تأثیر هیپوترمی درمانی در برابر آسیب کلیوی در مدل ایست قلبی خفگی موش: تمرکز بر میزان بقا، پاتوفیزیولوژی و آنزیم های آنتی اکسیدانی

SO EUN KIM^1*، HA-YOUNG SHIN^2*، EUI-YONG LEE², YEO-JIN YOO²RYUN-HEE KIM²، ET AL

خلاصه.

اگرچه اختلال عملکرد چند عضوی با میزان بقای پس از ایست قلبی (حدود حدود) مرتبط است، اکثر مطالعات تا به امروز بر قلب و مغز متمرکز شده‌اند و مطالعات کمی نارسایی کلیوی را در نظر گرفته‌اند. بنابراین، هدف از مطالعه حاضر، بررسی اثرات هیپوترمی درمانی بر میزان بقا، پاتوفیزیولوژی و آنزیم‌های آنتی‌اکسیدانی در کلیه موش‌های صحرایی به دنبال آسفیکسی CA بود. موش ها یک روز پس از CA قربانی شدند. میزان بقا که با استفاده از تجزیه و تحلیل کاپلان مایر تخمین زده شد، یک روز بعد از حدود 42.9 درصد بود. با این حال، هیپوترمی، که به دنبال ca ایجاد شد به طور قابل توجهی میزان بقا را افزایش داد (71.4 درصد). در موش‌های نورموترمی با کلسیم، سطح سرمی نیتروژن اوره خون به طور قابل‌توجهی یک روز پس از حدودا افزایش یافت. علاوه بر این، سطح کراتینین سرم به طور قابل توجهی یک روز پس از CA افزایش یافت. با این حال، در موش های CA در معرض هیپوترمی، سطوح نیتروژن اوره و کراتینین به طور قابل توجهی به دنبال حدود کاهش یافت. رنگ‌آمیزی هیستوشیمیایی افزایش زمانی قابل‌توجهی را در آسیب کلیوی پس از قرار گرفتن در گروه نورموترمی نشان داد. با این حال، آسیب کلیوی در گروه هیپوترمی به طور قابل توجهی کاهش یافت. تجزیه و تحلیل ایمونوهیستوشیمی کلیه کاهش قابل توجهی در آنزیم های آنتی اکسیدانی (سوپراکسید دیسموتاز مس-روی، سوپراکسید دیسموتاز منگنز، گلوتاتیون پراکسیداز و کاتالاز) با گذشت زمان در گروه نورموترمی نشان داد. با این حال، در گروه هیپوترمی، این آنزیم ها به طور قابل توجهی به دنبال حدود افزایش یافت. در مجموع، نتایج نشان داد که اختلال عملکرد کلیه به دنبال خفگی به شدت با میزان بقای اولیه مرتبط است و هیپوترمی درمانی آسیب کلیوی را از طریق مکانیسم‌های آنتی اکسیدانی موثر کاهش می‌دهد.

کلید واژه ها: ایست قلبی خفگی، سندرم ایست پس از قلب، درمان هیپوترمی، کلیه، هیستوپاتولوژی، آنزیم های آنتی اکسیدانی

مخاطب:joanna.jia@wecistanche.com

گیاهان دارویی سیستانچ از دست رفته امپراتوریجلوگیری می کندبیماری کلیوی، برای دریافت نمونه اینجا کلیک کنید

مقدمه

ایست قلبی (ca)، همچنین به عنوان ایست قلبی ریوی یا ایست گردش خون شناخته می شود، شامل توقف ناگهانی گردش خون طبیعی به دلیل ناتوانی قلب در پمپاژ خون به اندازه کافی است (1). باعث ایجاد ایسکمی کل بدن می شود که باعث آسیب به اندام های متعدد از جمله مغز، قلب، کلیه ها و کبد می شود. اکثر مطالعات تحقیقاتی مربوط به حدود نیم قرن گذشته بر روی بهبود نرخ بازگشت موفقیت آمیز گردش خون خود به خودی (roSc)، با پیشرفت قابل توجه (2 تا 4) متمرکز شده اند. اگرچه احیای فوری ممکن است roSc را بهبود بخشد، میزان بقا با پیش آگهی ضعیف یک نگرانی است (5-7). سندرم پس از ایست قلبی (PcaS) به پیامدهای پاتوفیزیولوژیک roSc به دنبال احیای قلبی ریوی موفقیت آمیز (cPr) به دنبال ca (8) اشاره دارد. PcaS علت اصلی کاهش بقا به دنبال roSc است (9). میزان بقای PcaS در اوایل دوره در بیماران تنها 30 درصد است (5). شکی نیست که قلب و مغز اعضای مهمی در PcaS هستند. در همین حال، مطالعات به ندرت نارسایی کلیه را به دنبال حدودا بررسی کرده اند (1،10،11). اختلال گذرا در عملکرد کلیه در بیمارانی که تقریباً زنده مانده اند شایع است (12). بروز و تأثیر اختلال عملکرد کلیه به دنبال ca به خوبی توصیف نشده است (13). علاوه بر این، مطالعه قبلی ما نشان داد که نرخ پایین بقای اولیه پس از roSc در مطالعات تجربی (14) ممکن است به شدت با نارسایی کلیوی مانند آسیب حاد کلیه مرتبط باشد. یکی از شایع ترین علل آسیب حاد کلیه حدود (15) است. آسیب حاد کلیه یک PcaS شایع است که در حدود 30 درصد از بیماران بستری در بیمارستان ایجاد می شود (16).

