل 10) و حیوان با دوز 2 درمان شد. mg/kg از همان دارو به مدت 6 هفته، نکروز شدید را نشان داد و با دوز 3mg/kg به مدت 6 هفته تزریق شد، گلومرولواسکلروز سگمنتال را نشان داد (شکل 11). خونریزی بین لوله های کلیوی و (شکل 12)، گچ های هیالین گلومرولی (شکل 13) و واکوئل تافت گلومرولی (شکل 14).

امتیاز مصدومیت:

نتایج پژوهش حاضر تفاوت معنی داری را در احتمال p<0.05 in="" the="" percentage="" of="" glomerular="" lesions="" in="" animals="" treated="" with="">دوکسوروبیسیندر غلظت 5 میلی گرم بر کیلوگرم به مدت سه هفته نسبت به گروه کنترل (5735±168،12) در حالی که در گروه شاهد (11.076±168.12) درصد بود. همچنین در درصد ضایعه گلومرولی تفاوت معنی داری وجود داشت. تیمار حیوانات با غلظت 3 میلی گرم بر کیلوگرم به مدت شش هفته، به (8623±133) در مقایسه با گروه کنترل که (93±14.75) درصد است (جدول 1).

میز 1:نشان دهنده درصد آسیب ± گلومرول های کلیوی در دوز 5 میلی گرم بر کیلوگرمدوکسوروبیسینبه مدت 3 هفته و 3mg/kg به مدت شش هفته در مقایسه با گروه کنترل.

اعداد به دنبال حروف مختلف تفاوت معنی داری در سطح احتمال نشان دادند (ص<0.05), according="" to="" the="" duncan="">

شکل 1:بخش هیستوپاتولوژیک ازکلیهساختار طبیعی سلول های اپیتلیال پوشش دهنده توبول کلیوی با ساختار طبیعی گلومرول ها را نشان داد (رنگ H&E.100X).	شکل 2:بخش هیستوپاتولوژیک نفوذ سلول های التهابی به ویژه فاگوسیت ها و لنفوسیت ها در بافت بینابینی (INF)، کیست (کیست)، دژنراسیون (DE)، نکروز (N) و خونریزی توبول کلیوی (H)، (رنگ H&E.400X) را نشان داد.	شکل 3:بخش هیستوپاتولوژیک ازکلیهنکروز شدید اپیتلیال توبول کلیه (N)، نکروز سلولهای مزانژیال و آتروفی کپسول بومان (AT)، لوبولاسیون (LOB) و انفیلتراسیون سلولهای التهابی (INF)، (رنگ آمیزی H&E.400X) را نشان داد.

شکل 4:بخش هیستوپاتولوژیک ازکلیهترومبوز در رگ خونی (THR)، احتقان (CON)، نفوذ سلول های التهابی (INF) و حذف رگ خونی (DEL)، (رنگ H&E.400X) را نشان داد.	شکل 5:بخش هیستوپاتولوژیک ازکلیهواکوئل (V)، خونریزی (H) را نشان داد. باریک شدن لومن توبول کلیه (L) و اتساع (DIL)، (رنگ H&E.400X).	شکل 6:بخش هیستوپاتولوژیک ازکلیهانفیلتراسیون سلول های التهابی (INF)، قالب های هیالین (CAST)، خونریزی (H) و واکوئل (V)، (رنگ آمیزی H&E.400X) را نشان داد.

شکل 7:بخش هیستوپاتولوژیک ازکلیهاسکلروز (SCL)، کیست بین لوبول‌ها (cys)، نفوذ بین لوله‌ها (INF) و واکوئل (V)، (رنگ‌آمیزی H&E. 100X) را نشان داد.	شکل 8:بخش هیستوپاتولوژیک ازکلیهتغییرات چربی توبول کلیه اندوتلیوم را نشان داد (رنگ آمیزی H&E.400X).	شکل 9:بخش هیستوپاتولوژیک ازکلیهخونریزی (H)، هیپرتروفی اندوتلیوم (HYP)، گلومرول لوبوله (LOB)، افزایش فضای کپسول انسانی (INC) و نفوذ سلول های التهابی (رنگ H&E.400X) را نشان داد.

شکل 10:بخش هیستوپاتولوژیک ازکلیهانفیلتراسیون سلولهای التهابی (INF) و خونریزی (H)، (رنگ آمیزی H&E.400X) را نشان داد.	شکل 11:بخش هیستوپاتولوژیک ازکلیهاسکلروز گلومرول (SCL)، (رنگ H&E.100X) را نشان داد.	شکل 12:بخش هیستوپاتولوژیک ازکلیهگسترش لوله های کلیوی (EXP)، تشکیل واکوئل (V)، (رنگ آمیزی H&E.400X) را نشان داد.

شکل 13:بخش هیستوپاتولوژیک ازکلیهیک قالب از هیالین (CAST) و واکوئل (V)، (رنگ H&E.400X) را نشان داد.	شکل 14:بخش هیستوپاتولوژیک ازکلیهواکوئل در گلومرول ها را نشان داد (رنگ H&E.400X).

