اهمیت پیش بینی بیان پروتئین 8 مرتبط با میلوئید کلیه در بیماران مبتلا به چاقی یا بیماری های کلیوی مرتبط با دیابت نوع 2

تماس: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ایمیل:audrey.hu@wecistanche.com

تاکاشیگه کووابارا¹کیوشی موری1،^2*، ماساتو کاساهارا^1,3هیدکی یوکوی¹، هیروتاکا اماماکی¹آکیرا ایشی¹، کنیچی کوگا¹، آکیرا سوگاوارا⁴، شینجی یاسونو³کنجی اوشیما³تاکاشی موریکاوا⁵یوشیو کونیشی⁵، ماساهیتو ایمانیشی⁵آکیرا نیشیاما⁶کازووا ناکائو^1,2، ماساشی موکویاما¹

¹گروه پزشکی و علوم بالینی، دانشکده پزشکی دانشگاه کیوتو، کیوتو، ژاپن،

²مرکز نوآوری پزشکی، دانشکده پزشکی فارغ التحصیل دانشگاه کیوتو، کیوتو، ژاپن،

³گروه تحقیقات EBM، موسسه پیشرفت علوم بالینی و ترجمه، بیمارستان دانشگاه کیوتو، کیوتو، ژاپن،

⁴بخش نفرولوژی، بیمارستان صلیب سرخ اوزاکا، اوزاکا، ژاپن،

5 بخش نفرولوژی و فشار خون، بیمارستان عمومی شهر اوزاکا، اوزاکا، ژاپن،

6 گروه فارماکولوژی، دانشکده پزشکی دانشگاه کاگاوا، کاگاوا، ژاپن

خلاصه

زمینه و هدف: ما گزارش کرده‌ایم که گیرنده شبه 4 (TLR4) و یکی از لیگاندهای درون‌زای آن، پروتئین 8 مرتبط با میلوئید (MRP8 یا S100A8)، نقش مهمی در پیشرفت نفروپاتی دیابتی در موش دارد. هدف از این مطالعه بررسی اهمیتکلیهبیان MRP8 در بیماران مبتلا بهچاقی- یا مرتبط با دیابت نوع 2بیماری های کلیوی. روش‌ها: در افراد دیابتی، چاق یا شاهد، سطح بیان mRNA و پروتئین MRP8 در نمونه‌های بیوپسی کلیه با RT-PCR و ایمونوهیستوشیمی بلادرنگ (به ترتیب n=28 و 65) و ارتباط آنها با پایه تعیین شد. و پارامترهای پیش آگهی مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. اثرات MRP8 بر بیان ژن پیش التهابی با استفاده از ماکروفاژها مورد بررسی قرار گرفت. نتایج:کلیهسطح بیان ژن و پروتئین MRP8 در گروه های چاق یا دیابتی در مقایسه با گروه کنترل افزایش یافت. در بین همه افراد، با تجزیه و تحلیل رگرسیون خطی تک متغیره، تعداد سلول‌های مثبت گلومرولی8-و MRP بین‌ابینی لوله‌ای8-منطقه مثبت در ابتدا، هر دو نه تنها با عوامل خطر شناخته‌شده مختلف برای نفروپاتی دیابتی همبستگی داشتند (مانند مانند فشار خون سیستولیک، پروتئینوری، و کراتینین سرم) بلکه با میزان گلومرولواسکلروز و فیبروز توبولو بینابینی. فاکتورهای مستقلی که یک سال بعد سطح پروتئین ادرار را پیش‌بینی می‌کنند، با تجزیه و تحلیل چند متغیره مورد بررسی قرار گرفتند و شامل تعداد سلول‌های مثبت گلومرولی (b=0.59، P،{0.001)، پروتئینوری بودند. (b=0.37, P=0.002) و فشار خون سیستولیک (b=0.21, P=0.04) در ابتدا، پس از تنظیم برای خطر شناخته شده عوامل. بیان پروتئین MRP8 در ماکروفاژهای CD{17} مثبت و توبول‌های آتروفیک مشاهده شد. در ماکروفاژهای موش کشت شده، عبارات سیتوکین های پیش التهابی ناشی از پروتئین MRP8 نیز باعث القای خودکار MRP8 به روشی وابسته به TLR شد.

نتیجه‌گیری: به نظر می‌رسد بیان گلومرولی MRP8 با پیشرفت پروتئینوری در بیماران چاق یا دیابتی نوع 2، احتمالاً با ایجاد تغییرات التهابی در ماکروفاژها از طریق سیگنال‌دهی TLR4، مرتبط باشد.

اثرات سیستانچ: درمان بیماری های کلیوی

مقدمه

التهاب مزمن نقش مهمی در پاتوژنز دیابت یاچاقیو عوارض قلبی عروقی آن [1]. دخالت گیرنده های ایمنی ذاتی و لیگاندهای درون زا در فرآیند التهاب مزمن دخیل است. پروتئین 8 مرتبط با میلوئید (MRP8، همچنین به عنوان S100A8 یا calgranulin A شناخته می شود) در ابتدا به عنوان یک پروتئین متصل شونده به کلسیم سیتوپلاسمی در نوتروفیل ها و مونوسیت ها [2] شناسایی شد و به طور گسترده به عنوان یک لیگاند درون زا قوی برای گیرنده 4 (TL4) شناخته شد. در بیماری های مختلف از جمله شوک سپتیک، اختلالات عروقی و خودایمنی [3،4،5]. ما اخیراً پیشنهاد کرده‌ایم که سیگنال‌دهی MRP8/TLR4 نقش مهمی در پیشرفت نفروپاتی دیابتی ناشی از هیپرلیپیدمی دارد [6]. ماکروفاژهای گلومرولی و سلول های مجرای جمع کننده به ترتیب منابع اصلی MRP8 در مدل های موش نفروپاتی دیابتی [6] و فیبروز کلیوی [7] هستند. سطوح پلاسمایی MRP8، که معمولاً یک کمپلکس هترودیمری با شریک اتصال MRP14 در جریان خون تشکیل می‌دهد، در افراد چاق افزایش می‌یابد [8،9]. با این حال، هیچ گزارشی مبنی بر بررسی بیان کلیوی MRP8 در بیماران مبتلا به چاقی یا چاقی وجود نداردنوع2 دیابتو ارتباط آن با پیش آگهی کلیه

هدف از این مطالعه تعیین سطح بیان mRNA و پروتئین MRP8 در بدن بودکلیهبیماران ژاپنی مبتلا به نفروپاتی دیابتی (DN)،چاقیگلومرولوپاتی مرتبط (ORG)، سندرم نفروتیک با حداقل تغییر (MCNS) یا ناهنجاری گلومرولی خفیف (MGA)، که همگی با بیوپسی کلیه تشخیص داده شدند، و برای ارزیابی اینکه آیا بیان MRP8 کلیه می تواند پیامدهای کلیوی را پیش بینی کند یا خیر.

سیستانچ می تواند عملکرد کلیه را بهبود بخشد

مواد و روش ها

بیانیه اخلاق

مطالعه انسانی بر اساس اصول بیان شده در اعلامیه هلسینکی انجام شد و به ترتیب توسط کمیته‌های اخلاقی تحقیقات انسانی دانشکده پزشکی دانشگاه کیوتو و بیمارستان عمومی شهر اوزاکا تأیید شد. همه شرکت کنندگان رضایت آگاهانه کتبی دادند. پروتکل مطالعه حیوانی توسط کمیته تحقیقات حیوانی دانشکده پزشکی دانشگاه کیوتو (شماره مجوز: Med Kyo 13318) تایید شد. تمام جراحی حیوانات تحت بیهوشی پنتوباربیتال سدیم انجام شد و تمام تلاش ها برای به حداقل رساندن رنج انجام شد.

