مصرف نمک زیاد باعث کاهش سطح سیتوکین های التهابی بافت کلیه در موش می شود

edmund.chen@wecistanche.com

خلاصه

مصرف زیاد نمک (HS) معمولاً به عنوان یک عامل تشدید کننده برای القای التهاب در نظر گرفته می شودآسیب کلیوی. با این حال، تغییرات درکلیهسطح سیتوکین های التهابی در طول مصرف HS هنوز به وضوح تعریف نشده است. ما فرض می کنیم که HS افزایش می یابدکلیهسطوح فاکتور نکروز تومور آلفا (TNF-) و اینترلوکین{2}} (IL-6) اما اینترلوکین-10 (IL-10؛ سایتوکین ضد التهابی) و این پاسخ ها در شرایط کمبود NO تشدید می شوند. به موش های نوع وحشی (WT) و ناک اوت NO سنتاز اندوتلیال (eNOSKO) (8 هفته سن، n {{1{11}}}} در هر گروه) نمک نرمال (NS؛ 0.3 درصد NaCl) و HS داده شد. (4 درصد NaCl) جیره های حاوی رژیم غذایی به مدت 2 هفته. فشار خون سیستولیک (SBP) توسط پلتیسموگرافی دم کاف تعیین شد و جمع آوری ادرار با استفاده از قفس های متابولیک انجام شد. SBP پایه در eNOSKO بالاتر از موش WT بود (7 ± 131 در مقابل 3 ± 117 mmHg؛ P <0.05). مصرف="" hs="" به="" مدت="" 2="" هفته="" sbp="" را="" در="" enosko="" (5="" ±="" 161="" mmhg)="" افزایش="" داد="" اما="" در="" موش="" wt="" نه.="" در="" گروه="" های="" ns،="" سطح="" سیتوکین="">کلیهبافت ها (اندازه گیری شده با استفاده از کیت های ELISA و بیان شده در پروتئین pg/mg) در eNOSKO به طور قابل توجهی بالاتر از موش های WT بود (TNF-، 67 ± 624 در مقابل 73 ± 325؛ IL-6، 106 ± 619 در مقابل 61 ± 166 ؛ IL{10}}، 567 ± 6087 در مقابل 378 ± 3929). جالب توجه است که این سطوح سیتوکین در گروه‌های HS در WT (TNF-، 17 ± 114؛ IL{20}}، 14 ± 81؛ IL-10، 130 ± 865) و eNOSKO به طور قابل توجهی کمتر بود. (TNF-، 18 ± 115؛ IL{29}}، 7 ± 56؛ IL-10، 141 ± 882) موش. این یافته ها نشان می دهد که HS باعث کاهش سیتوکین ها در بدن می شودکلیه.چنین کاهش ناشی از HS در سیتوکین ها، به ویژه TNF- (یک ​​عامل ناتریورتیک)، احتباس نمک را تسهیل می کند، و بنابراین، منجر به فشار خون حساس به نمک در شرایط کمبود NO می شود.

کلید واژه ها:اندوتلیال نیتریک اکساید سنتاز، مصرف نمک زیاد، IL-10، IL-6، اکسید نیتریک، TNF-، کلیه، کلیه

