آزمایش 4 اثر Cistanche Deserticola فنیل اتانول گلیکوزید بر روی سندرم پیش از یائسگی موش افسردگی مدل مواد و روش ها 1 مواد آزمایشی

1.1 حیوانات آزمایشی

موش با درجه SPF، نژاد کونمینگ، ماده، 18 ~ 22 گرم، ارائه شده توسط شرکت دارویی شاندونگ لوکانگ، با مسئولیت محدود، این دسته از موش ها شماره گواهی: 0016003; شماره گواهی آزمایشگاه SYXK (Yu) 2010-001. 1.2 داروهای آزمایشی

گلیکوزید فنیل اتانول سیستانچطبق روش آزمایش 1 تهیه شد و محتوای آن به 66.47 درصد رسید. کپسول Gengnian'an، مواد تشکیل دهنده: Rehmannia glutinosa، Rehmannia glutinosa، Alisma، Ophiopogon japonicus، Scrophulariaceae، پوست گل صد تومانی، Poria cocos، مروارید مادری، curculigo، Schisandra chinensis، مگنتیت، Polygonum multifloratum، Multifloratum. . توابع و نشانه ها:یین را تغذیه کنید و یانگ را مطیع کنید, رفع مشکلاتوذهن را آرام کند. برای گرگرفتگی و تعریق یائسگی، سرگیجه، وزوز گوش، تحریک پذیری و بی خوابی استفاده می شود. مشخصات: 0.3 گرم در هر کپسول. نحوه مصرف و مقدار مصرف: خوراکی، هر بار 3 کپسول، 3 بار در روز. سازنده: Shanxi Tianxing Pharmaceutical Co., Ltd. تعداد دسته تولید: 121104. شماره تایید: شماره تایید داروی ملی Z14021848.

چه مدت طول می کشد تا سیستانچ کار کند؟

ایزوفلاون های سویا و کپسول های نرم ویتامین E، فهرست مواد تشکیل دهنده: پودر ایزوفلاون های سویا، ویتامین E، روغن آفتابگردان، ژلاتین، گلیسیرین، آب، تارتازین، دی اکسید تیتانیوم. ترکیبات و محتوای نمادین: هر 100 گرم حاوی 55.2 میلی گرم ایزوفلاون سویا (محاسبه به عنوان جنیستئین) و 608.5 میلی گرم ویتامین E است. عملکردهای سلامتی: افزایش تراکم استخوان. دستورالعمل و مقدار مصرف: 1 کپسول 2 بار در روز با آب گرم مصرف شود. مشخصات: کپسول 500mg×100. سازنده: Weihai Ziguang Biotechnology Development Co., Ltd. شماره دسته تولید: 13070302. شماره تایید: Guoshijianzi G20080032. 1.3 معرف های آزمایشی

سدیم کربوکسی متیل سلولز، Tianjin Hengxing Chemical Reagent Manufacturing Co., Ltd., Batch number: 2{4}}120418; پنی سیلین سدیم تزریقی، شرکت دارویی شمال چین، با مسئولیت محدود، مشخصات: 4 میلیون واحد، شماره دسته تولید: c1206807; محلول فرمالدئید (گرید تحلیلی)، شرکت شیمیایی Yantai City Shuangshuang، آموزشی ویبولیتین، شماره دسته تولید: 20130902; تزریق کلرید سدیم 0.9٪، Chenxin Pharmaceutical Co., Ltd.; مشخصات: 250ml، شماره دسته تولید: 1301265303;

هیدرات کلرال، موسسه تحقیقات شیمی خوب Tianjin Guangfu، شماره دسته 20120827; کیت تشخیص ELISA موس E2، شرکت تحقیق و توسعه، شماره دسته: 20140101A; کیت تشخیص موس T ELISA، شرکت تحقیق و توسعه، شماره دسته: 20140101A; کیت تشخیص موس LH ELISA، شرکت تحقیق و توسعه، شماره دسته: 20140101A; کیت تشخیص موس FSH ELISA، شرکت تحقیق و توسعه، شماره دسته: 20140101A;