گونه‌های اکسیژن فعال (roS) از یک سری واسطه‌های اکسیژن، از جمله آنیون سوپراکسید رادیکال آزاد (o2•‑)، پراکسید هیدروژن غیر رادیکال (H2o2)، رادیکال آزاد هیدروکسیل بسیار واکنش‌پذیر (OH•)، پراکسی نیتریت (onoo) تشکیل شده‌اند. ، و اکسیژن منفرد (1o2) (17). مشخص شده است که roS در چندین بیماری کلیوی تجربی، مانند نارسایی حاد ایسکمیک کلیوی، رد پیوند کلیه، گلومرولونفریت حاد و بیماری های سمی کلیوی نقش اساسی دارد (18). شواهد قابل توجهی وجود دارد که از سنتز roS بلافاصله پس از سکته مغزی ایسکمیک حاد (19) و انفارکتوس حاد میوکارد (20) حمایت می کند. roS به عنوان مهم در بیماری های ایسکمیک، مانند سکته مغزی و انفارکتوس میوکارد شناخته شده است. به عنوان مثال، Hackenhaar و همکاران (21) گزارش کردند که roS در خون بیماران مبتلا به PcaS تولید می شود. با این حال، مطالعات به ندرت تشکیل roS در کلیه را در طول دوره اولیه پس از PcaS بررسی کرده اند (22،23).

به همین دلیل، فرض شد که roS در آسیب کلیه به دنبال ca مهم است و به نرخ بقای پایین در مراحل اولیه PcaS کمک می کند. برای بررسی این فرضیه، کلسیم خفگی در موش‌ها القا شد و میزان بقا در مراحل اولیه PcaS مشاهده شد. علاوه بر این، هیپوترمی فوری و تاخیری برای افزایش نرخ بقای پایین مرتبط با PcaS به دنبال roSc انجام شد. علاوه بر این، اختلال عملکرد کلیه از نظر هیستوپاتولوژیک مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت و تغییرات ناشی از roS، مانند سوپراکسید دیسموتاز مس-روی (Sod-1)، سوپراکسید دیسموتاز منگنز (Sod-2)، کاتالاز (caT) و گلوتاتیون پراکسیداز (GPX) ارزیابی شد. از طریق آنالیز ایمونو هیستوشیمیایی به دنبال roSc.

سیستانچ فارما ویژه

مواد و روش ها

حیوانات و گروه های آزمایشی.در مجموع 62 موش صحرایی نر Sprague-Dawley (Sd) (وزن، 270-300 گرم؛ سن، 10 هفته) از مرکز حیوانات آزمایشگاهی دانشگاه ملی Jeonbuk (iksan، جمهوری کره) به دست آمد. آنها در دمای 2±23 درجه سانتی گراد و رطوبت 10±60 درصد تحت یک چرخه نور/تاریکی 12 ساعت قرار گرفتند. دسترسی رایگان به غذا و آب برای آنها فراهم شد. همه پروتکل‌های آزمایشی بر اساس رویه‌های اخلاقی و مراقبت علمی توسط کمیته مراقبت و استفاده از حیوانات سازمانی دانشگاه ملی Jeonbuk تأیید شدند (تصویب شماره JBnu 2020-084).

حیوانات آزمایشی در سه دسته [گروه عملیات شم، کلسیم تحت نورموترمی، و درمان کلسیم و هیپوترمی (HT)] به شرح زیر طبقه بندی شدند: i) گروه I، یک گروه شم (n=5) در شرایط نورموترمی نگهداری شد. بدون ca; ii) گروه ii، یک گروه نورموترمی بدون هیپوترمی (33 درجه سانتیگراد) تحت درمان CA (n=17). و iii) گروه iii (n=40)، گروهی که تحت نورموترمی قرار گرفتند و بعد از ca به مدت 2 ساعت (n=17)، 4 ساعت (n=13) تحت درمان با HT قرار گرفتند. و 6 ساعت (n=10) پس از roSc، که در آن همه موش‌ها دوباره تا نورموترمی گرم شدند.

القای CA و CPR.Ca و cPr همانطور که قبلا توضیح داده شد (24،25) با تغییرات جزئی (شکل 1) انجام شد. به طور خلاصه، موش‌ها با 2 تا 3 درصد ایزوفلوران بیهوش شدند و برای حفظ تنفس با استفاده از دستگاه تنفس مصنوعی جوندگان (دستگاه هاروارد) تهویه مکانیکی شدند. برای نظارت بر اشباع اکسیژن محیطی (Spo2)، یک پروب اشباع اکسیژن پالس اکسیمتری (Nonin Medical, inc.) به پای چپ متصل شد. دمای بدن در حین و پس از جراحی کلسیم در 5/{7}}±37 درجه سانتیگراد حفظ شد. برای نظارت بر تغییرات الکتروکاردیوگرام (ECG)، پروب‌های الکتروکاردیوگرافی (سیتیوا) روی اندام‌ها قرار داده شد تا داده‌های سه لید را ارائه دهد که به طور مداوم تحت نظارت قرار می‌گرفت. شریان فمورال چپ و ورید فمورال راست به طور جداگانه برای نظارت بر فشار متوسط ​​شریانی (MaP) (MLT 1050/d؛ ADINstruments، ltd.) و تزریق داخل وریدی کانوله شدند.

پس از یک دوره تثبیت 5 دقیقه ای، وکورونیم بروماید (2 میلی گرم بر کیلوگرم؛ Gensia Sicor Pharmaceuticals، inc.) به صورت داخل وریدی تجویز شد، بیهوشی متوقف شد و تهویه مکانیکی قطع شد. یک نقشه کمتر از 25 میلی‌متر جیوه و متعاقب آن فعالیت الکتریکی بدون پالس برای تعریف CA استفاده شد (25،26). CA در 3 تا 4 دقیقه پس از تزریق وکورونیم بروماید تایید شد. در 5 دقیقه پس از حدوداً، cPr با تزریق داخل وریدی اپی نفرین (005.005 mg/kg 0؛ Sigma-Aldrich) آغاز شد.

