اثرات پلی ساکارید سیستانچ دسرتیکولا بر سلول های ایمنی و فعالیت تلومراز در موش های مسن

Zhang Hongquan، Li Yuan، Song Yuanyuan (موسسه پزشکی، دانشگاه یانگژو، یانگژو 225001، جیانگ سو)

خلاصههدف: مطالعه اثر پلی ساکارید گیاه سیستانش دسرتیکولا (PCD) بر محتوای مالون دی آلدئید (MDA)، فعالیت تلومراز و عملکرد ایمنی در بافت موش های پیری تحت حاد. MethodsThe مدل پیری تحت حاد موش توسط D-گالاکتوز القا شد. محتوای MDA توسط رنگ سنجی اسید تیوباربیتوریک تشخیص داده شد. فعالیت تلومراز توسط PCR-ELISA شناسایی شد. واکنش تکثیر لنفوسیت با روش MTT اندازه گیری شد. عملکرد فاگوسیتیک ماکروفاژهای صفاقی موش با تست قرمز خنثی اندازه گیری شد. محتوای IL{2}} در سرم با استفاده از روش ایمونوسوربنت متصل به آنزیم (ELISA) تعیین شد. نتایج: محتوای MDA در قلب، کبد و مغز گروه مدل به طور معنی‌داری افزایش یافت، در حالی که فعالیت تلومراز، واکنش تکثیر لنفوسیت، فاگوسیتوز ماکروفاژ صفاقی و محتوای IL{4}} در خون محیطی به‌طور معنی‌داری کاهش یافت. پس از تجویز PCD، محتوای MDA در قلب، کبد و مغز موش به طور قابل توجهی کاهش یافت و فعالیت تلومراز در قلب و بافت مغز، واکنش تکثیر لنفوسیت، فاگوسیتوز ماکروفاژ صفاقی و محتوای IL{5}} در خون محیطی به طور قابل توجهی افزایش یافت. نتیجه‌گیری PCD می‌تواند با آسیب رادیکال‌های آزاد مخالفت کند، فعالیت تلومراز را در بافت قلب و مغز و عملکرد ایمنی موش‌های پیر را افزایش دهد و پیری ناشی از D-گالاکتوز را بهبود بخشد.

کلید واژه ها: Cistanche deserticolaپلی ساکارید؛ مالون دی آلدئید؛ تلومراز؛ایمن سازی; سالخورده باشد

مکمل سیستانچ در نزدیکی من- بهبود ایمنی

برای مشاهده محصولات Cistanche Enhance Immunity اینجا را کلیک کنید

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

شماره طبقه بندی کتابخانه چینی.: کد سند R284: شماره مقاله: 1001-2494 (2011) 14-1081-05

Cistanche deserticola ساقه گوشتی خشک شده با برگ های فسفری گیاه Cistanche deserticola است که وظیفه تقویت کبد و کلیه و سودمندی اسانس و چی را دارد [1]. پلی ساکارید Cistanche deserticola یک پلی ساکارید خام جدا شده از Cistanche deserticola است که از ناخالصی های مولکولی کوچک محلول در آب حذف می شود، با روش Sevag پروتئین زدایی می شود و به طور مکرر با آب و الکل برای بدست آوردن PCD درمان می شود [2]. این آزمایش با تئوری ایمنی و تئوری تلومر پیری شروع می‌شود و مدل موش پیری D-گالاکتوز را برای مشاهده تأثیر PCD بر محتوای مالون دی‌آلدئید (MDA) و فعالیت تلومراز در قلب، کبد و مغز به کار می‌گیرد و به بررسی اولیه می‌پردازد. مکانیسم آن

1.مواد و روش ها

1.1 حیوانات، داروها، معرف ها و ابزار

3-موش ICR ماهه، درجه تمیز، 26-32 گرم، نیمی نر و نیمی ماده [مرکز حیوانات آزمایشی دانشگاه یانگژو، شماره گواهی کیفیت حیوانات آزمایشی: SCXK (Su) 2002-0009] . دمای اتاق 20 تا 25 درجه، نور طبیعی و محیط برای تغذیه یک هفته قبل از آزمایش مناسب است. PCD توسط موسسه تحقیقات حیات وحش نانجینگ ارائه شده و در آب مقطر حل شده است. D-گالاکتوز (D-Gal، کارخانه معرف دوم شانگهای)؛ کیت تست فعالیت تلومراز (MB Company، ایالات متحده); کیت تشخیص MDA و کیت الایزا IL{8}} ماوس (موسسه تحقیقات مهندسی بیولوژیکی نانجینگ جیانچنگ). نشانگر آنزیم ELX800UV (BIO-TEK، ایالات متحده); هموژنایزر بافت PT-MR3100D (Polytron، سوئیس)؛ سانتریفیوژ انجماد رومیزی MODEL550 (اپندورف، آلمان); ترازوی الکترونیکی BP110S (Sartorius، آلمان).