کیت تشخیص ماوس DA ELISA، شرکت تحقیق و توسعه، شماره دسته: 20140101A; ماوس 5-کیت تشخیص HT ELISA، شرکت تحقیق و توسعه، شماره دسته: 20140101A. 1.4 ابزارهای آزمایشی

ترازوی الکترونیکی، شرکت ابزار پزشکی شانگهای Minqiao، مدل: JY601; ترازوی تحلیلی الکترونیکی، شرکت اوهاوس (شانگهای)، مدل: AR1140/C; سانتریفیوژ رومیزی پرسرعت، کارخانه ابزار علمی مورچه شانگهای، مدل: TGL-168 ; حمام آب ترموستاتیک الکتریکی، Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.، مدل: HWS12; تست کننده فعالیت مستقل ماوس، شرکت فناوری Chengdu Taimeng، مدل: ZZ-6; متر اجتناب از تاریکی ماوس، شرکت فناوری Chengdu Taimeng، Ltd.، مدل: BA-200; تستر تعلیق دم، Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd.، مدل: TS-200; سانتریفیوژ یخچال دار با سرعت بالا، شعبه Zhonggjia HKUST Innovation Co., Ltd.، مدل: KDC-160HR; ابزار قابل تنظیم پیپتینگ، Shanghai Leibo Analytical Instrument Co., Ltd.;

میکروپلیت ریدر شرکت BIO-RAD آمریکا مدل: 680;

میکروسکوپ الکتریکی شرکت OLYMPUS ژاپن مدل: BX61.

2 روش های تجربی

2.1 مدل سازی و تجویز دارو

90 موش ماده کونمینگ با وزن بدن 23-25 گرم انتخاب شدند و 10 به‌طور تصادفی به عنوان گروه خالی انتخاب شدند و تحت عمل جراحی ساختگی قرار گرفتند و از موش‌های باقی مانده برای ایجاد استفاده شد. مدل های قبل از یائسگی موش‌ها پس از توزین با تزریق داخل صفاقی 10 درصد کلرال هیدرات (0.03 میلی‌لیتر/10 گرم) بیهوش شدند و وضعیت شکم ثابت شد. سپس موها را از پشت موش در زیر آخرین دنده، در محل تلاقی خط میانی آگزیلاری و حدود 1 سانتی متر از قسمت بیرونی ستون فقرات کوتاه کرده و پس از ضدعفونی کردن، برش دادند. پهنای پوست و عضلات پشت حدود 0.{9}} سانتی متر است. یک توده چربی براق سفید شیری در ناحیه برش دیده می شود و تخمدان در آن جاسازی شده است. از موچین های کوچک استفاده کنید تا به آرامی توده چربی را بگیرید و آن را از محل برش بیرون بکشید، توده چربی را جدا کنید، گروهی از تخمدان های نازک، نامنظم و زرد متمایل به قرمز را خواهید دید. هنگام برش، ابتدا لوله های فالوپ (از جمله چربی) را با نخ های نازک زیر تخمدان ها بسته و سپس تخمدان ها را خارج کنید. پس از عمل، شاخ های رحم به داخل حفره شکم بازگردانده می شوند، ماهیچه ها و پوست بخیه می شوند و هر دو تخمدان به یک شکل خارج می شوند. پس از عمل، حیوانات به دقت بزرگ شدند و پنی سیلین 200،{12}} u/kg (هر کدام 0.1 میلی لیتر) به صورت عضلانی برای جلوگیری از عفونت به مدت 3 روز متوالی، یک بار در روز تزریق شد. 5 روز پس از عمل، معاینه اسمیر واژینال روی هر موش یک به یک و به مدت 5 روز متوالی یک بار در روز انجام شد تا مشخص شود که آیا تخمدان ها به طور کامل برداشته شده اند یا خیر. موش هایی که در اسمیر واکنش فحلی نشان دادند دور انداخته شدند و 60 موش کاملاً اخته شده به طور تصادفی و به طور مساوی به 6 گروه برای اهداف آزمایشی تقسیم شدند، یعنی گروه مدل، گروه منگنیانان، گروه ایزوفلاون سویا، بزرگ، متوسط ​​وگروه گلیکوزید فنیل اتانول سیستانچ با دوز کم. به حیوانات هر گروه در روز دهم پس از جراحی داروهای مربوطه داده شد. پس از 6 روز تجویز، موش‌های گروه خالی در 5 عدد در قفس، با غذا و آب معمولی، بدون هیچ گونه تحریکی بزرگ شدند. 6 گروه مدل همگی با 1 موش در هر قفس بزرگ شدند و هر روز به طور تصادفی تحریکات مختلفی به آنها داده شد. هفت عامل استرس به طور تصادفی در 18 روز اعمال شد: بستر مرطوب (1 گرم بستر / 1 میلی لیتر آب). شنا در آب یخ (4 درجه، 5 دقیقه)؛ استرس گرمایی (45 درجه، 5 دقیقه)؛ روشنایی شبانه (24 ساعت)؛ بستن دم (1 دقیقه)؛ محرومیت از آب (24 ساعت)؛ روزه (24 ساعت). هر روز یک محرک به طور تصادفی داده می شد و هر محرک نمی توانست به مدت 18 روز به طور مداوم ظاهر شود.