Merck KGaa) و بی کربنات سدیم (1 meq/kg؛ Sigma-Aldrich؛ Merck KGaa) و سپس تهویه مکانیکی با اکسیژن 100 درصد و فشرده سازی دستی قفسه سینه با سرعت 300 در دقیقه تا زمانی که MaP به 60 میلی‌متر جیوه برسد و فعالیت الکتروکاردیوگرافی مشاهده شد. . هنگامی که حیوان از نظر همودینامیک پایدار بود و به طور خود به خود تنفس می کرد (معمولاً در 1 ساعت پس از roSc)، کاتترها برداشته شدند و حیوان خارج شد.

مدیریت دما در بین گروه هادمای بدن گروه نورموترمی در حین و پس از عمل جراحی CA در 37±3. در گروه هیپوترمی، کلسیم در دمای طبیعی ایجاد شد. سپس دمای بدن با کیسه‌های یخ و فن‌ها بلافاصله پس از CPR به مدت ۲، ۴ و ۶ ساعت در دمای ۳۳±0.۵ درجه سانتی‌گراد حفظ شد و به‌سرعت با پد گرم‌کننده مجدداً گرم شدند تا به دمای مورد نظر رسید. 37±0.5˚C) به دست آمد. سپس موش ها به قفس خود بازگردانده شدند تا اینکه یک روز پس از CPR/roSc قربانی شدند. دمای بدن با استفاده از سنسور دمای مقعدی کنترل شد (27).

تجزیه و تحلیل بیوشیمیایی سرماز تزریق داخل صفاقی 30 میلی گرم بر کیلوگرم پنتوباربیتال سدیم (JW Pharm co., ltd.) برای بیهوشی تمام حیوانات استفاده شد. خون از وریدهای شکمی هر حیوان در هر گروه جمع آوری شد. سرم با سانتریفیوژ خون (2774 xg، 15 دقیقه، 4 درجه سانتی گراد) جمع آوری شد و تا زمان تجزیه و تحلیل در دمای 80- درجه سانتی گراد نگهداری شد. سطوح نیتروژن اوره خون (Bun) و کراتینین در سرم بر اساس روش های مشخص شده توسط فدراسیون بین المللی شیمی بالینی (28) با استفاده از یک آنالایزر شیمیایی خودکار Hitachi 2070 (Hitachi, ltd.) تعیین شد. تمام سنجش ها در سه تکرار با استفاده از سرم تازه انجام شد.

پردازش بافتموش‌ها با تزریق داخل صفاقی 200 میلی‌گرم بر کیلوگرم پنتوباربیتال سدیم (JW Pharm co., ltd.) عمیقاً بیهوش شدند و با 0}.1 مولار از طریق قلب پرفیوژن شدند. سالین بافر فسفات (PBS؛ pH 7.4) و به دنبال آن 4 درصد پارافورمالدئید در 0.1 مولار بافر فسفات (PB؛ pH 7.4). کلیه ها از هر حیوان جدا شده و با 4 درصد پارافورمالدئید در 0.1 مولار PB (pH 7.4) در دمای اتاق در طول 1 هفته تثبیت شد، سپس به صورت ساژیتال برش داده شد، در پارافین جاسازی شد و برش (6 میکرومتر) برش داده شد.

هماتوکسیلین و ائوزین (H&E)، دوره‌ای اسید-شیف (PAS) و رنگ‌آمیزی تری کروم ماسون.رنگ آمیزی H&e برای بررسی تغییرات پاتولوژیک در کلیه ها طبق روشی که قبلا شرح داده شده بود انجام شد (29). رنگ‌آمیزی PaS برای بررسی تغییرات گلومرول‌ها با توجه به روش‌های توصیف‌شده قبلی (30-32) انجام شد. روش رنگ آمیزی تری کروم ماسون برای تعریف آسیب لوله، با در نظر گرفتن اتساع لوله، آتروفی لوله، تشکیل گچ لوله، واکوئولیزاسیون، انحطاط، فیبروز بینابینی، و ضخیم شدن غشای پایه لوله طبق روش هایی که قبلا توضیح داده شد، استفاده شد (3). ، 34).

در مجموع 2 پاتولوژیست با تجربه تغییرات هیستوپاتولوژیک را به روشی دوسوکور ارزیابی کردند. با استفاده از میکروسکوپ نوری Leica dM 2500 (Leica Microsystems GmbH) تصاویری از 1{7}} برش رنگ‌آمیزی / موش با بزرگنمایی x400 گرفته شد. در مجموع 10 زمینه در هر بخش مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. آنالیز هیستوپاتولوژیک ضایعات کلیوی طبق روش هایی که قبلا توضیح داده شده بود انجام شد (35،36). به طور خلاصه، ضایعات به ترتیب به عنوان بدون ضایعات میکروسکوپی قابل توجه (nSMl)، ضایعات حداقل، خفیف، متوسط ​​یا مشخص، با استفاده از مقیاس زیر با آزمون کور طبقه‌بندی شدند: نرمال، 0 امتیاز.<25% damage,="" 1="" point;="" 26‑50%="" damage,="" 2="" points;="" 51‑75%="" damage,="" 3="" points;="" and="" 76‑100%="" damage,="" 4="">

ضایعات گلومرولی با از دست دادن عناصر سلولی، فروپاشی لومن مویرگی، مواد هیالین آمورف با یا بدون چسبندگی به کپسول بومن (30-32) تعریف شد و با مقیاس‌های عددی زیر نمره‌گذاری شد: بدون آسیب، { {7}} امتیاز؛ بسیار ملایم، 1 امتیاز; خفیف، 2 امتیاز; متوسط، 3 امتیاز; و شدید 4 امتیاز. آسیب لوله ای توسط سیستم امتیازدهی زیر به دست آمد: بدون آسیب لوله ای، 0 امتیاز. 1 تا 9 درصد لوله ها آسیب دیده، 1 امتیاز. 10 تا 25 درصد لوله ها آسیب دیده، 2 نقطه. 26 تا 50 درصد لوله ها آسیب دیده، 3 نقطه. 51 تا 75 درصد از لوله ها آسیب دیده، 4 نقطه. و حداقل 76 درصد از لوله ها آسیب دیده، 5 امتیاز (33،34).