CISTANCHE نارسایی کلیه/کلیه را بهبود می بخشد

مقدمه

به طور کلی تصور می شود که رژیم غذایی پر نمک (HS) با بسیاری از اختلالات قلبی عروقی و متابولیک مانند فشار خون بالا و تشدید التهاب همراه است. شواهد نشان می دهد که رژیم غذایی HS با نشانگرهای زیستی بالاتر التهاب مرتبط است. بسیاری از مطالعات اخیر نیز به این واقعیت کمک کرده اند که فشار خون بالا یک بیماری التهابی مزمن با عدم تعادل بین سایتوکین های پیش التهابی و ضد التهابی است. چنین عدم تعادلی ناشی از اختلال در تنظیم سیستم رنین آنژیوتانسین (RAS) و استرس اکسیداتیو است که با افزایش مصرف نمک در رژیم غذایی و افزایش سن مرتبط است (Das، 2006؛ Guzik و همکاران، 2007؛ Mattson، 2014؛ Rodriguez-Iturbe et al. ، 2004). نه تنها به عنوان یک القاکننده استرس اکسیداتیو، بلکه آنژیوتانسین II (AngII) همچنین به عنوان القای افزایش تولید سایتوکین های التهابی مانند فاکتور نکروز تومور آلفا (TNF-) و اینترلوکین (IL{11}}) شناخته شده است (Funakoshi et al. .، 1999؛ هان و همکاران، 1999؛ رویز-اورتگا و همکاران، 2002؛ سانز-روزا و همکاران، 2005). در آزمایش‌هایی با مدل‌های جوندگان، مصرف مزمن رژیم غذایی HS فشار خون سیستمیک (BP) را تغییر نمی‌دهد (Kopkanet al., 2010؛ Lara et al., 2012). با این حال، رژیم غذایی HS که به جوندگان تحت درمان مزمن با AngII یا یک مهارکننده NO سنتاز (NOS)، نیترو-ال-آرژنین-متیل استر (L-NAME) یا در موش های NOS ناک اوت اندوتلیال (eNOSKO) تحت درمان مزمن قرار گرفته بود، پاسخ پرفشاری خون را اغراق آمیز کرد، وکلیهآسیب بافت التهابی (فرانسوا و همکاران، 2008؛ کوپکان و همکاران، 2010؛ کوپکان و مجید، 2005؛ ناکامورا و همکاران، 2011؛ ​​سینگ و همکاران، 2013، 2017). دریافت HS در موش های eNOSKO نشان داده است که فشار خون را افزایش می دهد وآسیب کلیویمرتبط با افزایش استرس اکسیداتیو و تولید AngII (ناکامورا و همکاران، 2011). این نتایج نشان می دهد که رژیم غذایی HS بر تولید سایتوکین های التهابی در شرایط افزایش استرس اکسیداتیو یا در افزایش فعالیت RAS تأثیر می گذارد. ما قبلاً گزارش کرده‌ایم که مهار حاد NOS توسط انفوزیون سیستمیک L-NAME در موش باعث افزایش پلاسما وکلیهسطح TNF- (شهید و همکاران، 2010؛ سینگ و همکاران، 2014)، با افزایش نفوذ ماکروفاژها درکلیه(اسلام و همکاران، 2011). چنین مهار سیستمیک NOS با تزریق حاد L-NAME در موش سطح سیتوکین ضد التهابی، اینترلوکین{3}} (IL{4}}) در پلاسما وکلیهبافت (سینگ و همکاران، 2014). با این حال، تغییرات در سطوح سیتوکین های التهابی در پاسخ به مصرف مزمن HS در شرایط عادی و وضعیت کمبود مزمن NO هنوز به وضوح مشخص نشده است.

ما فرض می کنیم که مصرف HS افزایش می یابدکلیهسطوح پیش التهابی و سیتوکین های ضد التهابی را کاهش می دهد و این پاسخ ها در شرایط کمبود NO تشدید می شود. برای بررسی این فرضیه، ما با هدف ارزیابی تغییرات در وضعیت سایتوکین های التهابی، به ویژه درکلیهدر طول دریافت رژیم غذایی HS، و برای تعیین اینکه چگونه این سیتوکین ها تحت تاثیر کمبود مزمن NO قرار می گیرند. در این مطالعه ما اندازه گیری شدکلیهو همچنین سطوح پلاسمایی سیتوکین‌های التهابی pro(IL{{0}} و TNF-) و ضد (IL-10) در موش‌های نوع وحشی (WT) و eNOSKO که تغذیه طبیعی داشتند. رژیم غذایی حاوی نمک (NS؛ 0.3 درصد NaCl) و HS (4 درصد) به مدت 2 هفته.