4. بحث

نتایج نشان داد که واکوئل‌هایی در توفت گلومرولی و لوله‌های کلیوی وجود دارد، نتایج با نتایج (20) یکسان بود، که نشان‌دهنده تشکیل واکوئل در لوله‌های کلیوی بود، همانطور که یک مطالعه نشان داد که واکوئل در گلومرولی است (18). . مطالعه دیگری که به موش‌ها با یک دوز تزریق شد نشان داد که واکوئل‌های کوچکی تشکیل می‌شوند که در مراحل بعدی اندازه آنها افزایش می‌یابد (6). نتایج نشان داد که احتقان، خونریزی و ترومبوز وجود دارد و نتایج مشابه نتایج (21) بود که نشان دهنده احتقان و خونریزی شدید در بین لوله‌های کلیوی بود که با دوز 1 mg/kg یک بار در هفته به مدت چهار هفته تزریق شد. نتایج ما همچنین وقوع فیبروز در بافت بینابینی لوله ای را نشان داد. فیبرین یک پروتئین فیبری است که در التهاب معده وجود دارد و رنگ ائوزین را می گیرد (22). نتایج ما مشابه نتایج مطالعات دیگر بود، مطالعات دیگر کاهش نیتریک اکسید سنتتاز اندوتلیال را مشاهده کردند که منجر به بروز پروتئینوری، اسکلروز گلومرولی و فیبروز بافت بینابینی در هنگام تزریق به موش‌ها می‌شود.دوکسوروبیسین(23) و فیبروز کلیه (24). نتایج ما تغییرات دژنراتیو در گلومرول، انقباض تافت گلومرولی، اتساع کپسول بومان را نشان داد. باریک شدن لوله های کلیوی و با آنچه که او توسط (18) یافت یکسان است. در حالی که مطالعه دیگری گزارش داد که وقتی به موش ها بادوکسوروبیسیندر دوز 3 میلی‌گرم بر کیلوگرم، توفت گلومرولی در محل کوچکی از کپسول بومان وجود دارد که به گلومرول ظاهر کیسه‌ای حاوی باقیمانده تافت را می‌دهد. همچنین اشاره می شود که لوله پروگزیمال کلیه دچار آتروفی است که منجر به انبساط لومن آن می شود (28). مطالعه قبلی حاکی از اسکلروز گلومرولی خفیف و گچ های هیالین و نفوذ سلول های التهابی در بافت بینابینی بود (24) که اسکلروز گلومرولی نادر بود، دیگران گزارش دادند که گلومرولواسکلروز 9 ماه پس از تزریق با یک دوز مشاهده شد و همچنین تغییرات شدید را در بافت بینابینی لوله ای (20)، برخی دیگر نشان دادند که آسیب سلول های اپیتلیال به لوله های کلیوی و پروتئینوری، که در ابتدا از قالب های لوله ای تشکیل شده است، منجر به آسیب به بافت بینابینی می شود، جایی که لوله باعث انسداد و شکستن غشای پایه می شود. که منجر به واکنش التهابی لوله ای می شود (26). استفاده از یک دوز 10.5 میلی گرم بر کیلوگرم دارو منجر به تغییراتی در بافت از جمله آسیب بینابینی و سفتی گلومرول و تشکیل گچ های هیالین شد (25). گچ لوله ای حفره لوله های جمع کننده را مسدود می کند و این گچ ها باعث آتروفی و ​​لایه برداری سلول های اپیتلیال می شوند و توسط فاگوسیت ها و سلول های غول پیکر چند هسته ای احاطه می شوند (27). نتایج ما نشان داده است که تجمع چربی در سلول‌های اپیتلیال لوله‌ای لوله‌های کلیوی، که ظاهر شدن چربی و چربی طبیعی در سلول‌های اپیتلیال که می‌تواند ناشی از جذب سلول‌های لوله‌ای باشد، می‌تواند منجر به نفروز لیپوییدی مرتبط با دیابت یا هیپوکسی ناشی از آن شود. آسیب سمی

5. مراجع

[1] Vaidya, V. Ferguson, M.Bonventre, J. (2008). نشانگرهای زیستی ازحادکلیهصدمه, Annu, Rev, Pharmacol, Toxicol.48, 463-393.

[2] Pfaller, W. Gstraunthaler, G. (1998). آزمایش سمیت کلیوی در شرایط آزمایشگاهی - آنچه می دانیم و آنچه باید بدانیم، Environ. چشم انداز سلامتی 106، (2)،559.

[3] برونتون LL، چابنر BA، نولمن، BC. "Goodman & Gilman's" (2011). The Pharmacological Base of Therapeutics" 12th.EDT. نیویورک شیکاگو سان فرانسیسکو لیسبون لندن مادرید مکزیکو سیتی میلان. دهلی نو سن خوان سئول سنگاپور سیدنی تورنتو، صفحات: 1823،1821.

[4] Aly N. (2012). کارایی حفاظتی کوآنزیم Q10 بر سمیت کلیوی ناشی از آدریامایسین در موش صحرایی. J App Sci Res, 8(1),589-597.

[5] ابو سیف، HS. (2012). اثر محافظتی روتین و هسپریدین در برابردوکسوروبیسین-نافروتوکسیتی ناشی از. Beni-Suef Univ.J App Sci.,1 (2):1-18.

[6] Okuda S، Oh Y، Tsuruda H، Onoyama K، Fujima M. (1986). نفروپاتی ناشی از آدریامایسین به عنوان مدلی از بیماری مزمن پیشرونده گلومرولیکلیه.Internat.29:502-510.

[7] Venkatesan N، Punithavathi D، Arumugam V. (2000). کورکومین از سمیت کلیوی آدریامایسین در موش ها جلوگیری می کند. Br J Pharmacol.,129 (2):231- 234.

توجه: موارد فوق یک لیست مرجع کامل نیست