موضوعات را مطالعه کنید

بیماران پروتئینوری باچاقییا دیابت نوع 2 که تحت بیوپسی کلیه قرار گرفتند در این مطالعه وارد شدند. بیماران مبتلا به بیماری عفونی، سرطان، بیماری کبد یا بیماری کلاژن از مطالعه خارج شدند. پروتئینوری به عنوان پروتئین ادراری بیشتر از 0.5 گرم در گرم کراتینین یا آلبومین ادراری بیشتر از 300 میلی گرم در گرم کراتینین در حداقل دو اندازه گیری متوالی تعریف شد.چاقیبه عنوان شاخص توده بدنی (BMI) بیشتر از 25 تعریف شد.{1}} (kg/m)²). دیابت نوع 2 مطابق با معیارهای سازمان بهداشت جهانی تشخیص داده شد. اندازه گیری های بیوشیمیایی در پذیرش برای بیوپسی کلیه به عنوان ویژگی های پایه برای تجزیه و تحلیل مقطعی استفاده شد. نرخ فیلتراسیون گلومرولی تخمینی (eGFR) با استفاده از یک معادله پیش‌بینی ساده شده پیشنهاد شده توسط انجمن نفرولوژی ژاپن محاسبه شد: eGFR (ml/min/1.73 m²)=1946 [سن (سال)] 20.287 6 [کراتینین سرم (mg perdl)] 21.{4}}.739 (برای زنان)، که یک اصلاح محلی معتبر MDRD است [ 10]. غلظت سرمی کراتینین با استفاده از روش آنزیمی اندازه گیری شد.

برای ایمونوهیستوشیمی، 65 بیمار ژاپنی که بین سال های 2000 تا 2011 تحت بیوپسی کلیه در بخش پزشکی و علوم بالینی، بیمارستان دانشگاه کیوتو قرار گرفتند، مورد بررسی قرار گرفتند. تشخیص های ثابت شده با بیوپسی همه بیماران در این دوره در جدول S1 در فایل S1 فهرست شده است. افراد مورد بررسی در این کار شامل DN (n=19)، ORG (n=10) و افراد غیر چاق و کنترل غیر دیابتی بودند که به عنوان MGA(n=19) یا تشخیص داده شدند. MCNS (n=17). برخی موارد در این دسته‌ها حذف شدند، زیرا نمونه‌های باقی‌مانده موجود حاوی کمتر از 10 گلومرول بودند. تعریف DN شامل (1) بیش از 5 سال پس از شروع دیابت، (2) وجود میکرو یا ماکرو آلبومینوری، (3) تغییرات هیستوپاتولوژیک سازگار با DN مانند ضخیم شدن غشای پایه گلومرولی، انبساط مزانژیال، ندولار است. اسکلروز (ندول های کیملستیل-ویلسون) و/یا هیالینوز شریانی و (4) حذف سایر علل اختلالات کلیوی [11]. ORG از نظر مورفولوژیکی به عنوان گلومرولواسکلروزیس سگمنتال کانونی و/یا گلومرولومگالی در افراد دارای هر دو تعریف شد.چاقیو پروتئینوری، که تعاریف آنها در بالا توضیح داده شد [12،13].

برای تجزیه و تحلیل بیان mRNA، نمونه‌های با کیفیت پایین، که در آن‌ها سطوح RNA ریبوزومی 18S (rRNA) کمتر از حد حساسیت تشخیص توسط RT-PCR بلادرنگ بود، حذف شدند. افراد مورد مطالعه شامل 22 بیمار دیابتی نوع 2 بودند که بین سال های 2000 تا 2010 در بیمارستان عمومی شهر اوزاکا بیوپسی کلیه انجام شده بودند و 6 فرد کنترل غیر دیابتی که MGA بیوپسی اثبات شده داشتند.

جداول 1 و 2 خصوصیات بالینی پایه بیمارانی را که به ترتیب توسط ایمونوهیستوشیمی یا تجزیه و تحلیل بیان ژن مورد بررسی قرار گرفتند، خلاصه می کند. برای میکروسکوپ نوری، نمونه‌های بافت طبق روش‌های استاندارد پردازش شدند. برش ها با هماتوکسیلین-ائوزین، اسید پریودیک-شیف، اسید پریودیک متنامین نقره یا ماسون تری کروم (شکل S1) رنگ آمیزی شدند. نسبت تعداد گلومرول‌های مبتلا به اسکلروز جهانی در میان گلومرول‌های کل و نواحی نسبی فیبروز توبولو بینابینی به طور مستقل توسط دو پاتولوژیست بی‌اطلاع از تشخیص و داده‌های بالینی ارزیابی شد.

اثرات سیستانچ: درمان بیماری های کلیوی

تعریف پیامدهای کلیوی

دو شاخص پیش آگهی زیر به ترتیب با تجزیه و تحلیل رگرسیون خطی و رگرسیون لجستیک مورد بررسی قرار گرفتند: (1) میزان پروتئینوری اندازه گیری شده در یک سال پس از بیوپسی، و (2) رویداد کلیوی به عنوان افزایش سالانه کراتینین سرم به میزان 50/0 درصد تعریف شد. از ابتدای شروع یا شروع دیالیز مزمن.

ایمونوهیستوشیمی

ایمونوهیستوشیمی MRP8 و CD68 با استفاده از آن انجام شدکلیهمقاطع (ضخامت 4 میلی متر) با 4 درصد پارافورمالدئید بافر ثابت شدند. پس از بازیابی آنتی ژن توسط بافر سیترات، مقاطع کلیه با 10 درصد سرم بز و به دنبال آن MRP8 ضد انسان موش (1:100؛ BMA biomedicals, Augst, Switzerland) [14] یا آنتی بادی های ضد انسان CD68 موش (1:50) انکوبه شدند. ؛ DAKO، Ely، UK)، به ترتیب. آنتی بادی های اولیه با آنتی بادی ثانویه کونژوگه با پراکسیداز ترب کوهی و 3،{14} دی آمینوبنزیدین تترا هیدروکلراید (داکو ایالات متحده آمریکا، Carpinteria، CA) مشاهده شدند. هسته ها با هماتوکسیلین ضد رنگ آمیزی شدند. سلول‌های MRP{15}مثبت در بیش از 10 گلومرول شمارش شدند، و ناحیه مثبت MRP{17}در توبولواینترستیتیوم به‌طور کمی اندازه‌گیری شد تا میانگینی برای هر فرد با استفاده از نرم‌افزار MetaMorph 7.5 (Molecular Devices, Downingtown, PA, USA) به دست آید. ). کلکالیزاسیون سلول‌های CD{20}} و MRP{21} مثبت با بخش‌های سریال ارزیابی شد. هیچ سیگنال MRP8 و CD68 در کنترل های منفی که بدون اولین آنتی بادی رنگ آمیزی شده بودند وجود نداشت (شکل S2). قبل از انکوباسیون آنتی بادی ضد MRP8 با 20 مولر اضافی پروتئین نوترکیب MRP8 انسانی (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) در دمای 4uC در طول شب، رنگ‌آمیزی به طور قابل توجهی کاهش یافت، اگر نه به طور کامل، از ویژگی آنتی‌بادی حمایت بیشتری کرد (شکل S3). .