سیستانچ عفونت کلیه/کلیه را بهبود می بخشد

2. مواد و روش ها

آزمایش ها مطابق با دستورالعمل ها و شیوه های ایجاد شده توسط کمیته مراقبت و استفاده از حیوانات دانشگاه تولین انجام شد. موش‌های نر eNOSKO (B6.129P2-Nos3tm1Unc/J؛ شماره موجودی: 002684) و سویه پس‌زمینه ژنتیکی موش‌های WT (C57BL/6J؛ شماره موجودی: 002684) (آزمایشگاه جکسون، بار) Harbor، ME) به عنوان شاهد در این مطالعه استفاده شد. این موش‌ها در اتاقی با دما و نور قرار گرفتند و اجازه دسترسی آزاد به رژیم غذایی استاندارد (Ralston-Purina، سنت لوئیس، MO) و آب لوله‌کشی را دادند. موش 8-9 هفته سن؛ 22-20 گرم وزن بدن به‌ترتیب بسته به دریافت رژیم NS (یک رژیم غذایی استاندارد حاوی 0.3 درصد NaCl) و رژیم HS (HS، 4 درصد NaCl؛ Harlan-Teklad، Madison، WI) به گروه‌های مختلف تقسیم شدند. ، متشکل از شش حیوان در هر گروه. گروه ها به شرح زیر است: 1. WT-NS: موش های نوع وحشی که با رژیم NS تغذیه می شوند، 2. WT-HS: موش های نوع وحشی تغذیه شده با رژیم غذایی HS 3. eNOSKO-NS: موش های eNOSKO که با رژیم NS تغذیه می شوند، 4. eNOSKO-HS: موش‌های eNOSKO با رژیم غذایی HS تغذیه شدند

2.1 نظارت بر BP در موش های هوشیار

فشار خون سیستولیک (SBP) در موش های آزمایشگاهی با استفاده از تکنیک پلتیسموگرافی غیرتهاجمی دم کاف (Visitech Systems، Apex، NC) اندازه گیری شد. موش‌ها به مدت 7 تا 10 روز با یک رژیم غذایی آزمایشگاهی استاندارد تحت نظر قرار گرفتند، و BP پایه قبل از تغییر به رژیم غذایی پر نمک (فقط برای موش‌های WT-HS و eNOSKO-HS) برای بقیه زمان‌ها ثبت شد. مطالعه. در این گروه از موش ها، BP در همان زمان از روز (11 صبح تا 1 بعد از ظهر) اندازه گیری شد تا از تأثیر چرخه شبانه روزی جلوگیری شود، و مقدار SBP با تخمین میانگین قرائت 10 اندازه گیری برای یک واحد به دست آمد. آزمایش. 7 تا 10 روز قبل از شروع آزمایش، موش ها برای اندازه گیری فشار خون دم-کاف آموزش دیدند. پس از 2 تا 3 روز سازگاری با دستگاه دم کاف، SBP پایه در تمام موش‌هایی که رژیم غذایی آزمایشگاهی استاندارد داشتند قبل از شروع رژیم HS اندازه‌گیری شد و به عنوان مقدار روز صفر در نظر گرفته شد. سپس، حیوانات گروه HS برای باقیمانده مطالعه به رژیم غذایی HS تغییر داده شدند (متعاقباً SBP در روزهای 3، 6، 9 و 12 رژیم غذایی NS/HS اندازه گیری شد) در یک چرخه 12:12 ساعت روشنایی تاریکی و دریافت کردند. غذا و آب به طور آزاد در طول مطالعه.

2.2 درمان با حیوانات

پس از ثبت SBP در حال استراحت، موش ها با رژیم غذایی NS ({0}}.3 درصد NaCl) یا HS (4 درصد NaCl) به مدت 2 هفته تغذیه شدند تا پاسخ به HS به تنهایی در WT و ارزیابی شود. موش eNOSKO هر دو این رژیم‌ها حاوی غلظت تقریباً مشابهی از سایر مواد مغذی بودند (19 درصد پروتئین، 5 درصد چربی، 3 درصد فیبر خام، 0. 86 درصد کلسیم، 0}.64 درصد P، { {13}}.72 درصد پتاسیم و 0.15 درصد Mg). در طول دوره آزمایشی، موش ها اجازه داشتند آزادانه از بطری های آب متصل به قفس بنوشند. مصرف غذا و آب همراه با وزن بدن هر موش در طول دوره آزمایش اندازه گیری شد.