Cistanche deserticola- بهبود ایمنی

1.2 گروه بندی حیوانات، تهیه مدل و مدیریت

مدل موش پیر طبق روش موجود در ادبیات [3] تهیه شد. 10 درصد D-Gal با آب برای تزریق تهیه شد و 10 میلی لیتر · کیلوگرم{4}} به مدت 6 هفته یک بار در روز به صورت زیر جلدی به گردن و پشت موش تزریق شد. موش ها به طور تصادفی به پنج گروه تقسیم شدند: گروه کنترل نرمال، گروه کنترل مدل، گروه های PCD25، 50 و 100 میلی گرم · کیلوگرم{9}} (گروه های PL، PM، PH)، با 12 موش در هر گروه. موش‌های گروه مدل و گروه تجویز PCD طبق قانون تعیین شدند و PCD25، 50 و 100 میلی‌گرم · کیلوگرم{14}} با حجم 20 میلی‌لیتر · کیلوگرم{16}} با گاواژ داده شدند. هر روز. به موش های گروه کنترل نرمال با همان حجم آب برای تزریق تزریق شد و با گاواژ به همان حجم نرمال سالین داده شد.

1.3 تعیین محتوای MDA و فعالیت تلومراز

24 ساعت پس از آخرین تجویز، کره چشم برداشته شد و خون گرفته شد، موش ها کشته شدند، قلب، کبد و مغز به سرعت خارج شدند و هموژن بافت تازه در دمای پایین انجام شد، سانتریفیوژ شد و مایع رویی گرفته شد. محتوای MDA با رنگ سنجی تیوباربیتوریک اسید تعیین شد. فعالیت تلومراز توسط PCR-ELISA شناسایی شد. مراحل عملیات طبق دستورالعمل روی کیت انجام شد. مقدار A در 450 نانومتر نشانگر آنزیم اندازه گیری شد.

1.4 تعیین واکنش تکثیر لنفوسیت [4]

طحال موش را به صورت آسپتیک در میز کار فوق تمیز خارج کنید، سوسپانسیون سلولی طحال موش را آماده کنید و تراکم سلولی را روی 1 × 109 تنظیم کنید. 48 ساعت و واکنش تکثیر سلولی با روش MTT اندازه گیری شد. مقدار A در طول موج 570 نانومتر اندازه گیری شده توسط پیوند آنزیمی اندازه گیری شد و نتیجه به عنوان مقدار میانگین سه سوراخ پیچیده A بیان شد.

1.5 تعیین عملکرد فاگوسیتیک ماکروفاژهای صفاقی با روش قرمز خنثی

مزایای مردانه Cistanche-Imمصونیت را اثبات کند

24 ساعت پس از آخرین تجویز، سر موش ها جدا شده و کشته شدند. مایع صفاقی موش‌ها به‌صورت آسپتیک جمع‌آوری شد و در 1000r · دقیقه{2}} سانتریفیوژ شد، سلول‌ها سه بار با محلول Hanks شسته شدند و سوسپانسیون سلولی با محلول کشت 1640 تهیه شد. 3 میلی لیتر را بردارید و در ظرف کشت بگذارید و در دمای 37 درجه و 5 درصد CO2 به مدت 2 ساعت کشت دهید. ماکروفاژها به سطح ظرف می‌چسبند، با محلول 4 درجه هنکس می‌فشانند و می‌مکند، سلول‌های چسبنده را جمع‌آوری می‌کنند، روی صفحه شمارش سلول‌های خونی حساب می‌کنند و تراکم سلولی را روی 2 × 109 سلول تنظیم می‌کنند · L-1، کشت در در انکوباتور 37 درجه به مدت 2 ساعت، سلول های رویی و غیر چسبنده دور ریخته شدند. ماکروفاژهای چسبنده را بردارید، 0.1 درصد نمک فیزیولوژیک قرمز خنثی اضافه کنید، به کشت در دمای 37 درجه به مدت 30 دقیقه ادامه دهید، قرمز خنثی را دور بریزید، ماکروفاژها را به طور مکرر با PBS در دمای 37 درجه بشویید، با 50 درصد اسید استیک و 50 درصد اتانول حجمی رقیق کنید و اندازه گیری کنید. ارزش A.