مالون دی آلدئید (MDA).غلظت Mda در قشر کلیه طبق پروتکلی که قبلا شرح داده شده بود (23،37،38) ارزیابی شد. به طور خلاصه، همگن سازی و سانتریفیوژ بافت های کلیه در 8832 xg به مدت 10 دقیقه در دمای 4 درجه سانتی گراد انجام شد و مایع رویی جمع آوری و در دمای 80- درجه سانتی گراد برای تجزیه و تحلیل MDA ذخیره شد. محتوای MDA بر اساس دستورالعمل کیت سنجش TBarS (شماره گربه 10009055؛ شرکت شیمیایی کیمن) تعیین شد.

ایمونوهیستوشیمی (IHC) برای آنزیم های آنتی اکسیدانی. iHc با Sod-1، Sod-2، caT و GPX برای مطالعه تغییرات در واکنش‌پذیری آنتی‌اکسیدانی در کلیه انجام شد. iHc طبق روشی که قبلاً توضیح داده شد (22) انجام شد. به طور خلاصه، مقاطع (6 میکرومتر) با آنتی سدیم اولیه بز (1:500؛ شماره گربه. SaB2500976؛ Sigma-Aldrich؛ Merck KGaa)، ضد Sod2 بز (1:1) انکوبه شدند. ,000؛ شماره گربه SaB2501676؛ Sigma-Aldrich؛ Merck KGaa)، خرگوش anti-caT (1:1،000؛ گربه شماره. ab16731؛ Abcam) و خرگوش anti-GPX ( 1:1،{19}}؛ شماره گربه. ab22604؛ Abcam) یک شبه در دمای 4 درجه سانتیگراد، به دنبال آن ضد خرگوش کونژوگه بیوتینیله شده (1:250؛ شماره گربه. Ba‑1000-1.5؛ آزمایشگاههای بردار) , inc.) و آنتی بادی های ثانویه ضد بز کونژوگه بیوتینیله (1:250؛ شماره گربه Ba‑5000‑1.5; Vector Laboratories, Inc.) به مدت 2 ساعت در دمای 24 درجه سانتی گراد و با استفاده از Vectastain aBc (آزمایشگاه های ناقل) توسعه یافتند. ، شرکت). سپس، آنها با یک محلول 3،3'-diaminobenzidine (در بافر 0.1 M Tris-HCl) مشاهده شدند.

میکروسکوپ لایکا dM 2500 برای تصویربرداری از مقاطع با بزرگنمایی x400 استفاده شد. در مجموع 10 بخش / موش انتخاب و 10 منطقه گرفته شد. نرم افزار تجزیه و تحلیل آستانه تصویر نسخه 1.52a (موسسه ملی بهداشت) برای اندازه گیری درصد (درصد) چگالی نوری نسبی (میله) استفاده شد.

تحلیل آماری.تمام آزمایش ها در سه تکرار تکرار شد. Graph Pad Prism نسخه 5.{1}} (GraphPad Software, inc.) برای تجزیه و تحلیل داده ها استفاده شد که به صورت میانگین ± خطای استاندارد مقادیر میانگین (SeM) بیان شد. بقا با استفاده از آمار کاپلان مایر و آزمون لگ رتبه تجزیه و تحلیل شد. نقشه نقشه و اکسیژن محیطی با استفاده از اندازه گیری های تکراری یک طرفه و دو طرفه آنالیز واریانس برای ارزیابی اثر زمان مقایسه شد. برای تعیین اهمیت تفاوت‌ها، تجزیه و تحلیل‌های تعقیبی با استفاده از آزمون توکی برای همه مقایسه‌های چندگانه زوجی انجام شد. پ<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

نتایج

تغییرات فیزیولوژیکی، میزان بقا و متغیرهای بیوشیمیایی سرم. هیچ تفاوت آماری معنی داری بین گروه ها در خصوص ویژگی های پایه، از جمله وزن بدن، MaP، و Spo2 وجود نداشت (جدول i و شکل 2). القای کلسیم 3 تا 4 دقیقه پس از تزریق داخل وریدی وکورونیم بروماید (2 میلی گرم بر کیلوگرم) رخ داد. CA با ecG، Spo2، و MaP ایزوالکتریک تایید شد، و طبق پروتکل آزمایشی مطابق انتظار تغییر کرد (شکل 2a-c). همانطور که در شکل 2d نشان داده شده است، دمای بدن در بین همه گروه ها پس از roSc متفاوت بود، همانطور که در شکل 3 نشان داده شد، میزان بقای هر گروه در یک روز پس از حدودا ارزیابی شد. نرخ گروه دوم 42.9 درصد بود.

در گروه سوم، میزان پس از 2 h-HT 42.9 درصد، نرخ بعد از 4h-HT 57.1 درصد و نرخ بعد از 6h-HT 71.4 درصد بود. در این آزمایش، هیچ تفاوتی بین موش‌های گروه دوم و موش‌های با 2 h-HT در گروه iii وجود نداشت.