2.3 جمع آوری و تجزیه و تحلیل نمونه های ادرار و خون

نمونه‌های ادرار 24 ساعته از موش‌های هوشیار با استفاده از قفس‌های متابولیک در یک روز پایه (روز 0) و در روز آخر (روز 13) برای ارزیابی پارامترهای دفعی با یا بدون دریافت HS در این موش‌ها جمع‌آوری شد. تمام گروه‌های موش در قفس‌های متابولیک و ادرار قرار گرفتند و پارامترهای لازم همزمان جمع‌آوری شد. حیوانات به صورت جداگانه در قفس های متابولیک قرار گرفتند و ادرار به مدت 24 ساعت در لوله های استریل جمع آوری شد. حجم ادرار از هر مجموعه ادرار تعیین شد و نمونه‌ها سانتریفیوژ شدند (3،{6}} rpm/5min؛ 4 درجه) و برای تعیین دفع ادراری سدیم و پتاسیم نگهداری شدند. دفع ادراری سدیم و پتاسیم توسط فتومتری شعله ارزیابی شد (Singh et al., 2013, 2017).

در پايان دوره آزمايش، تمام حيوانات معدوم شده و خون گرفته شد. پلاسما بلافاصله از خون جدا شد و در دمای 80- درجه سانتیگراد برای تخمین سیتوکین های التهابی پرو (IL{2}} و TNF-) و ضد (IL{5}}) همانطور که قبلاً انجام شد (Singh et al., 2014، 2017). اینکلیه هانیز حذف شدند. یکیکلیهدر محلول فرمالین 10 درصد تثبیت و در پارافین جاسازی شد تا بررسی شودآسیب کلیوی. دیگریکلیهبرای اندازه گیری سطوح سایتوکین های التهابی پردازش شد. یک 100 میلی گرمکلیهشامل هر دو ناحیه قشر و مدولاری در سالین استریل بافر فسفات حاوی بازدارنده پروتئاز در درجه 4 همگن شد. اینکلیههموژن ها در 9،{1}} گرم به مدت 10 دقیقه در 4 درجه سانتریفیوژ شدند. مواد رویی به لوله های میکرو سانتریفیوژ تمیز منتقل شدند و در دمای 80- درجه نگهداری شدند تا تجزیه و تحلیل شوند.

2.4 سنجش ایمونوسوربنت متصل به آنزیم برای سطح IL-10، IL-6 و TNF-

سطوح IL-10، IL-6 و TNF- در پلاسما و مواد رویی ازکلیههمگن بافت با استفاده از کیت های ELISA Ready-SET-go (eBioscience, Inc., San Diego, CA) اندازه گیری شد. سطوح تشخیص کیت ها (محدوده منحنی استاندارد) به شرح زیر است: کیت IL-10 (شماره کاتالوگ 88-7105-88)، 32-4000 pg/ml. کیت IL-6 (شماره کاتالوگ 88-7064-22)، 4-500 pg/ml. کیت TNF (شماره کاتالوگ 88-7324-86)، 8-1000 pg/ml. سطح سیتوکین ها درکلیهبافت با غلظت پروتئین نرمال شد (اندازه گیری شده با روش سنجش پروتئین سازگار با مواد شوینده Bio-Rad) (Cat. No. # 500-0112; Bio-Rad, Hercules, CA)

2.5 ارزیابی آسیب کلیوی

پارافین ثابت شده با فرمالینکلیهمقاطع برای تجزیه و تحلیل گلومرولواسکلروز با استفاده از رنگ آمیزی اسید-شیف دوره ای (Lara et al., 2012; Luna, 1992; Singh et al., 2013, 2017) و فیبروز بینابینی توبولی با استفاده از رنگ آمیزی تری کروم Gomori's trichrome, 19h. 2013، 2017).