1.6 تعیین سطح سرمی IL-2

خون را از کره چشم بگیرید، سانتریفیوژ کنید (3000r · min-1، 10min) تا سرم جدا شود و محتوای IL{3}} در سرم را با روش ایمونوسوربنت متصل به آنزیم (ELISA) تعیین کنید. عملیات خاص طبق دستورالعمل کیت است. سطح IL{5}} در سرم موش‌های هر گروه در 450 نانومتر نشانگر آنزیمی تشخیص داده می‌شود.

1.7 تجزیه و تحلیل آماری

داده‌ها با نرم‌افزار SPSS 11 پردازش شدند و داده‌های اندازه‌گیری با میانگین ± انحراف معیار (x ± ثانیه)، با استفاده از آنالیز واریانس یک‌طرفه و t-test بین گروهی بیان شد.

جینسینگ صحرا -من هستممصونیت را اثبات کند

2.نتایج

2.1 تأثیر PCD بر محتوای MDA در قلب، مغز و کبد موش های مسن

به طور معنی داری بیشتر از گروه کنترل عادی بود (P<0.01). After intragastric administration of PCD25, 50 and 100 mg · kg-1, the content of MDA in the heart, brain, and liver of mice decreased in a dose-dependent manner compared with the model group (P<0.01, P<0.05), and the content of MDA in the high-dose group was close to the normal level (Table 1).

2.2 اثر PCD بر فعالیت تلومراز در بافت قلب، مغز و کبد موش های پیر

Compared with the normal control group, the telomerase activity of the heart, liver, and brain tissue in the model group was significantly reduced. After intragastric administration of PCD, the activity of telomerase in heart and brain tissue was increased in a dose-dependent manner, and the level of the high dose group was close to that of the normal control group. There was no significant effect on telomerase activity in the liver tissue of aging mice (P>0.05) (جدول 2). 2.3 اثرات PCD بر واکنش تکثیر لنفوسیت، فاگوسیتوز ماکروفاژهای صفاقی و محتوای IL{5}} سرم در موش های مسن به طور قابل توجهی کمتر از گروه کنترل طبیعی بود (P<0.01). After intragastric administration of PCD, the lymphocyte proliferation reaction, peritoneal macrophage phagocytosis and serum IL-2 content of aging mice increased in dose dependence, which was significantly different from the model group (P<0.01, P<0.05) (Table 3).

3.بحث

مکانیسم دقیق پیری هنوز نامشخص است. طی سال‌ها، محققان داخلی و خارجی ده‌ها نظریه پیری مانند نظریه رادیکال‌های آزاد را مطرح کرده‌اند. اکسیژن مولکولی برای بقای موجودات ضروری است و مواد مغذی موجود در موجودات از طریق اکسیداسیون انرژی آزاد می کنند. حالت اکسیداتیو سلول ها نقش مهمی در پیری، بروز تومور و رشد دارد. با این حال، رادیکال‌های آزاد در برخی فرآیندهای اکسیداسیون تشکیل می‌شوند و پیری ارتباط نزدیکی با واکنش‌های غیر طبیعی رادیکال آزاد دارد. هنگامی که رادیکال های آزاد بیش از حد در بدن انباشته شوند، باعث پراکسیداسیون اسیدهای چرب غیراشباع در بدن به ویژه در غشای بیولوژیکی می شود و در نتیجه باعث تغییر در ساختار غشای سلولی، آسیب به عملکرد غشاء و تولید MDA می شود. و لیپوفوسین (LPF) [5].

MDA یک عامل پیوند متقابل بسیار فعال است. این می تواند به طور کووالانسی با پروتئین ها، آنزیم ها و اسیدهای آمینه آزاد روی اسیدهای نوکلئیک پیوند متقابل ایجاد کند و بازهای شیف را تشکیل دهد. به دلیل پیوندهای غیرطبیعی آن، پس از بلعیده شدن توسط لیزوزوم ها نمی تواند توسط هیدرولاز هضم شود و می تواند در سلول ها جمع شود و لیپوفوسسین را تشکیل دهد که می تواند سلول ها را مسموم کند، انتقال مواد و پیام ها را در سلول ها مسدود کند و منجر به شتاب هسته ای شود. پیری و مرگ سلولی