سیستانچ برای درمان کلیه

ارزیابی بیان mRNA

منجمدکلیههمانطور که قبلاً توضیح داده شد، مقاطع به بافت‌های گلومرولی و غیرگلومرولی توسط میکرو تشریح لیزری (LM200؛ Olympus، توکیو، ژاپن) جدا شدند [15]. RNA کل با کیت کوچک RNeasy (Qiagen، توکیو، ژاپن) استخراج شد. سطوح بیان mRNA توسط TaqMan زمان واقعی PCR (Applied Biosystems، Foster City، CA، USA) تعیین شد [16،17]. سطح بیان همه ژن ها توسط سطوح 18S rRNA (کنترل داخلی) نرمال شد. برای توالی پرایمر و پروب به جدول S2 در فایل S1 مراجعه کنید. یوکاریوتی 18S rRNA با از پیش توسعه یافته TaqMan Assay Reagents (Applied Biosystems) شناسایی شد.

جدول 1. مشخصات بالینی اولیه بیماران در بیوپسی کلیه که برای بیان پروتئین MRP8 با روش ایمونوهیستوشیمی مورد بررسی قرار گرفتند.

MGA: ناهنجاری کوچک گلومرولی، MCNS: سندرم نفروتیک با حداقل تغییر، ORG:چاقی-گلومرولوپاتی مرتبط، DN: نفروپاتی دیابتی، BMI: شاخص توده بدن، BUN: نیتروژن اوره خون، CRP: پروتئین واکنشی C. داده ها به معنای 6 SD هستند. *تفاوت کلی بین گروه های MGA، MCNS، ORG و DN توسط ANOVA.doi:10.1371/journal.pone.0088942.t001 مقایسه شد.

درمان ماکروفاژها با MRP8

ماکروفاژهای مشتق شده از مغز استخوان از موش های نوع وحشی یا ناک اوت TLR4 (KO) [18] در زمینه ژنتیکی C57BL/6J (Oriental BioService، کیوتو، ژاپن) همانطور که قبلاً توضیح داده شد [6] تولید شدند. به طور خلاصه، پس از لیز گلبول‌های قرمز، سلول‌های مغز استخوان در محیطی حاوی 20 درصد سرم جنین گوساله و 50 نانوگرم در میلی‌لیتر فاکتور تحریک‌کننده کلنی ماکروفاژ انسانی نوترکیب (Peprotech، Rocky Hill، NJ، ایالات متحده) مجدداً معلق شدند و در محل کشت داده شدند. 37uC در اتمسفر 5 درصد CO2. در روز 7، ماکروفاژها با MRP8 موش نوترکیب (آبنووا، تایپه، تایوان) یا وسیله نقلیه به مدت 4 ساعت انکوبه شدند. پلی‌میکسین B (25 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر، NacalaiTesque، کیوتو، ژاپن) به هر چاهک اضافه شد تا آلودگی اندوتوکسین همانطور که قبلاً توضیح داده شد به حداقل برسد [3،19]. نواندوتوکسین در هر غلظتی از MRP8 که بعداً با 25 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر پلی‌میکسین B توسط کیت سنجش اندوتوکسین ToxinSensorChromogenic LAL (GenScript، Piscataway، NJ، USA) مورد آزمایش قرار گرفت، شناسایی شد. RNA کل سلول ها با RNeasy MiniKit استخراج شد و سطوح بیان mRNA اینترلوکین بتا (IL{23}}b)، فاکتور نکروز تومور آلفا (TNFa) و MRP8 توسط TaqMan بلادرنگ تعیین شد. RT-PCR. سطح بیان همه ژن‌ها توسط سطوح GAPDH جوندگان (کنترل داخلی، معرف‌های سنجش از پیش توسعه‌یافته TaqMan) نرمال شد. توالی های پرایمر و پروب برای PCR بلادرنگ در جدول S2 در فایل S1 فهرست شده اند.

تحلیل آماری

داده ها به عنوان میانگین 6 SD یا میانگین فاصله اطمینان 695 درصد (CI) در صورت لزوم بیان می شوند. برای مقایسه بین چهار گروه از آنالیز واریانس یک طرفه یا دو طرفه با تحلیل تعقیبی بونفرونی استفاده شد و متغیرهای طبقه‌بندی با استفاده از آزمون x2 مقایسه شدند. برای مقایسه بین دو گروه از آزمون t غیر زوجی دانشجو استفاده شد. ضرایب همبستگی اسپیرمن برای تعیین ارتباط بین دو متغیر برآورد شد. برای بررسی اثرات متغیرهای پایه در تعیین میزان بیان MRP8 گلومرولی یا لوله‌ای بینابینی یا سطح پروتئین ادراری یک سال پس از بیوپسی، تجزیه و تحلیل رگرسیون خطی تک متغیره و چند متغیره انجام شد. از تحلیل رگرسیون لجستیک برای تجزیه و تحلیل متغیرهای توضیحی پیش بینی کننده وقوع حوادث کلیوی استفاده شد. تمامی داده ها با استفاده از نرم افزار StatView 5.{9}} (SAS InstituteInc., Cary, NC, USA) تجزیه و تحلیل شدند. مقادیر P،{10}}.05 از نظر آماری معنی دار در نظر گرفته شد.

اثرات سیستانچ: درمان بیماری های کلیوی

نتایج

ما سطوح بیان پروتئین MRP8 را در آن مقایسه کردیمکلیهدر میان گروه‌های DN، ORG و غیر چاق، کنترل غیر دیابتی (MGA و CNS). تجزیه و تحلیل ایمونوهیستوشیمی نشان داد که تعداد سلول‌های مثبت گلومرولی (شکل 1A) و ناحیه مثبت MRP بینابینی (شکل 1B) در DN به طور قابل‌توجهی بزرگ‌تر از گروه‌های دیگر از جمله MGA، MCNS بود. و ORG (P<0.01). org="" subjects="" also="" showed="" a="" tendency="" of="" elevated="" mrp8expression="" compared="" to="" mga="" and="" mcns="" (fig.="" 1a,="" 1b).="" furthermore,="" glomerular="" mrp8="" mrna="" expression="" levels="" in="" dn="" subjects="" were="" significantly="" higher="" compared="" to="" non-dm="" control="" subjects="" (p,0.01,="" fig.="" 1c).="" in="" non-glomerulus="" tissues,="" mrp8mrna="" expression="" levels="" were="" much="" lower="" than="" those="" in="" glomeruli,="" both="" in="" non-dm="" and="" dm="" groups.="" abundant="" mrp8="" protein="" expression="" in="" the="" tubulointerstitium="" of="" dn="" cases="" was="" not="" clearly="" reflected="" into="" increased="" mrna="" expression,="" which="" may="" be="" partly="" caused="" by="" deposition="" of="" blood-derived="" proteins="" in="" the="" tubulointerstitium="" as="" discussed="" in="" the="" next="" section.="" as="" shown="" in="" representative="" photos="" (fig.="" 1d–g,="" see="" fig.="" s4="" in="" detail),="" renal="" biopsy="" samples="" from="" mga="" and="" mcns="" subjects="" showed="" few="" mrp8-positive="" cells="" in="" glomeruli="" (fig.="" 1d,="" 1e="" and="" fig.="" s4).="" in="" org="" subjects,="" somemrp8-positive="" cells="" appeared="" in="" glomeruli="" and="" tubulointerstitium(fig.="" 1f="" and="" fig.="" s4).="" in="" dn="" subjects,="" a="" marked="" increase="" of="" mrp8-expressing="" cells="" in="" glomeruli="" and="" significant="" expansion="" of="" mrp8-positive="" areas="" in="" the="" tubulointerstitium="" were="" observed="" in="" a="" focal="" manner="" (fig.="" 1g="" and="" fig.="" s4).="" of="" note,="" mrp8-positive="" cells="" were="" absent="" in="" nodular="" sclerosing="" lesions="" of="" diabetic="" glomeruli="" (fig.="" s4:dn="" case="" 2,="" 3)="" as="" described="" previously="" for="" sclerotic="" lesions="" in="" anca-associated="" glomerulonephritis="" [20].="" paired="" immunohistochemistry="" for="" cd68="" and="" mrp8="" in="" serial="" sections="" suggested="" thatmrp8="" signals="" were,="" at="" least="" in="" part,="" observed="" in="" macrophages="" expressing="" cd68="" (fig.="" 2),="" as="" we="" reported="" in="" a="" mouse="" model="" of="" diabetic="" nephropathy="" [6].="" besides,="" focally="" injured="" atrophic="" tubular="" epithelial="" cells="" also="" strongly="" expressed="" mrp8,="" which="" were="" surrounded="" by="" mrp8(+)-,="" cd68(+)-positive="" macrophages="" (fig.="" 2,="" fig="" s4:="" dn="" case="" 3-5).="" in="" the="" cases="" with="" nephrotic="" range="" proteinuria,="" mrp8="" staining="" was="" also="" observed="" along="" brush="" borders="" of="" proximal="" tubules="" both="" in="" mcns="" and="" dn="" cases="" (fig.="" s4).="" since="" the="" sample="" number="" of="" mrna="" expression="" was="" too="" small="" for="" multivariate="" analysis,="" the="" following="" analyses="" were="" performed="" using="" data="" from="" patients="" studied="" by="">