سیستانچ درد کلیه/کلیه را بهبود می بخشد

2.6 برآورد گلومرولواسکلروز

وسعت گلومرولواسکلروز به صورت کمی با آنالیز تصویر خودکار هر گلومرول با استفاده از رنگ آمیزی دوره ای اسید شیف ارزیابی شد.کلیهبخش ها (سرویس بافت شناسی توده، ورسستر، MA) (لارا و همکاران، 2012؛ لونا، 1992؛ سینگ و همکاران، 2013، 2017). از هر کدام بیست تصویرکلیهاسلاید با حداقل یک گلومرول در هر میدان با استفاده از میکروسکوپ Nikon Eclipse 50i مجهز به سر دوربین نیکون DS (DS Fi1) و واحد کنترل دوربین DS (DSU2) عکس‌برداری شد. رنگ بنفش تیره در گلومرول به عنوان اسکلروز شناخته شد. درصد مساحت تحت پوشش اسکلروز در گلومرول ها در هر زمینه با استفاده از نرم افزار Nikon NIS-Elements (نسخه 2.34) مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. درصد داده‌های به‌دست‌آمده برای هر یک از 20 تصویر برای به دست آوردن درصد ناحیه اسکلروز برای کل اسلاید به‌طور میانگین محاسبه شد.

2.7 تخمین فیبروز توبولو بینابینی

وسعت ناحیه بینابینی کلاژن مثبت (فیبروز) به صورت کمی با تجزیه و تحلیل تصویر خودکار ازکلیهبخش اشغال شده توسط رنگ آمیزی بافت بینابینی برای کلاژن مثبت در مقاطع رنگ آمیزی شده با تری کروم Gomori (Gomori، 1950؛ سینگ و همکاران، 2013، 2017). پارافین فیکس شده با فرمالینکلیهبخش ها با یک رنگ پلاسمین (کروموتروپ 2R) و یک رنگ فیبر بافت همبند (آنیلین آبی) ترکیب شده در محلولی از اسید فسفو تنگستیک که اسید استیک یخبندان به آن اضافه شده بود رنگ آمیزی شدند. این باعث رنگ آبی کلاژن می شود که نشان دهنده فیبروز است. اسلایدها همانطور که در بالا توضیح داده شد عکسبرداری شدند. درصد سطح تحت پوشش کلاژن در هر زمینه با استفاده از نرم افزار Nikon NIS-Elements (نسخه 2.34) آنالیز شد. درصد داده های به دست آمده برای هر یک از 20 تصویر برای به دست آوردن درصد سطح فیبروز برای کل اسلاید به طور میانگین محاسبه شد.

2.8 تجزیه و تحلیل آماری

همه نتایج به صورت میانگین ± SE بیان می شوند. تجزیه و تحلیل آماری با استفاده از نرم‌افزار سیگما استات (نرم‌افزار Systat، روزها در مدت 2 هفته مطالعه بدون جمع‌آوری مدفوع و سایر اندازه‌گیری‌های هدررفت غیر محسوس نمک و آب انجام شد. بنابراین ارزیابی جامع تعادل آب و سدیم در کل دوره آزمایشی انجام شد. از این پارامترهای جمع آوری شده از قفس های متابولیک امکان پذیر نیست.

3.3 سطوح سیتوکین التهابی

3.31 TNF-شکل 2 پلاسما وکلیهسطوح بافتی TNF- (شکل 2a و b) در پایان دوره آزمایشی. غلظت TNF- در پلاسما در گروه های دریافت کننده NS، هر دو موش WT و eNOSKO شناسایی نشد. با این حال، در گروه‌های دریافتی HS موش‌ها، سطح TNF- پلاسما با تنوع بالا در موش‌های WT، pg/ml 146 ± 202 و eNOSKO، 68 ± 175 pg / ml) شناسایی شد. در گروه‌های مصرفی NS، سطح TNF- در بافت کلیه در موش‌های eNOSKO بالاتر از موش‌های WT بود (67 ± 624 در مقابل 73 ± 325، pg/mg پروتئین؛ P <0.05). با="" این="" حال،="" در="" گروه="" های="" دریافت="">کلیهسطوح TNF- بافتی در موش‌های WT (17 ± 114 pg/mg پروتئین) و eNOSKO (18 ± 115 pg/mg پروتئین) در مقایسه با گروه‌های دریافتی NS به طور قابل‌توجهی کمتر بود.