همانطور که در شکل 4B نشان داده شده است، سطح سرمی Bun در گروه I 13.8 میلی گرم در دسی لیتر یک روز بعد از حدود بود. در گروه دوم، سطح Bun به طور معنی داری به 35.3 میلی گرم در دسی لیتر افزایش یافت. در گروه iii، سطح Bun 3{{1{0}} بود. 7 میلی گرم در دسی لیتر بعد از 2 ساعت HT، 25.0 میلی گرم در دسی لیتر بعد از 4 ساعت و 22.7 میلی گرم در دسی لیتر dl بعد از 6 ساعت تا ساعت. علاوه بر این، همانطور که در شکل 4c نشان داده شده است، سطح کراتینین سرم در گروه I .23 mg/dl {{20}} بود. در گروه دوم، سطح کراتینین به طور معنی داری به 43.43 میلی گرم در دسی لیتر 0 افزایش یافت. در گروه سوم، سطوح کراتینین کمتر از میزان مشاهده شده در گروه دوم به شرح زیر بود: 0.39 میلی گرم در دسی لیتر بعد از 2 ساعت HT، 0.37 میلی گرم در دسی لیتر بعد از 4 ساعت HT، و 0.36 میلی گرم در دسی لیتر بعد از 6 ساعت HT.

یافته های هیستوپاتولوژیک در گروه I (شم)، ساختارهای بافت شناسی دست نخورده با رنگ آمیزی H&e، PaS و تری کروم ماسون آشکار شد (شکل 5A). فیبروز بینابینی در همه گروه‌ها تشخیص داده نشد، در همین حال، در گروه دوم، هیستوپاتولوژی کلیوی ناشی از کلسیم یک روز بعد از roSc با استفاده از رنگ‌آمیزی H&e، PaS و تری کروم ماسون مورد بررسی قرار گرفت. آسیب شدید کلیه ناشی از CA به طور قابل توجهی در لوله های پروگزیمال و گلومرول ها افزایش یافت. به ویژه، مرزهای برس سلول های اپیتلیال لوله کلیوی به طور جدی فرسایش یافته است (شکل 5a و B). علاوه بر این، در این گروه، مویرگ های گلومرولی با سلول های التهابی گشاد شده بودند و ادم بینابینی و نکروز حاد توبولار کلیه در مقایسه با موارد مشاهده شده در گروه I جدی بود (شکل 5a).

در گروه سوم، آسیب کلیه در یک روز پس از roSc کاهش یافت (شکل 5a و B). به طور خاص، آسیب ناشی از ca-ناشی در لوله های پروگزیمال به طور قابل توجهی پس از 6 ساعت HT در مقایسه با آنچه در گروه دوم مشاهده شد، کاهش یافت. علاوه بر این، انبساط موضعی لوله های پروگزیمال در مقایسه با آنچه در گروه دوم نشان داده شد (شکل 5A) کاهش یافت. برای گلومرول ها، 6 h-HT به طور قابل توجهی آسیب گلومرولی را در مقایسه با آنچه در گروه ii نشان داده شد، کاهش داد (شکل 5a و B).

سطح MDA همانطور که در شکل 4a نشان داده شده است، سطح Mda در قشر کلیه به طور قابل توجهی در یک روز پس از ca در گروه ii در مقایسه با گروه i افزایش یافته است. با این حال، در گروه III، سطح MDA به طور قابل توجهی به دنبال 4 ساعت و 6 ساعت HT کاهش یافت. همچنین در 2 ساعت-HT کاهش یافت، اما تفاوت آماری معنی‌داری در مقایسه با گروه دوم وجود نداشت.

یافته‌های واکنش‌پذیری آنزیم آنتی‌اکسیدانی

در گروه I، واکنش‌پذیری‌های طبیعی Sod-1، Sod-2، GPX و caT مورد ارزیابی قرار گرفت و نشان داد که آنها عمدتاً در لوله‌ها قرار دارند (شکل 6a). در گروه دوم، واکنش‌پذیری‌های Sod-1، Sod-2، GPX و CAT در یک روز پس از roSc در مقایسه با موارد نشان‌داده‌شده در گروه i به طور قابل‌توجهی کاهش یافت (شکل 6a و B).

در گروه iii، Sod-1، Sod-2، GPX، و واکنش های ایمنی caT به دنبال 2 ساعت HT تفاوت معنی داری با موارد مشاهده شده در گروه ii نداشت (شکل 6a و B). در مورد 4 h-HT، چهار رنگپذیری به طور قابل توجهی بالاتر از آنهایی بود که در گروه دوم نشان داده شد (شکل 6a و B)، که نشان می دهد، به ویژه، رنگپذیری GPX در مقایسه با سایر واکنش پذیری های ایمنی به طور قابل توجهی بالاتر بود. در مورد 6h-HT، همه واکنش‌پذیری‌های ایمنی بیشتر از موارد شناسایی شده در موش‌هایی بود که 4h-HT دریافت کردند، که نشان می‌دهد که میله هر واکنش‌پذیری Sod-1، Sod-2، GPX و caT 78.4، 67.4 بود. 86.5 و 79.5 درصد، به ترتیب، در مقایسه با گروه i (شکل 6a و B).