جدول 2. مشخصات بالینی اولیه بیماران در بیوپسی کلیه که برای بیان mRNA MRP8 توسط RT-PCR بلادرنگ آنالیز شدند.

ارتباطات بینکلیهسیگنال های MRP8 و پارامترهای بالینی پایه در زمان بیوپسی کلیه به صورت مقطعی تجزیه و تحلیل شدند (جدول 3). با تجزیه و تحلیل تک متغیره، بیان پروتئین MRP8 گلومرولی و/یا توبولو بینابینی به طور قابل توجهی با سن، فشار خون سیستولیک و دیاستولیک، پروتئین ادراری، سطح سرمی کراتینین، کلسترول BUN و HDL، eGFR، و میزان گلومرولواسکلروز جهانی و فیبرواینترها مرتبط بود. این پارامترها پس از حذف فشار خون دیاستولیک، eGFR و BUN به دلیل همخطی بودن، با تجزیه و تحلیل چند متغیره بیشتر مورد بررسی قرار گرفتند. درصد فیبروز توبولو بینابینی به طور مستقل با سیگنال‌های MRP8 گلومرولی (b=0.62، P تنظیم‌شده=0.02) و سیگنال‌های tubulointerstitialMRP8 (b {= 0}.85، P تنظیم‌شده) همبستگی داشت. 0.001)، به ترتیب. علاوه بر این، سیگنال های MRP8 توبولو بینابینی نیز به طور مستقل با پروتئینوری پایه همبستگی داشتند (b=0.20، P=0.01 تنظیم شده). یک الگوی توزیع متمایز از سایر گروه ها، به ویژه در مورد پروتئین ادرار و سطح کلسترول LDL سرم (شکل S5A-D، S6A-D). حذف گروه MCNS همبستگی بین سیگنال‌های MRP8 و پروتئین ادراری یا سطح کلسترول LDL سرم را بهبود بخشید (شکل S5E-F، S6E-F). بنابراین، ما یک آنالیز فرعی بدون در نظر گرفتن بیماران MCNS انجام دادیم و دریافتیم که پروتئین ادراری یک عامل مستقل مرتبط با سیگنال‌های MRP8 گلومرولی با تجزیه و تحلیل چند متغیره است (جدول 4؛ b=0}.36، P=0 تنظیم شده).03 ).

در مرحله بعد، ما تحلیل‌های رگرسیون خطی یا رگرسیون لجستیک را برای شناسایی عوامل توضیحی پیش‌بینی‌کننده پیامدهای کلیوی انجام دادیم که میزان پروتئینوری یک سال بعد و رویداد کلیوی در یک سال بود. از آنجایی که ارتباط خوبی بین سیگنال‌های MRP8 گلومرولی و لوله‌ای بینابینی وجود داشت (شکل S7؛ R=0.67,P,0.001)، این پارامترها به طور متناوب در آنالیزهای بعدی ثبت شدند. . ما ارتباط بین پارامترهای پایه و پروتئین ادراری را در یک سال پس از بیوپسی کلیه با تجزیه و تحلیل رگرسیون چندگانه ارزیابی کردیم. همانطور که در جدول 5 نشان داده شده است، سیگنال MRP8 گلومرولی (b=0.59، P,0.001 تنظیم شده) یک عامل پیش بینی کننده برای میزان پروتئینوری یک سال بعد و همچنین فشار خون سیستولیک پایه (b {{13}) بود. }.21، P=0.04) تنظیم شده و پروتئینوری پایه (b=0.37، P=0.002 تنظیم شده) بود. این پارامترها مستقل از سایر عوامل خطر نفروپاتی دیابتی شناخته شده از جمله اختلال عملکرد کلیوی (کراتینین سرم) و میزان اسکلروز جهانی و فیبروز توبولو بینابینی بودند [11،21-24]. از سوی دیگر، سیگنال MRP8 توبولو بینابینی (b=0.34، P=0.09 تنظیم شده) یک عامل پیش‌بینی‌کننده مستقل برای سطح پروتئین ادرار یک سال بعد نبود. حوادث کلیوی در 7 بیمار (6 در DN و 1 در موارد ORG) در یک سال پس از بیوپسی کلیه رخ داد. با تجزیه و تحلیل تک متغیره، نه تنها میزان گلومرولواسکلروز و فیبروز توبولو بینابینی، و سیگنال‌های گلومرولی و لوله‌ای بینابینی MRP8، بلکه فشار خون، اختلال عملکرد کلیوی و سطوح پروتئین ادراری در ابتدا عوامل پیش‌بینی‌کننده مهمی برای وقوع حوادث کلیوی بودند. با این حال، با تجزیه و تحلیل چند متغیره، متغیرهای کمکی آنها توسط یکدیگر لغو شدند (جدول S3 در فایل S1)، احتمالاً به دلیل همبستگی زیاد بین این پارامترها.

در نهایت، ما قدرت MRP8 را به عنوان یک لیگاند درون زا برای TLR4 با استفاده از ماکروفاژهای کشت شده بررسی کردیم. در ماکروفاژهای مشتق شده از مغز استخوان از موش‌های نوع وحشی، ژن‌های سیتوکین پیش‌التهابی مانند IL-1b و TNFa توسط پروتئین MRP8 ایجاد می‌شود و همچنین باعث القای خودکار MRP8، به روشی وابسته به دوز بین 1{{{ 15}}-1000 ng/ml. این اثرات MRP8 تقریباً به میزان دو سوم در ماکروفاژهای به‌دست‌آمده از موش‌های TLR4 KO سرکوب شد (P,0.01) (شکل 3).