روش تهیه: 0.5% CMC روش تهیه: 4 گرم کربوکسی متیل سلولز سدیم را وزن کرده و با آب مقطر مخلوط کنید تا 800 میلی لیتر به دست آید.

دوزهای بزرگ، متوسط ​​و کوچک گروه گلیکوزید فنیل اتانول سیستانچ 200mg/kg، 10{{2{0}}mg/kg و 5{31}}mg/kg به ترتیب (حجم تجویز 0.1ml/10g). روش تهیه: به ترتیب 2000 میلی گرم، 1000 میلی گرم و 500 میلی گرم گلیکوزید فنیل اتانوئید سیستانچ را وزن کرده، با مقدار کمی CMC 5/0 درصد حل کنید، سپس حجم را روی 100 میلی لیتر تنظیم کنید، خوب مخلوط کنید و تمام. کپسول Gengniangan (675mg/kg، مخلوط با آب مقطر تا 67.5 mg/ml، 0.1ml/10g، معادل 15 برابر دوز بالینی). روش تهیه: 9 کپسول Gengniangan را مصرف کنید، ابتدا از مقدار کمی از 0.5% CMC Dissolve استفاده کنید، سپس حجم را روی 40 میلی لیتر تنظیم کنید و خوب مخلوط کنید تا دوز کپسول Gengnianan (675 میلی گرم بر کیلوگرم) بدست آید. کپسول نرم ایزوفلاون ویتامین E سویا (250mg/kg، از آب مقطر برای تهیه 25mg/ml، 0.1ml/10g، معادل 15 برابر دوز بالینی استفاده کنید). روش تهیه: 2 عدد کپسول نرم ایزوفلاون ویتامین E سویا را مصرف کنید، ابتدا مقدار کمی از 0.5% CMC را حل کنید، سپس حجم را روی 40 میلی لیتر تنظیم کنید و خوب مخلوط کنید تا دوز سوسپانسیون کپسول نرم ایزوفلاون ویتامین E (250 میلی گرم بر کیلوگرم) بدست آید. ). روش نگهداری: در یخچال، در حین استفاده گرم نگه دارید.