هربا اپیمدیوم ساژیتاتوم

بحث

در مطالعات حیوانی، قلب و مغز بیشترین آسیب را به دنبال آسیب ایسکمی/ریپرفیوژن مجدد (i/r) پس از حدود (39،40) دارند. با این وجود، مطالعات خاصی گزارش کرده اند که آسیب حاد کلیه بر بهبودی عصبی تأثیر دارد (41،42). بنابراین، بررسی آسیب حاد کلیه به دنبال ca و cPr مهم است. در مطالعه حاضر، موش‌های صحرایی نر بالغ با تزریق وکورونیم بروماید برای کلسیم خفگی استفاده شدند. CA 3 تا 4 دقیقه پس از القای خفگی تایید شد و cPr 5 دقیقه بعد از حدود انجام شد. MaP، ECG و Spo2 همانطور که انتظار می رفت در طول ca و بعد از roSc تغییر یافتند. در مطالعه حاضر، میزان بقا در گروه سوم 42.9 درصد یک روز پس از roSc در موش‌های در معرض 2 ساعت HT، 57.1 درصد در موش‌های تحت درمان با 4h-HT، و 71.4 درصد در موش‌هایی که تحت 6h-HT قرار گرفتند، بود. che و همکاران (26) گزارش کردند که میزان بقای 40 درصد دو روز پس از roSc در مدل موش آسفیکسی حدود بود. علاوه بر این، وانگ و همکاران (43) گزارش کردند که در موش‌ها، ترکیب هیپوترمی و لووسیمندان (یک حساس‌کننده کلسیم و بازکننده کانال پتاسیم) به دنبال roSc به طور قابل‌توجهی بقا را افزایش داد. بر اساس این یافته ها، HT در موش های با کلسیم ممکن است میزان بقا را چند روز پس از roSc افزایش دهد. با این حال، در انسان، HT بعد از حدوداً به سختی میزان بقا را به دنبال roSc افزایش می دهد (44).

اختلال عملکرد کلیه در 12 تا 28 درصد از بیماران مبتلا به کلسیم به دنبال احیای موفقیت آمیز گزارش شد (13). علاوه بر این، آسیب حاد کلیوی در 43 درصد از بیمارانی که پس از حدوداً احیا شده بودند، ایجاد شد و بیش از 75 درصد از این اپیزودها در طی سه روز پس از حدودا رخ داد (45). در مدل های حیوانی، آسیب حاد کلیه ناشی از i/R (یعنی ROSC به دنبال CA) به طور قابل توجهی توسط HT کاهش یافت (43،46،47). به عنوان مثال، Tissier و همکاران (47) کاهش قابل توجه ضایعات کلیه توسط HT را در یک مدل خرگوش از ca، بر اساس هیستوپاتولوژی و میکروسکوپ الکترونی، در مقایسه با گروه کنترل گزارش کردند. در مطالعه حاضر، نمرات ضایعات گلومرولی و لوله‌ای هیستوپاتولوژیک کلیه‌ها در گروه دوم ظاهراً یک روز پس از roSc افزایش یافت. در این گروه، سطوح سرمی Bun و کراتینین به دنبال ROSC در مقایسه با گروه شم (گروه i) به طور قابل توجهی افزایش یافت. این نتایج مشابه نتایج مطالعات قبلی مربوط به مدل‌های کلسیم سگ، خرگوش و خوکچه بود (47-49). بنابراین، آسیب کلیوی در مراحل اولیه به دنبال ca در حیوانات آزمایشی به شدت افزایش یافت. در مطالعه حاضر، ضایعات گلومرولی و لوله‌ای کلیه و نمرات هیستوپاتولوژیک در گروه iii پس از 4 ساعت و 6 ساعت HT یک روز پس از roSc در مقایسه با گروه دوم به طور قابل‌توجهی کاهش یافت. Ribeiro و همکاران (46) و سوزا و همکاران (50) گزارش کردند که HT در مدل های حیوانی آسیب کلیوی i/r موثر است. اسلام و همکاران (23) و جواد و همکاران (22) تعیین کردند که HT شدت آسیب کلیوی را کاهش داده و میزان بقا را در یک مدل ca asphyxial افزایش می دهد. یافته ها حاکی از آن است که HT اثر محافظتی قابل توجهی از کلیه دارد که با افزایش نرخ بقا همراه است.

آنزیم های آنتی اکسیدانی درون زا عمدتاً شامل Sods، CAT و GPX هستند. این آنزیم ها اولین خط دفاعی را در برابر o2•‑ و OH• فراهم می کنند. SOD-1 و SOD-2 با کاتالیز کردن تغییر شکل o2•‑ به o2 و H2o2، دفاعی در برابر استرس اکسیداتیو ایجاد می کنند (51). استرس اکسیداتیو یک عامل مهم در آسیب اندام و اختلال عملکرد همودینامیک در طول PcaS و تولید roS در طول آسیب i/r است. فعالیت آنزیم های آنتی اکسیدانی با آسیب i/r به دنبال ca (21) تغییر می کند. مطالعه ما نشان داد که سطوح Sod-1، Sod-2، GPX و caT به دنبال roSc در گروه دوم در مقایسه با گروه i کاهش یافت. سطوح این آنزیم های آنتی اکسیدانی به دنبال i/r کاهش می یابد که باعث آسیب سلولی و مرگ سلولی به دلیل مصرف آنتی اکسیدان های درون زا در نتیجه انتشار roS می شود (52).