شکل 1. آنالیزهای ایمونوهیستوشیمی و mRNA برای MRP8 درکلیهنمونه های بیوپسی تعیین کمیت MRP گلومرولی{{0}}شمار سلولی مثبت (A) و MRP توبولو بینابینی8- ناحیه مثبت (B). بیان mRNA MRP8 در فراکسیون های گلومرولی و غیرگلومرولی (C). میله های باز: کنترل های غیر چاق و غیر دیابتی که MGA یا MCNS هستند، میله های بسته: ORG یا DN (A-C). تصاویری از گروه‌های MGA، MCNS، ORG و DN (D-G). MGA: ناهنجاری کوچک گلومرولی، MCNS: سندرم نفروتیک با حداقل تغییر، ORG: گلومرولوپاتی مرتبط با چاقی، DN: نفروپاتی دیابتی. *P,0.01.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g001

بحث

مطالعه حاضر نشان داده است که MRP8 به وفور در گلومرول ها و توبولواینترستیتوم بیماران دارای DNs در مقایسه با ORG و گروه کنترل غیر چاق و غیر دیابتی (MGA و MCNS) بیان می شود. علاوه بر این، در افراد ORG، سطح بیان MRP8 بیشتر از افراد MGA یا MCNS بود. در بررسی مقطعی پایه خطی شامل همه افراد، با تجزیه و تحلیل رگرسیون خطی تک متغیره، تعداد سلول‌های گلومرولی8-تعداد سلول‌های مثبت8-و ناحیه مثبت لوله‌ای بینابینی هر دو نه تنها با عوامل خطر شناخته شده مختلف برای نفروپاتی دیابتی (مانند فشار خون سیستولیک، پروتئینوری و کراتینین سرم) و همچنین با وسعت گلومرولواسکلروز و فیبروز توبولو بینابینی. با تجزیه و تحلیل چند متغیره، ناحیه مثبت MRP{7}Tubulointerstitial به طور قابل توجهی با پروتئینوری و فیبروز توبولو بینابینی مرتبط بود. تعداد سلول‌های مثبت MRP گلومرولی در تجزیه و تحلیل اولیه با فیبروز بینابینی توبولی و در آنالیز فرعی به استثنای گروه MCNS با پروتئینوری ارتباط داشت. ایمونوهیستوشیمی نشان داد که MRP8 حداقل تا حدی توسط ماکروفاژهای بیانگر CD68 و توبول‌های آتروفیک بیان می‌شود. این یافته ها این احتمال را افزایش می دهد کهکلیهسیگنال‌های MRP8 در گلومرول‌ها یا توبولواینترستیتیوم ممکن است به عنوان نشانگرهای جدید نفروپاتی دیابتی عمل کنند.

شکل 2. محلی سازی بیان پروتئین CD68 و MRP8 در مقاطع سریال موارد نفروپاتی دیابتی. بیان CD68 (A, B) و بیان MRP8 (C, D) در نمونه های جفت کلیه (A و C، orB و D). فلش‌ها نشان‌دهنده محلی‌سازی سیگنال‌های CD68 و MRP8 است.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g002

در مطالعه پیش آگهی، تجزیه و تحلیل چند متغیره نشان داد که سطح پروتئین ادرار در یک سال پس از بیوپسی کلیه به طور مستقل با تعداد سلول‌های مثبت گلومرولی، پروتئین ادرار و فشار خون سیستولیک در ابتدا مرتبط بود. قابل توجه، بیان MRP8 گلومرولی قوی‌ترین همبستگی را با پروتئین ادرار یک سال بعد نشان داد (b= 0.87)، حتی قوی‌تر از پروتئین ادراری پایه (b=0.78)، با تجزیه و تحلیل تک متغیره. این تا حدی به این دلیل است که بیان گلومرولی MRP8 در اشکال "خوش خیم" پروتئینوری مانند موارد مشاهده شده در بیماران MCNS که سطح پروتئینوری آنها در تشخیص با بیوپسی کلیه بسیار بالا است، تا حد زیادی افزایش نمی یابد اما معمولاً ظرف یک سال پس از شروع درمان سرکوب کننده سیستم ایمنی برطرف می شود. این یافته‌ها نشان می‌دهد که بیان MRP8 گلومرولی ممکن است دارای یک ماهیت پیش‌بینی‌کننده منحصربه‌فرد به‌عنوان نشانگر بیماری باشد، که نمی‌تواند با پروتئینوری پایه یا آنالیز پاتولوژیک معمولی که گلومرولواسکلروز جهانی و فیبروز توبولو بینابینی را ارزیابی می‌کند، جایگزین کند. علاوه بر این، ما حدس می‌زنیم که بیان MRP8 گلومرولی یک نشانگر یا تماشاگر ساده نیست، بلکه یک بازیکن فعال در آسیب گلومرولی است که در زیر مورد بحث قرار می‌گیرد.

ضریب تعیین (R2) محاسبه شده با پارامترهای توضیحی ثبت شده در تحلیل رگرسیون چندگانه به ترتیب 0.52* و 0.74# بود. y، سال؛ BP، فشار خون؛ gCr، گرم کراتینین؛ T-chol، کلسترول تام؛ HDL-Chol، HDL کلسترول؛ LDL-chol، LDL کلسترول؛ GS، گلومرولواسکلروز؛ TI, tubulointerstitial.doi:10.1371/journal.pone.0088942.t003

جدول 4. تحلیل فرعی رابطه بین پارامترهای بالینی پایه و سیگنال های MRP8، پس از حذف گروه MCNS.

جدول 5. تجزیه و تحلیل رگرسیون چندگانه برای شناسایی عوامل پیش بینی کننده سطح پروتئین ادرار 1 سال پس از بیوپسی کلیه

شکل 3. اثرات MRP8 بر ماکروفاژهای مشتق شده از مغز استخوان. ماکروفاژهای مشتق از مغز استخوان (BMDM) با MRP8 موش نوترکیب به مدت 4 ساعت تحریک شدند. نوارهای خطا 95 درصد CI را نشان می دهد و تجزیه و تحلیل های آماری با مقادیر log-transformed انجام شد. ANOVA دو طرفه اثرات قابل توجهی از ژنوتیپ ها، غلظت MRP8 و برهمکنش آنها را برای بیان هر 3 ژن نشان داد (P,{11}}.001 برای همه مقایسه‌ها). n=4. WT، نوع وحشی؛ KO، ناک اوت؛ IL{15}}b، اینترلوکین 1 بتا؛ TNFa، فاکتور نکروز تومور آلفا. *P,0.01 در بین غلظت‌های مختلف، #P,0.01 در میان ژنوتیپ‌ها.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g003

در تلاش دیگری از یک مطالعه طولی، تجزیه و تحلیل رگرسیون لجستیک نتوانست هیچ پیش‌بینی‌کننده مستقلی برای وقوع یک رویداد کلیوی در یک سال پیدا کند. ما حدس می زنیم که این تا حدی به این دلیل است که بیان MRP8 توبولو بینابینی و فیبروز توبولو بینابینی دو پیش بینی کننده قوی برای رویداد کلیوی در تجزیه و تحلیل تک متغیره بودند اما اهمیت آنها توسط یکدیگر در تجزیه و تحلیل چند متغیره لغو شد. این دو پارامتر یک همبستگی قوی نشان دادند (R=0.68، P،0.001) (شکل S8)، که نشان می‌دهد این دو پارامتر ممکن است معادل پیش‌بینی رویدادهای کلیوی باشند. در واقع، بیان MRP8 بینابینی الگوی کاملاً مشابهی با فیبروز بینابینی که با رنگ‌آمیزی تری کروم ماسون ارزیابی شده بود نشان داد. مقدار MRP8 بینابینی تا حد زیادی به سیگنال‌های مثبت در توبول‌های آتروفیک بستگی دارد تا سیگنال‌های موجود در ماکروفاژها، که ویژگی‌های آن‌ها با MRP8 گلومرولی در توزیع نقطه‌گذاری متفاوت است. علاوه بر این، حجم نمونه کوچک، دوره مشاهده کوتاه و تعداد کمی از افراد مبتلا به حوادث کلیوی ممکن است قدرت تشخیص را کاهش داده باشد. از آنجایی که بیان MRP8 در سلول‌های اپیتلیال لوله‌ای نقش مسببی را در پیشرفت التهاب توبولو بینابینی در مدل موش فیبروز کلیوی ایفا می‌کند، تجزیه و تحلیل بیشتری برای روشن شدن نقش MRP8 لوله‌ای بین‌ابینی در DN مورد نیاز است.