روش تجويز: به حيوانات هر گروه داروهاي مربوطه در روز دهم پس از جراحي داده شد. به گروه Gengnian'an سوسپانسیون کپسول Gengnian'an 675 mg·kg{2}} خوراکی، به گروه ایزوفلاون سویا به صورت خوراکی سوسپانسیون کپسول نرم ایزوفلاون ویتامین E 250 mg/kg سویا و بزرگ، متوسط ​​ودوزهای کوچک سیستانچفنیل اتانول گروه گلیکوزید به صورت خوراکی دوزهای بزرگ، متوسط ​​و کوچک سیستانچ فنیل اتانول گلیکوزید 200mg·kg-1، 10mg·kg-1، 50mg·kg{{ 5}}، به ترتیب 0.1ml/10g. گروه بلانک و گروه مدل با همان حجم محلول 0.5% CMC یک بار در روز به مدت 30 روز متوالی گاواژ شدند.

2.2 موارد مشاهده و روش های تشخیص

شنای اجباری: در روز اول پس از پایان تحریک استرس مزمن، زمان بی حرکتی موش های هر گروه در مدت 6 دقیقه به مدت 2-6 دقیقه اندازه گیری شد. (موش های هر گروه را در یک بشر 2000 میلی لیتری قرار دهید. دمای آب 25 درجه است. علاوه بر حداقل حرکت لازم برای حفظ شناور، اندام حیوانات از حرکت باز می ایستد و به عنوان بی حرکت ثبت می شود. کل زمان بی حرکتی را از 2 ثبت کنید. تا 6 دقیقه در 6 دقیقه ) تست فعالیت داوطلبانه: در روز دوم پس از پایان تحریک استرس مزمن، تعداد فعالیت های خود به خودی هر گروه در مدت 5 دقیقه اندازه گیری شد.

روش اجتناب از تاریکی: در روز سوم پس از پایان تحریک استرس مزمن، دم موش را در جعبه اندازه گیری رو به دهانه کوچک تاریکخانه قرار دهید و تمرین انجام دهید. پس از 24 ساعت، تأخیر ورود ماوس به تاریکخانه برای اولین بار و زمان ورود به تاریکخانه را در عرض 5 دقیقه مجددا اندازه گیری کنید. تعداد شوک الکتریکی

تست تعلیق دم: در روز پنجم پس از پایان تحریک استرس مزمن، زمان بی‌حرکتی موش‌های هر گروه در مدت 6 دقیقه به مدت {2}} دقیقه اندازه‌گیری شد.

2 ساعت پس از آخرین دوز (12 ساعت بدون غذا یا آب)، موش ها وزن شدند، کره چشم ها برداشته شد، خون جمع آوری شد، سرم جدا شد و محتوای E2، T، LH و FSH در سرم اندازه گیری شد. اندازه گیری شده؛ موش‌ها سپس با دررفتگی مهره‌های گردنی کشته شدند و موش‌ها تشریح شدند. تیموس، طحال و بافت رحم را بردارید، وزن مرطوب آنها را وزن کرده و شاخص اندام را محاسبه کنید (شاخص اندام=وزن مرطوب اندام mg/وزن موش گرم)، سپس مغز را خارج کرده، نصف کنید و مغز را آماده کنید. همگن بافت برای تعیین محتوای انتقال‌دهنده‌های عصبی مونوآمین 5-HT و DA در هموژن بافت مغز از روش ایمونواسی آنزیمی استفاده شد. بافت تیموس، طحال، رحم و مغز در محلول فرمالدئید 10 درصد تثبیت شد، در پارافین جاسازی شد، برش داده شد و با HE رنگ‌آمیزی شد. تغییرات مورفولوژیکی هر گروه در زیر میکروسکوپ نوری مشاهده شد. 2.3 روش تعیین کیت

دریافت نمونه های سرم: از لوله های آزمایشی استفاده کنید که عاری از پیروژن و اندوتوکسین هستند. از هرگونه تحریک سلولی در طول عمل اجتناب کنید. پس از جمع آوری خون، آن را با سرعت 3000 دور در دقیقه به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید تا سرم و گلبول های قرمز خون به سرعت و با دقت جدا شوند. به دست آوردن نمونه های هموژن بافت: مقدار مناسبی نمک فیزیولوژیک را به بافت اضافه کرده و آن را له کنید. به مدت 10 دقیقه با دور 3000 سانتریفیوژ کرده و مایع رویی را بگیرید.