3.32 IL-6

شکل 3 پلاسما وکلیهسطوح بافتی IL{0}} (شکل 3a و b). در گروه های دریافتی NS، غلظت IL-6 در پلاسما (44 ± 180 در مقابل 11 ± 13 pg/ml؛ 0.05 > p) و درکلیه(106 ± 619 در مقابل 61 ± 166 pg / mg پروتئین؛ P <0.05) در="" enosko="" بالاتر="" از="" موش="" wt="" بود.="" با="" این="" حال،="" سطح="" il{5}}="" پلاسما="" در="" گروه‌های="" دریافتی="" hs="" در="" موش‌های="" wt="" و="" enosko="" شناسایی="">کلیویسطح IL{0}} بافت نیز در گروه‌های دریافت HS در موش‌های eNOSKO (7 ± 56 pg/mg پروتئین) و WT (81 ± 14 pg/mg پروتئین) در مقایسه با گروه‌های دریافتی NS به‌طور معنی‌داری پایین‌تر بود.

3.33 IL-10

شکل 4 پلاسما وکلیهسطوح بافتی IL{0}} (شکل 4a و b). در گروه‌های دریافتی NS، سطح پلاسمایی IL{2}} در eNOSKO کمتر از موش‌های WT بود (125 ± 510 در مقابل pg/ml 54 ± 701؛ p <0.05). با="" این="">کلیهسطح IL{0}} بافت در eNOSKO بالاتر از موش WT بود (567 ± 6087 در مقابل 378 ± 3929، pg/mg پروتئین؛ P <0.05). در="" گروه="" دریافت="" hs="" پلاسما="">کلیهسطوح بافتی IL{0}} در هر دو eNOSKO (67 ± 327 pg/ml؛ 141 ± 882 pg/mg پروتئین) و WT (52 ± 344 pg/ml؛ 130 ± 865 pg/ml) به طور قابل توجهی کمتر بود. میلی گرم پروتئین) موش.

3.4 پارامترهای آسیب کلیوی

3.4.1|گلومرولواسکلروز

تصاویر نماینده دوره ای-اسید-شیف رنگ آمیزی شدکلیهبخش هایی که وسعت اسکلروز گلومرولی را ارائه می دهند در شکل 5a و درصد نواحی اسکلروتیک در شکل 5b نشان داده شده است. اگرچه ما گلومرول‌های منقبض و ترومبوز شده را در موش‌های eNOSKO تغذیه‌شده با NS مشاهده کردیم، اما در موش‌های WT نه، تفاوت معنی‌داری در درصد ناحیه اسکلروتیک بین موش‌های WT-NS و eNOSKO-NS وجود نداشت (1 ± 4/11 درصد و 1 ± 2/11 درصد). با این حال، درصد ناحیه اسکلروتیک در WT-HS در مقایسه با موش های WT-NS کمتر بود (1 ± 7.7 درصد در مقابل 1 ± 11.4 درصد؛ p <.05).>

3.4.2 فیبروز لوله ای بینابینی

تصاویر معرف مقاطع رنگ آمیزی شده با تری کروم گوموری میزان وسعت را ارائه می دهدکلیهفیبروز بینابینی در شکل 6a آورده شده است و درصد نواحی فیبروتیک در شکل 6b نشان داده شده است. به طور کلی، مقادیر فیبروتیک در بینابینی کلیوی در این مدل‌های موش از نظر کمی کمتر است. در موش های WT، ناحیه فیبروتیک درکلیهبینابینی در هر دو گروه دریافت NS و HS مشابه بود. با این وجود، همانطور که انتظار می رفت، ناحیه فیبروتیک در eNOSKO-NS به طور قابل توجهی بالاتر از موش های WT-NS بود (2.2 ± 0.2 درصد در مقابل 1.5 ± 0.2 درصد؛ p <.05). .="" با="" این="" حال،="" ناحیه="" فیبروتیک="">کلیهبینابینی در eNOSKO-HS کمتر از موش eNOSKO-NS بود (1.8 ± 0.1 درصد در مقابل 2.2 ± 0.2 درصد؛ p <.05).