مطابق با مطالعه قبلی ما [6]، mRNA MRP8 عمدتاً در بخش گلومرولی افراد DN انسانی در مقایسه با افراد کنترل دارای MGA تنظیم مثبت شد. از سوی دیگر، بیان پروتئین MRP8 نه تنها در گلومرول بلکه در توبولو اینترستیتیوم نیز مشاهده شد. در این راستا، لازم به ذکر است که دو الگوی متمایز رنگ آمیزی MRP8 در توبولواینترستیتیوم DN وجود دارد. یکی رنگ آمیزی شدید و کانونی در توبول های آتروفیک شدید بود. دیگری رنگ آمیزی خفیف بود که در امتداد مرز برس لوله های پروگزیمال توزیع شده بود که در ORG و MCNS نیز یافت شد. سیگنال‌های اخیر احتمالاً پروتئین MRP8 مشتق شده از خون و جذب مجدد توسط لوله‌های پروگزیمال را نشان می‌دهند، که نباید با افزایش بیان mRNA MRP8 همراه باشد. در مورد پروتئین‌های غیر از MRP8، ما و دیگران اخیراً پدیده‌های مشابهی را در تشخیص پروتئین واکنش‌پذیر ایمنی در لوله‌های پروگزیمال گزارش کرده‌ایم که در اثر بازجذب ایجاد می‌شود، اما نه توسط سنتز کلیوی [25،26]. از طرف دیگر، از آنجایی که کمی رنگ آمیزی MRP8 در تست جذب آنتی بادی، به ویژه در ضایعات اگزوداتیو گلومرولی و ضایعات فیبروتیک شدید با اسکار در اطراف لوله های آتروفیک باقی مانده است، وجود سیگنال های غیر اختصاصی را نمی توان به طور کامل رد کرد (شکل S3).

سیگنال‌های گلومرولی MRP8 عمدتاً الگوهای نقطه‌گذاری را در افراد DN نشان می‌دهند (شکل 1، شکل S4). از آنجایی که هر دو CD68 و MRP8 توسط آنتی‌بادی‌های مونوکلونال موش شناسایی شدند، محلی‌سازی این مولکول‌ها توسط بخش‌های سریال، نه با رنگ‌آمیزی ایمنی مضاعف، ارزیابی شد. الگوهای رنگ‌آمیزی MRP8 با سایر اختلالات التهابی کلیوی از جمله IgAnephritis [27]، گلومرولونفریت غشایی [14] و گلومرولونفریت مرتبط با ANCA [20] سازگار بود، که در آن ماکروفاژها به عنوان منبع اصلی MRP8 پیشنهاد شده‌اند. یک مدل جونده [6]. علاوه بر این، نوتروفیل ها را می توان به عنوان منبع دیگری از MRP8 در نظر گرفت که بر عوارض عروقی تأثیر می گذارد [28]. در حال حاضر، ما در حال بررسی مکانیسم مولکولی هستیم که چرا MRP8 عمدتاً در سلول‌های میلوئیدی که به گلومرول‌ها نفوذ می‌کنند تنظیم مثبت می‌شود. مطالعه آزمایشگاهی نشان داد که MRP8 بیان سیتوکین های التهابی را القا می کند و همچنین بیان خود MRP8 را در ماکروفاژها به روشی وابسته به TLR{18}تقویت می کند. علاوه بر این، سلول‌های مثبت MRP در ضایعات اسکلروزان گرهی وجود نداشتند، که نشان می‌دهد که MRP8 گلومرولی ممکن است منعکس کننده آسیب مداوم گلومرولی باشد [20]. مهمتر از همه، یک مطالعه انسانی در بزرگترین مقیاس گزارش داد که بیان ژن MRP8 در سلول های تک هسته ای خون بیماران دیابتی نوع 1 در افراد مبتلا به عوارض دیابت از جمله نفروپاتی به طور قابل توجهی افزایش یافته است [29].

از آنجایی که مهار سیستم رنین آنژیوتانسین (RAS) یک عامل تعیین کننده مهم در پیامدهای کلیوی است، ما اثرات RASBlockade را بر روی آن بررسی کردیم.کلیهبیان MRP8 ما تفاوت معنی داری در بیان mRNA MRP8 کلیه بین بیماران DN تحت درمان با یا بدون مسدود کردن RAS (شکل S9) پیدا نکردیم، احتمالاً به این دلیل که موارد تحت درمان با بلوک RAS تمایل به فشار خون و پروتئینوری شدیدتری نسبت به موارد بدون بلوک RAS داشتند.

در انسان‌های چاق و موش‌ها، افزایش کمپلکس MRP8/14 پلاسما ممکن است منعکس‌کننده درجه‌ای از آن باشدچاقیو از آدیپوسیت ها و همچنین لکوسیت ها سرچشمه می گیرند [8،9]. موارد ORG ما دارای رنگ‌آمیزی خفیف MRP8 در لوله‌های پروگزیمال بودند که نشان‌دهنده افزایش سطح پلاسمایی MRP8 بود. در مقابل، هیچ ارتباط معنی‌داری بین بیان MRP8 لوله‌ای بینابینی و شاخص توده بدنی وجود نداشت (شکل S6G). بنابراین، بیان محلی MRP8 درکلیهممکن است بهتر به عنوان نشانگر آسیب کلیوی عمل کند تا برایچاقی[8,9].

سیستانچ برای بهبود اختلال عملکرد کلیه

مطالعه ما چندین محدودیت دارد. تعداد نمونه هر گروه مورد مطالعه کم بود. افراد غیر یکسان در آنالیزهای mRNA و ایمونوهیستوشیمی وارد شدند. از آنجایی که ما فقط بیمارانی را که تحت بیوپسی کلیه قرار گرفتند، تجزیه و تحلیل کردیم، ترکیب بیمارانی که در اینجا بررسی شدند ممکن است منعکس کننده بیماران دیابتی نوع 2 عمومی یا به طور کلی مزمن نباشد.کلیهسوژه های بیماری اگرچه سن به عنوان یک عامل مستقل مرتبط با سیگنال‌های MRP8 در داده‌های ما حفظ نشده است (جدول 3)، مشخص است که پیری با التهاب مزمن مرتبط است [30]. اثرات سن را نمی توان به طور کامل نادیده گرفت. اگرچه بیشتر سیگنال‌های MRP8 در تست جذب آنتی‌بادی از بین رفتند، اما برخی سیگنال‌های مثبت باقی مانده بود که ممکن است به دلیل اتصال غیر اختصاصی اولین آنتی‌بادی ایجاد شود. همانطور که در بالا توضیح داده شد، بررسی بیان MRP8 کلیه توسط بیوپسی کلیه به ما کمک می کند تا پاتوفیزیولوژی و پیش آگهی بیماری های مزمن کلیوی، به ویژه مرتبط باچاقیو دیابت، اما برای استفاده روتین و مکرر در کلینیک‌های سرپایی مضراتی دارد

به طور خلاصه، مطالعه حاضر نشان می دهد که بیان MRP8 درکلیهوضعیت پاتولوژیک فعلی را منعکس می کند و همچنین پیامدهای کلیوی را در بیماران مبتلا به آن پیش بینی می کندچاقییادیابت نوع 2. ممکن است تحقیقات بیشتر در مورد بررسی سطح MRP8 ادراری در بیماران چاق یا دیابتی در مقیاس بزرگ ضروری باشد.