Xia و همکاران (53) افزایش فعالیت آنتی اکسیدانی را در بافت های کلیه موش های در معرض HT در آسیب i/r کلیه گزارش کردند. Hackenhaar و همکاران (21) افزایش قابل توجهی در فعالیت Sod-1، Sod-2، GPX و caT بعد از 6، 12، 36 و 72 ساعت HT در انسان به دنبال roSc مشاهده کردند. در مطالعات قبلی با استفاده از یک مدل موش از ca asphyxial، اسلام و همکاران (23) گزارش کردند که HT به دنبال ca باعث کاهش استرس اکسیداتیو در کلیه می شود و جواد و همکاران (22) گزارش کردند که HT به دنبال ca از کلیه در برابر آسیب ناشی از ca محافظت می کند. نشان می دهد که nrf2/Ho-1 در کلیه افزایش یافته است. در مطالعه حاضر، واکنش‌پذیری‌های ایمنی Sod-1، Sod-2، GPX و caT پس از 4 ساعت و 6 ساعت در گروه iii در مقایسه با گروه ii به طور قابل توجهی افزایش یافت، که نشان می‌دهد HT آنزیم‌های آنتی اکسیدانی را فعال کرده و کاهش می‌دهد. استرس اکسیداتیو

بر اساس نتایج بقا، هیستوپاتولوژی، بیوشیمیایی و ایمونوهیستوشیمی این مطالعه، مشخص شد که اختلال عملکرد کلیه شایع است و با مرگ و میر در مراحل اولیه PcaS به دنبال roSc، در مدل موش‌های صحرایی ما از حدود خفگی همراه است. با این حال، 4 ساعت یا 6 ساعت پس از ROSC به طور قابل توجهی آسیب کلیوی را کاهش داد، که نشان می دهد HT باعث فعال شدن آنزیم های آنتی اکسیدانی مانند Sod-1، Sod-2، GPX و caT می شود که منجر به کاهش استرس اکسیداتیو در کلیه ها می شود. در نتیجه، فرض شد که HT آسیب کلیوی را با مکانیسم آنتی اکسیدانی کاهش می دهد و نرخ بقای اولیه را افزایش می دهد. با این حال، تجزیه و تحلیل وسترن بلات برای روشن کردن مکانیسم آسیب کلیوی و HT در حدود به دنبال roSc مورد نیاز است. این یک محدودیت بالقوه مطالعه حاضر است و نیاز به مطالعات بیشتر را نشان می دهد.

میریستین

1 بخش پزشکی اورژانس، یک موسسه تحقیقاتی پزشکی بالینی دانشگاه ملی Jeonbuk، Jeonju، Jeollabuk-do 54907;

2 کالج دامپزشکی و مؤسسه تحقیقاتی ایمنی زیستی، دانشگاه ملی Jeonbuk، سان، Jeollabuk-do 54596;

3 بخش علوم زیستی پزشکی و مؤسسه تحقیقاتی علوم زیستی و بیوتکنولوژی، دانشگاه هالیم، چنچئون، گانگوون-دو 24252;

بخش 4 جراحی، بیمارستان دانشگاه ملی کانگوون،

دانشکده پزشکی، دانشگاه ملی Kangwon، چنچئون، Gangwon-do 24289; 5 گروه نوروبیولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه ملی کانگوون، چنچئون، گانگووندو 24341، جمهوری کره

قدردانی

قابل اجرا نیست

منابع مالی

مطالعه حاضر توسط برنامه تحقیقات علوم پایه از طریق بنیاد تحقیقات ملی کره با بودجه وزارت آموزش و پرورش (با شماره های کمک مالی nr. nr.

در دسترس بودن داده ها و مواد

مجموعه داده‌های مورد استفاده و/یا تجزیه‌وتحلیل‌شده در طول مطالعه کنونی در صورت درخواست معقول از نویسنده مربوطه در دسترس است.

مشارکت نویسندگان

SeK، HYS، MHW و HJT مسئول طراحی آزمایشی، جمع‌آوری داده‌ها، تجزیه و تحلیل داده‌ها و نوشتن دست‌نوشته بودند. eYl، YJY، rHK، JHc و TKl آزمایش ها و تجزیه و تحلیل داده ها را انجام دادند. dca، BYP، JcY، SKH، و iSK تجزیه و تحلیل داده ها را انجام دادند و نظرات انتقادی را در مورد کل فرآیند مطالعه ارائه کردند. همه نویسندگان نسخه نهایی را خوانده و تایید کرده اند. HYS و HJT صحت تمام داده های خام را تایید می کنند.

تایید اخلاق و رضایت برای شرکت

همه پروتکل‌های آزمایشی بر اساس رویه‌های اخلاقی و مراقبت‌های علمی توسط کمیته مراقبت و استفاده از حیوانات سازمانی دانشگاه ملی Jeonbuk (شماره تأیید JBnu 2020-084؛ Jeonju، کره جنوبی) تأیید شدند.

رضایت بیمار برای انتشار

قابل اجرا نیست

منافع رقابتی

نویسندگان اعلام می کنند که هیچ منافع رقابتی ندارند.

منابع

1. Girotra S، chan PS، و Bradley SM: مراقبت های پس از احیا پس از ایست قلبی خارج از بیمارستان و داخل بیمارستان. Heart 101: 1943-1949، 2015.

2. ROH Yi، Jung WJ، Hwang So، Kim S، Kim HS، Kim JH، Kim TY، Kang HS، Lee JS، و Cha KC: فاصله کوتاه‌تر دفیبریلاسیون نتایج موفق دفیبریلاسیون و احیا را ارتقا می‌دهد. احیا 143: 100-105، 2019.

3. Xanthos T، iacovidou n، Pantazopoulos i، Vlachos I، Bassiakou e، Stroumpoulis K، Kouskouni e، Karabinis a و Papadimitriou l: آلبومین اصلاح شده با ایسکمی نتیجه احیای قلبی ریوی را پیش بینی می کند: یک مطالعه تجربی. احیا 81: 591-595، 2010.

4. Yeh ST، Cawley RJ، aune Se و Angelos MG: نیاز به اکسیژن در طول احیای قلبی ریوی (cPr) برای تأثیر بر بازگشت گردش خون خود به خودی. احیا 80: 951-955، 2009.