4. بحث

اگرچه کمبود مزمن NO باعث افزایش سیتوکین های التهابی می شود، نتایج مطالعه حاضر نشان می دهد که مصرف HS در موش، حداقل به مدت 2 هفته، به طور کلی سطح سایتوکین های پیش و ضد التهابی را سرکوب می کند، به ویژه درکلیه. سطح پلاسمایی پایه TNF- عمدتاً در موش‌های WT و eNOSKO که با رژیم‌های غذایی NS تغذیه شده بودند، شناسایی نشد. با این حال، سطح قابل توجهی از این سیتوکین در هر دو سویه تغذیه شده با جیره HS به مدت 2 هفته مشاهده شد. بنابراین، نشان می دهد که مصرف HS تولید سیستمیک TNF- را تحریک می کند، همانطور که در مطالعات دیگر نشان داده شده است (کوستا و همکاران، 2012؛ لیو و همکاران، 2012؛ یلماز و همکاران، 2012؛ ژو و همکاران، 2014). با این حال، جالب است بدانید کهکلیهسطوح TNF- در گروه های دریافت کننده HS موش های WT و eNOSKO در مقایسه با گروه های دریافت کننده NS به طور قابل توجهی پایین تر است. چنین کاهشی ناشی از HS در سایر سایتوکاین‌ها مانند IL-6 و IL-10 نیز مشاهده شد.کلیهاگر چهکلیهسطوح IL-6 و IL-10 در موش‌های eNOSKO-NS بیشتر از موش‌های WT-NS بود، سطوح پلاسمایی آنها متغیر بود. در مقایسه با موش‌های WT-NS، سطوح پلاسمایی IL{5}} بالاتر، IL-10 کمتر بود، اما سطح TNF- در موش‌های eNOSKO-NS تفاوتی نداشت. به هر حال هر چه بالاترکلیهسطح سیتوکین های پیش التهابی در موش eNOSKO-NS تا حدودی انتظار می رود. NO یک مولکول سیگنال دهنده است که معمولاً در شرایط فیزیولوژیکی طبیعی یک عملکرد ضد التهابی ایفا می کند (Harrison, 1997;

مونکادا و همکاران، 1991). به طور کلی کمبود NO نقش کلیدی در القای فرآیند التهابی دارد (لیو و هوانگ، 2008). با این حال، سطح یک سایتوکین ضد التهابی شناخته شده، IL{3}} نیز درکلیهبافت موش eNOSKO-NS در مقایسه با موش WT-NS. این می تواند به این دلیل باشد که IL{2}} همیشه به عنوان یک عامل ضد التهابی عمل نمی کند، بلکه می تواند به عنوان یک سیتوکین پیش التهابی در شرایط خاص مرتبط با افزایش RAS عمل کند، همانطور که قبلاً در آزمایشگاه ما نشان داده شد (Singh et al. al., 2017).

اگرچه به طور کلی تصور می شود که رژیم HS معمولاً با القای نشانگرهای زیستی بالاتر التهاب همراه است، بیشتر این یافته ها در مطالعات جمعیتی مشاهده شده است که در آن رژیم های HS اغلب برای غذاهای ذهنی مرتبط با رژیم های غذایی غنی از چربی و پروتئین کدگذاری می شوند. که می تواند برخی از این نتایج را منحرف کند (زو و همکاران، 2014). یک مطالعه جالب اخیر نیز نشان داد که مصرف نمک تصفیه شده، اما نه نمک طبیعی دریا، باعث افزایش فشار خون می شود و باعث غیر طبیعی می شود.کلیهآسیب شناسی در موش های حساس به نمک دال (لی و همکاران، 2017). بنابراین، یک رابطه پیچیده بین مصرف نمک و توسعه ایمنی در بدن انسان وجود دارد. مطالعه حاضر اولین مطالعه در میان مطالعاتی است که از مدل‌های حیوانی استفاده می‌کند تا پاسخ‌ها به دریافت کنترل‌شده‌تر رژیم‌های HS را بر روی سطوح برخی از سایتوکین‌های التهابی در پلاسما و در خون نشان دهد.کلیهکاهش مشاهده شده درکلیهتولید سیتوکین ها در طول مصرف HS می تواند با سرکوب RAS ناشی از مصرف HS مرتبط باشد (Drenjančević-Perić و همکاران، 2011).