اطلاعات پشتیبانی

شکل S1 عکس‌های نشان‌دهنده بخش‌های بیوپسی کلیه از یک بیمار DN که با (A) اسید پریودیک شیف، (B) اسید پریودیک متنامین نقره یا (C) ماسون تری کروم رنگ‌آمیزی شده است. نسبت تعداد گلومرول های مبتلا به اسکلروز جهانی (فلش) در بین گلومرول های کل و مساحت نسبی فیبروز توبولو بینابینی در این بیمار به ترتیب 33 و 65 درصد بود. (TIFF)

شکل S2 ایمونوهیستوشیمی برای پروتئین های MRP8 و CD68 در بیماران DN. عکس‌های ستون سمت راست آزمایش‌های کنترل منفی را بدون آنتی‌بادی اول نشان می‌دهند. (TIF)

شکل S3 تست جذب آنتی بادی برای رنگ‌آمیزی MRP8. PBS: سالین بافر فسفات، rhMRP8: انسان نوترکیبMRP8. (TIF)

شکل S4 عکس های نشان دهنده بیان MRP8 در گروه های MGA، MCNS، ORG و DN. (TIF)

شکل S5 همبستگی بین تعداد سلول‌های گلومرولی8-مثبت و پارامترهای بالینی. مقادیر log-transformed سیگنال های MRP8 استفاده شد. همبستگی ها با استفاده از هر 4 گروه (A-D، G) یا 3 گروه به استثنای گروه MCNS (E، F) تجزیه و تحلیل شد. دایره های باز: ناهنجاری کوچک گلومرولی (MGA)، دایره های بسته: سندرم نفروتیک با حداقل تغییر (MCNS)، مثلث های باز:چاقیگلومرولوپاتی مرتبط (ORG)، مثلث های بسته: نفروپاتی دیابتی (DN). (TIF)

شکل S6 ارتباط بین MRP{1}}توبولو بینابینی ناحیه مثبت و پارامترهای بالینی. مقادیر log-transformed سیگنال های MRP8 استفاده شد. این همبستگی ها با استفاده از هر 4 گروه (A-D، G) یا 3 گروه به استثنای گروه MCNS (E، F) مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت (TIF)

شکل S7 ارتباط بین بیان MRP8 گلومرولی و توبولو بینابینی. مقادیر log-transformed سیگنال های MRP8 استفاده شد. (TIF)

شکل S8 ارتباط بین MRP{1}}توبولو بینابینی ناحیه مثبت و فیبروز توبولو بینابینی. مقادیر log-transformed سیگنال های MRP8 استفاده شد.(TIF)

شکل S9 بیان mRNA کلیوی MRP8 در بیماران DN با یا بدون بلوک رنین-آنژیوتانسین. NS: معنی دار نیست. n=15 (بله)، 6 (خیر). از بین 22 مورد DN، اطلاعات مربوط به دارو در یک بیمار در دسترس نبود. (TIF)

جداول پشتیبان فایل S1.

جدول S1، تشخیص‌های پاتولوژیک همه مواردی که بین سال‌های 2000 تا 2011 در بخش پزشکی و علوم بالینی، بیمارستان دانشگاه کیوتو تحت بیوپسی کلیه قرار گرفتند. جدول S3، تجزیه و تحلیل رگرسیون لجستیک برای وقوع یک رویداد کلیوی در یک سال. (DOC) قدردانی ما از S. Tanaka برای مشاوره آماری، Y. Ogawa، N.Igarashi و C. Kimura برای کمک فنی و A. Yamamoto و SOgino برای کمک منشی تشکر می کنیم. مشارکت های نویسنده آزمایش ها را تصور و طراحی کرد: TK KM MK HY MI AN KNMM. آزمایش‌ها را انجام داد: TK HI AI KK TM YK MI AN. تجزیه و تحلیل داده ها: TK KM MK HY AS SY KU KN MM. معرف ها/مواد/ابزارهای آنالیز کمکی: TK KM. مقاله را نوشت: TK KMMM.

اثرات سیستانچ: درمان بیماری های کلیوی

منابع

1. Donath MY، Shoelson SE (2011) دیابت نوع 2 به عنوان یک بیماری التهابی. Nat Rev Immunol 11: 98-107.

2. Odink K، Cerletti N، Bruggen J، Clerc RG، Tarcsay L، و همکاران. (1987) دو پروتئین متصل شونده به کلسیم در ماکروفاژهای نفوذی آرتریت روماتوئید. طبیعت 330: 80-82.

3. Vogl T، Tenbrock K، Ludwig S، ​​Leukert N، Ehrhardt C، و همکاران. (2007) Mrp8 وMrp14 فعال کننده های درون زا گیرنده Toll-like 4 هستند که شوک کشنده و ناشی از اندوتوکسین را ترویج می کنند. Nat Med 13: 1042-1049.

4. Croce K، Gao H، Wang Y، Mooroka T، Sakuma M، و همکاران. (2009) پروتئین مرتبط با میلوئید-8/14 برای پاسخ بیولوژیکی به آسیب عروقی حیاتی است. Circulation 120: 427-436.

5. Loser K، Vogl T، Voskort M، Lueken A، Kupas V، و همکاران. (2010) لیگاندهای 4 گیرنده Toll مانند Mrp8 و Mrp14 در توسعه سلول های CD8 به علاوه T خودواکنشی بسیار مهم هستند. Nat Med 16: 713-717.

6. کووابارا تی، موری کی، موکویاما ام، کاساهارا ام، یوکوی اچ، و همکاران. (2012) تشدید نفروپاتی دیابتی توسط هیپرلیپیدمی توسط گیرنده Toll مانند 4 در موش انجام می شود. Diabetologia 55: 2256-2266.

7. Fujiu K، Manabe I، Nagai R (2011) سلول های اپیتلیال مجرای جمع آوری کلیه التهاب را در آسیب لوله بینابینی در موش تنظیم می کنند. J Clin Invest 121: 3425–3441.

8. Sekimoto R، Kishida K، Nakatsuji H، Nakagawa T، Funahashi T، و همکاران. (2012) سطوح بالای گردشی کمپلکس S100A8/A9 (کالپروتکتین) در ژاپنی‌های نر با چاقی شکمی و بیان نامنظم S100A8 و S100A9 در بافت‌های چربی موش‌های چاق. Biochem Biophys Res Commun 419: 782-789.

9. Mortensen OH، Nielsen AR، Erikstrup C، Plomgaard P، Fischer CP، و همکاران. (2009) کالپروتکتین - نشانگر جدیدی ازچاقی. PLoS One 4: e7419.

10. Matsuo S، Imai E، Horio M، Yasuda Y، Tomita K، و همکاران. (2009) معادلات تجدید نظر شده برای تخمین GFR از کراتینین سرم در ژاپن. من جیکلیهDis53: 982–992.

11. Gross JL، de Azevedo MJ، Silveiro SP، Canani LH، Caramori ML، و همکاران. (2005) نفروپاتی دیابتی: تشخیص، پیشگیری و درمان. مراقبت از دیابت 28:164-176.