روش تعیین کیت الایزا استرادیول (E2) موش (موش) همانند آزمایش 2 است. غلظت محصولات استاندارد (S0-55) عبارتند از: 0، 4، 8، 16، 32 و 64 pmol/L.

روش تعیین کیت الایزا تستوسترون موش (T) همانند استرادیول (E2) است. غلظت محصولات استاندارد (S0-55) عبارتند از: 0، 50، 100، 200، 400، 800 pg/mL.

روش تعیین کیت الایزا هورمون محرک فولیکول (FSH) موش مانند استرادیول (E2) است. غلظت محصولات استاندارد (S0-55) عبارتند از: 0، 5، 10، 20، 40، و 8{{30} }mIU/ml. روش تعیین کیت الایزای هورمون لوتئینیزه کننده (LH) موش (موش) همانند استرادیول (E2) است. غلظت استاندارد (S{10}}) عبارتند از: 0، 0.5، 1، 2، 4، و 8mIU/mL. روش تعیین کیت الایزا 5-هیدروکسی تریپتامین (5-) موش مانند استرادیول (E2) است. غلظت محصولات استاندارد (S{21}}) عبارتند از: 0، 15، 30، 60، 120، 240ng/ml. روش تعیین کیت تشخیص الایزا دوپامین (DA) موش (موش) مانند استرادیول (E2) است. غلظت محصولات استاندارد (S{29}}) عبارتند از: 0، 7.5، 15، 30، 60 و 120 pg/ml.

از جدول 21 و شکل 25 مشاهده می شود که در مقایسه با گروه خالی، زمان بی حرکتی موش ها در گروه مدل در آزمایش های شنای اجباری و تعلیق دم به طور قابل توجهی افزایش یافت (P<0.01), indicating that perimenopausal model mice with depression Increased levels of despair about adverse circumstances. Compared with the model group, the forced swimming immobility time and tail suspension immobility time of mice in each drug group were significantly reduced (P<0.01).

2 تأثیر بر فعالیت های خودمختار در موش های مدل افسردگی قبل از یائسگی

نتایج تست فعالیت خودمختار موش در هر گروه آزمایشی در جدول 22 و شکل 26 نشان داده شده است.

از جدول 23 و شکل های 27 و 28 مشاهده می شود که در مقایسه با گروه خالی، دوره تاخیر موش های گروه مدل به طور قابل توجهی کاهش یافته و تعداد شوک های الکتریکی به طور قابل توجهی افزایش یافته است (P<0.01), reflecting the decline in memory of the perimenopausal depression model mice. . Compared with the model group, the number of electric shocks received by mice in each administration group was significantly reduced (P<0.01), and the latency of mice in the high-dose Cistanche phenylethanol glycoside group, Mengnianan group, and soybean isoflavones group was significantly reduced (P<0.01). extension (P<0.01). The latent period of mice in the medium and small doses of Cistanche phenylethanoid glycoside group was significantly prolonged (P<0.05).

4 اثر بر شاخص اندام در موش های مدل افسردگی قبل از یائسگی

از جدول 24 و شکل 29 مشاهده می شود که در مقایسه با گروه خالی، شاخص تیموس، شاخص طحال و شاخص رحمی گروه مدل به طور معنی داری کاهش یافته است (P<0.01), indicating that the perimenopausal depression mouse model had thymus, spleen, and uterus index. Shrinkage of the organization. Compared with the model group, the thymus index, spleen index, and uterine index of mice in the high-dose Cistanche phenylethanol glycoside group, Gengnianan group, and soybean isoflavone group could be significantly increased (P<0.01). The medium-dose گلیکوزید فنیل اتانول سیستانچگروه شاخص تیموس و شاخص رحمی موش ها را می توان به طور قابل توجهی افزایش داد (P<0.01), and the spleen index can be significantly increased (P<0.05).