بنابراین، MDA می تواند به عنوان یک شاخص قابل اعتماد برای پیری اندام ها و سلول ها استفاده شود. تئوری تلومر معتقد است که طول کروموزوم (تلومر) در بالای کروموزوم ارتباط نزدیکی با پیری و طول عمر دارد. طول تلومر حدود 2 تا 15 کیلوبایت است. به دلیل مشکل تکثیر انتهایی، DNA تلومر در هر بار کپی شدن DNA 50 تا 200 جفت باز از دست می دهد. با افزایش تعداد تقسیمات سلولی، DNA تلومر به تدریج کوتاه می شود. زمانی که تا حد معینی کوتاه شود، پایداری رنگ‌آمیزی را حفظ نمی‌کند و سلول توانایی تقسیم و تکثیر را از دست می‌دهد و در اثر پیری می‌میرد، این کوتاه شدن نشانه‌ی پیری است [6]. سلول وارد مرحله شکست پرولیفراتیو می شود و سلول به حیات خود ادامه می دهد اما نمی تواند تقسیم و تکثیر شود [7]. بنابراین تلومرها به عنوان «ساعت بیولوژیکی» سلول ها نیز شناخته می شوند و پیری سلولی تعیین کننده پیری کل بدن است. تحقیقات Bryma نشان داد که طول تلومر با فعالیت تلومراز مرتبط است. هرچه فعالیت تلومراز بیشتر باشد، تلومر طولانی‌تر باشد، پایداری و یکپارچگی کروموزوم‌ها بهتر است، زمان تقسیم سلولی بیشتر و طول عمر بیشتر می‌شود.

مکمل سیستانچ در نزدیکی من - ایمنی را بهبود بخشد

سیستم ایمنی به عنوان یک سیستم کامل و مستقل، نقش مهمی در حفظ و تنظیم فعالیت های زندگی ایفا می کند و کاهش عملکرد سیستم ایمنی بارزترین ویژگی پیری است. اختلال عملکرد سیستم ایمنی می تواند پیری بدن را تسریع کند[8]. نتایج این آزمایش نشان داد کهPCD می تواند به طور قابل توجهی محتوای MDA را در بافت های قلب، مغز و کبد کاهش دهد، فعالیت تلومراز را در بافت های قلب و مغز موش های مدل پیر و همچنین واکنش تکثیر لنفوسیت، فاگوسیتوز ماکروفاژ صفاقی و محتوای IL را افزایش دهد{0 }} در خون محیطی موش های پیر. می‌توان نتیجه گرفت که PCD نقش خوبی در مقابله با آسیب رادیکال‌های آزاد دارد، می‌تواند باعث تکثیر لنفوسیت‌ها، بهبود ایمنی سلولی غیراختصاصی و عملکرد تنظیم ایمنی بدن شود و در به تاخیر انداختن پیری بدن نقش داشته باشد.

منابع

[1] MAZG.Different of Processed Cistanche sinensis G.Beck and Herba Cistanche by HPLCF ingerprints[ J] .ChinPharmJ, 2011, 46(12):899-902.

[2] SHIHF، LINAP، ZHANGHQ،etal. اثر پلی ساکگریدهای Cistanche deserticola YCMa بر سندرومراتهای کمبود طحال[J] .Chin Wild Plant Res, 2000, 19(6):49-51.

[3] XUSY، BIANRL، CHENX. Methodoldgy of Pharmacological Experiments)[ M] .Vol3.Beijing:People's Medical Publishing House، 2002:1465-1466.

[4] LIUYQ, SUW, WUJJ, etal.Effect of cynomorium coccineum on function immunity and radical free metabolism of aging mouse [J] .JCell MolI mmunol=, 2009, 25(1):1155-1157 .

[5] YANGHJ، WANGZL، XUESH. پیشرفت در مطالعات مکانیسم پیری [J] .Chin J Control Endem Dis=، 2008، 23(1):35-37.

[6] YANGJ، ZHANXH، SUNY، etal.Effect of sijunzidecoction بر محتوای مالون دی آلدئید و فعالیت تلومراز در قلب، کبد و بافت های مغز، موش مدل پیری ناشی ازD-گالاکتوز[J].ChinJ Integr Tradit Chin West Med{2}}، 2005، (6):531-533.

[7] ZHANGXH، ZHANGJN. تلومر، تلومراز، پیری و سرطان[ J] .IntJGenetics=، 2007، 30(1):69-71.

[8] SONGSX، LVZJ.پیشرفت تحقیق در مورد پیری سلول های T،B و مکانیسم مولکولی آن[J] .JCell MolI mmunol، 2002، 18(3):306-308.