5. lópez-Herce J، del castillo J، Matamoros M، canadas S، rodriguez-calvo a، cecchetti c، rodríguez-núnez a و carrillo Á. iberoamerican ایست قلبی کودکان مطالعه شبکه riBePci: پس از بازگشت عوامل گردش خون خود به خودی مرتبط با مرگ و میر در ایست قلبی در بیمارستان کودکان: یک مطالعه مشاهده ای چند مرکزی چند ملیتی آینده نگر. مراقبت ویژه 18: 607، 2014.

6. Mongardon n، Dumas F، تبدیل به S، Grimaldi d، Hissem T، Pène F و cariou a: سندرم ایست پست قلبی: از احیای فوری تا نتیجه طولانی مدت. مراقبت های ویژه ann 1: 45، 2011.

7. Neymar RW، Nolan JP، Adrie c، Hibiki M، Berg RA، Böttiger BW، Callaway c، Clark rS، Geocadin RG، Jauch EC، و همکاران: سندرم ایست پس از قلب: اپیدمیولوژی، پاتوفیزیولوژی، درمان و پیش آگهی. بیانیه اجماع کمیته ارتباط بین المللی در مورد احیا (انجمن قلب آمریکا، شورای احیاء استرالیا و نیوزلند، شورای احیای اروپا، بنیاد قلب و سکته مغزی کانادا، بنیاد قلب اینترامریکن، شورای احیا آسیا، و شورای احیا آفریقای جنوبی ) کمیته مراقبت های اضطراری قلب و عروق انجمن قلب آمریکا؛ شورای جراحی قلب و عروق و بیهوشی؛ شورای مراقبت های قلبی ریوی، حین عمل و مراقبت های ویژه؛ شورای بالینی قلب و عروق؛ و شورای سکته مغزی تیراژ 118: 2452-2483، 2008.

8. Nolan JP، Neumann RW، Adrie c، Hibiki M، Berg RA، Böttiger BW، Callaway c، Clark rS، Geocadin rG، و همکاران: سندرم ایست پس از قلبی: اپیدمیولوژی، پاتوفیزیولوژی، درمان و پیش آگهی. بیانیه علمی کمیته ارتباط بین المللی در مورد احیا. کمیته مراقبت های اضطراری قلب و عروق انجمن قلب آمریکا؛ شورای جراحی قلب و عروق و بیهوشی؛ شورای مراقبت های قلبی ریوی، حین عمل و مراقبت های ویژه؛ شورای بالینی قلب و عروق؛ شورای سکته مغزی resuscitation 79: 350-79, 2008. DOI: 10.1016/j.resuscitation.2008.09.017

9. جنتزر Jc، تغییر Md و دزفولیان c: اختلال عملکرد میوکارد و شوک پس از ایست قلبی. BioMed res int 2015: 314796، 2015.

10. Madl c و Holzer M: عملکرد مغز پس از احیا از ایست قلبی. کوروپین کریت مراقبت 10: 213-217، 2004.

11. Roberts BW، Kilgannon JH، chansky Me، Mittal n، Wooden J، Parrillo Je و Trzeciak S: اختلال عملکرد ارگان های متعدد پس از بازگشت گردش خون خود به خود در سندرم ایست قلبی. مراقبت های ویژه Med 41: 1492-1501، 2013.

12. Zeiner a، Sunder-Plassmann G، Sterz F، Holzer M، بازنده H، laggier an و Müllner M: تأثیر هیپوترمی درمانی خفیف بر عملکرد کلیه پس از احیای قلبی ریوی در مردان. احیا 60: 253-261، 2004.

13. Yanta J، Guyette FX، Doshi a، Callaway CW و Rittenberg Jc. خدمات پس از ایست قلبی: اختلال عملکرد کلیه پس از احیای ایست قلبی خارج از بیمارستان شایع است. احیا 84: 1371-1374، 2013.

14. lee JH، Lee TK، Kim iH، Lee Jc، Won MH، Park JH، Ahn JH، Shin Mc، ohk TG، Moon JB، و همکاران: تغییرات در هیستوپاتولوژی و سطوح فاکتور نکروز تومور در قلب موش های صحرایی زیر ایست قلبی خفگی Clin Exp Emerg Med 4: 160-167، 2017.

15. Lucchino S، Kellum Ja، Bellomo r، Doig GS، Morimatsu H، Morgera S، Schetz M، Tan i، Bouman c، Macedo e، و همکاران. آغاز و پایان درمان حمایتی برای کلیه (بهترین کلیه): نارسایی حاد کلیه در بیماران بدحال: یک مطالعه چند ملیتی و چند مرکزی. JAMA 294: 813-818، 2005.

16. Mattana J و Singhal Pc: شیوع و عوامل تعیین کننده نارسایی حاد کلیه به دنبال احیای قلبی ریوی. arch intern Med 153: 235-239، 1993.

17. Sachse a و Wolf G: گونه های فعال اکسیژن و کلیه ناشی از آنژیوتانسین II. J am Soc Nephrol 18: 2439-2446، 2007.

18. Baud l and ardaillou r: گونه های فعال اکسیژن: تولید و نقش در کلیه. am J Physiol 251: F765-F776، 1986.

19. رودریگو آر، فرناندز-گاجاردو، گوتیرز آر، ماتامالا جی ام، کاراسکو r، میراندا-مرچاک a و فوئرهاک دبلیو: استرس اکسیداتیو و پاتوفیزیولوژی سکته مغزی ایسکمیک: فرصت‌های درمانی جدید. CNS Neurol Disord Drug Targets 12: 698-714، 2013.

20. شهزاد س، حسن ع، فیضی اف، متین س، فاطمه ن و معین س: افزایش آسیب DNA، استرس اکسیداتیو و اختلال در سیستم دفاعی پاسخ در بیماران مبتلا به انفارکتوس میوکارد. Clin Appl Thromb Hemost 24: 780-789، 2018.