12. Kambham N، Markowitz GS، Valeri AM، Lin J، D'Agati VD (2001)چاقیگلومرولوپاتی مرتبط: یک اپیدمی در حال ظهورکلیهInt 59: 1498-1509.

13. پراگا ام، مورالس ای (2006)چاقی، پروتئینوری و پیشرفت نارسایی کلیه. Curr Opin Nephrol Hypertens 15: 481-486.

14. Kawasaki Y، Hosoya M، Takahashi A، Isome M، Tanji M، و همکاران. (2005) بیان پروتئین 8 مرتبط با میلوئید در ماکروفاژها یک نشانگر پیش آگهی مفید برای اختلال عملکرد کلیه در کودکان مبتلا به MPGN نوع 1 است. Am Jکلیهدیس 45: 510–518.

15. Nishiyama A، Konishi Y، Ohashi N، Morikawa T، Urushihara M، و همکاران. (2011) آنژیوتانسینوژن ادراری منعکس کننده فعالیت سیستم رنین-آنژیوتانسین داخل کلیه در بیماران مبتلا به نفروپاتی IgA است. Nephrol Dial Transplant 26: 170-177.

16. Ogawa Y، Mukoyama M، Yokoi H، Kasahara M، Mori K، و همکاران. (2012) گیرنده پپتید ناتریورتیک گوانیلیل سیکلاز-A از پودوسیت ها در برابر آسیب گلومرولی ناشی از آلدوسترون محافظت می کند. J Am Soc Nephrol 23: 1198-1209.

17. Yokoi H، Mukoyama M، Mori K، Kasahara M، Suganami T، و همکاران. (2008) بیان بیش از حد فاکتور رشد بافت همبند در پودوسیت ها نفروپاتی دیابتی را در موش بدتر می کند.کلیهInt 73: 446-455.

18. Hoshino K، Takeuchi O، Kawai T، Sanjo H، Ogawa T، و همکاران. (1999) لبه برش: موش های دارای کمبود گیرنده 4 (TLR4) به لیپوپلی ساکارید کم پاسخ می دهند: شواهدی برای TLR4 به عنوان محصول ژن Lps. J Immunol162: 3749-3752.

19. Suganami T، Tanimoto-Koyama K، Nishida J، Itoh M، Yuan X، و همکاران. (2007) نقش مسیر گیرنده Toll مانند 4/NF-kappaB در تغییرات التهابی ناشی از اسیدهای چرب اشباع در تعامل بین سلول های چربی و ماکروفاژها. Thromb Vasc Biol 27: 84-91.

20. Pepper RJ، Hamour S، Chavele KM، Todd SK، Rasmussen N، و همکاران. (2013) بیان لکوسیت و سرم S100A8/S100A9 فعالیت بیماری را در واسکولیت و گلومرولونفریت مرتبط با ANCA منعکس می کند.کلیهInt 83: 1150–1158.

21. Ravid M, Brosh D, Ravid-Safran D, Levy Z, Rachmani R (1998) عوامل خطر اصلی نفروپاتی در دیابت نوع 2 سطوح کلسترول پلاسما، فشار خون متوسط ​​و هیپرگلیسمی هستند. Arch Intern Med 158: 998-1004.

22. Adler AI، Stratton IM، Neil HA، Yudkin JS، Matthews DR، و همکاران. (2000) ارتباط فشار خون سیستولیک با عوارض ماکرو عروقی و میکروواسکولار دیابت نوع 2 (UKPDS 36): یک مطالعه مشاهده ای آینده نگر. BMJ 321: 412-419.

23. Ruggenenti P، Remuzzi G (1998) نفروپاتی نوع{2}} دیابت شیرین. J Assoc Nephrol 9: 2157-2169.

24. Taft JL، Nolan CJ، Yeung SP، Hewitson TD، Martin FI (1994) ارتباط بالینی و بافت شناسی کاهش عملکرد کلیه در بیماران دیابتی مبتلا به پروتئینوری. دیابت 43: 1046-1051.

25. Matsusaka T, Niimura F, Shimizu A, Pastan I, Saito A, et al. (2012) لیورانژیوتانسینوژن منبع اصلی آنژیوتانسین II کلیه است. J Am Soc Nephrol23: 1181-1189.

26. کووابارا تی، موری ک، موکویاما ام، کاساهارا ام، یوکوی اچ، و همکاران. (2009) سطوح لیپوکالین مرتبط با نوتروفیل ژلاتیناز ادراری منعکس کننده آسیب به گلومرول ها، لوله های پروگزیمال و نفرون های دیستال است.کلیهInt 75: 285-294.

27. Kawasaki Y, Suyama K, Go H, Imamura T, Ushijima Y, et al. (2009) تجمع ماکروفاژها بیان کننده پروتئین 8 مربوط به میلوئید مرتبط با پیشرفت تغییرات اسکلروتیک در کودکان مبتلا به نفروپاتی IgA. Tohoku J Exp Med 218: 49-55.

28. Nagareddy PR، Murphy AJ، Stirzaker RA، Hu Y، Yu S، و همکاران. (2013) هایپرگلیسمی باعث افزایش میلوپوئز می شود و حل و فصل آترواسکلروز را مختل می کند. Cell Metab 17: 695-708.

29. جین وای، شارما ای، کری سی، هاپکینز دی، وانگ ایکس، و همکاران. (2013) بیان ژن های التهابی در خون محیطی بیماران مبتلا به دیابت نوع 1 تنظیم می شود. مراقبت از دیابت.

30. Longo VD, Finch CE (2003) طب تکاملی: از سیستم های مدل کوتوله تا صد ساله های سالم؟ علم 299: 1342–1346.

نقل قول: Kuwabara T، Mori K، Kasahara M، Yokoi H، Imamaki H، و همکاران. (2014) اهمیت پیش بینی کنندهکلیهبیان پروتئین 8 مرتبط با میلوئید در بیماران مبتلا بهچاقی- یا بیماری های کلیوی مرتبط با دیابت نوع 2. PLoS ONE 9 (2): e88942. doi:10.1371/journal.pone.0088942

ویراستار: Utpal Sen، دانشگاه لوئیزویل، ایالات متحده آمریکا

دریافت شده در 11 سپتامبر 2013; پذیرش در 14 ژانویه 2014; منتشر شده در 18 فوریه 2014

حق چاپ: 2014 کووابارا و همکاران. این یک مقاله با دسترسی آزاد است که تحت شرایط Creative Commons Attribution License توزیع شده است، که اجازه استفاده، توزیع و تکثیر نامحدود در هر رسانه را می دهد، مشروط بر اینکه نویسنده و منبع اصلی درج شده باشند.

بودجه: این کار تا حدی توسط کمک های مالی برای تحقیقات نفروپاتی دیابتی و نفرواسکلروز از وزارت بهداشت، کار و رفاه ژاپن (به KM)، کمک های مالی تحقیقاتی از وزارت آموزش، فرهنگ، ورزش، علوم ژاپن حمایت شده است. و فناوری (به TK، KM، و MM)، از بنیاد ژاپن برای آنزیم‌شناسی کاربردی (به TK) و از بنیاد تحقیقات سیگار کشیدن (به MM). سرمایه‌گذاران هیچ نقشی در طراحی مطالعه، جمع‌آوری و تجزیه و تحلیل داده‌ها، تصمیم‌گیری برای انتشار یا تهیه نسخه خطی نداشتند.

منافع رقابتی: نویسندگان اعلام کرده‌اند که هیچ علایق رقیب وجود ندارد.

* ایمیل: keyem@kuhp.kyoto-u.ac.jp