اشاره شده است که سطح قابل توجهی بالایی از IL پلاسما-10 در موش‌های WT تغذیه‌شده با NS شناسایی شد، اما سطح آن در موش‌های eNOSKO تغذیه‌شده با NS کمی پایین‌تر بود. برعکس، کاهش قابل توجهی از IL{3}} در پاسخ به مهار سیستمیک حاد NOS در موش مشاهده شد، همانطور که در مطالعه قبلی ما گزارش شد (Singh et al., 2014). با این حال، سطوح IL{5}} در پلاسما در موش‌های WT و eNOSKO در طول مصرف HS در مطالعه حاضر کمتر باقی ماند. این داده ها نشان می دهد که مصرف مزمن HS به طور کلی سطح سیتوکین های ضد التهابی و پیش التهابی را سرکوب می کند، به ویژه درکلیه. در موش eNOSKO،کلیهسطح نیتروتیروزین بافتی در مقایسه با موش‌های WT کمتر است (کوپکان و همکاران، 2010) که نشان می‌دهد تولید پراکسی نیتریت در این موش‌های دارای کمبود eNOS کمتر است و ممکن است به افزایش سطح IL{1}} در این سویه موش کمک کند (کوک) و همکاران، 2003؛ Numanami و همکاران، 2003). سطح بالاتر IL{4}} پلاسما می‌تواند اثر مهاری بر سطح پلاسمایی TNF- در موش‌های eNOSKO ایجاد کند، زیرا نشان داده شده است که تزریق حاد IL-10 در موش باعث کاهش سطح TNF- در موش می‌شود.کلیه(سینگ و همکاران، 2014). با این حال، در شرایط خاص، نشان داده شده است که IL{1}} به عنوان یک عامل پیش التهابی برای القاء عمل می کند.آسیب کلیوی،به ویژه در طول افزایش آنژیوتانسین II در موش (سینگ و همکاران، 2017). بنابراین، ممکن است IL-10 به عنوان یک سیتوکین پیش التهابی در این سویه حذفی ژن eNOS عمل کند.

طبق معمول، مصرف HS BP را در WT تغییر نداد، اما باعث افزایش قابل توجهی در BP در موش‌های eNOSKO شد (Kopkan et al., 2010) که در آن BP پایه بالاتر از موش‌های WT بود. از آنجایی که مصرف HS باعث کاهش سطح سیتوکین در هر دو سویه موش می‌شود، چنین پاسخی در موش‌های eNOSKO ممکن است ارتباط مستقیمی بین تغییرات BP با تغییرات در سایتوکین‌های التهابی نشان ندهد. همچنین تاکنون شواهدی وجود ندارد که نشان دهد تغییر در فشار شریانی به طور مستقیم بر تولید TNF- تأثیر می گذارد، اما برعکس، ما و دیگران گزارش داده اند که انفوزیون داخل وریدی TNF- نوترکیب انسانی باعث کاهش فشار خون در موش می شود (Kramer et al., 1988). ؛ شهید و همکاران، 2008). در مطالعه حاضر تغییرات مشابهی در پلاسما وکلیهسطح TNF- و سایر سایتوکاین‌ها در موش‌های WT و eNOSKO از طریق BP تنها در موش‌های eNOSKO افزایش یافته است و نه در موش‌های WT. این مشاهدات کاملاً شگفت‌انگیز نخواهد بود زیرا بسیاری از مطالعات مداخله‌ای دیگر در انسان (Luo et al., 2016) نیز چنین رابطه غیرخطی را با سایتوکاین‌های التهابی و فشار خون بالا در طول مصرف HS پیشنهاد می‌کنند. در یک مطالعه متقاطع تصادفی کنترل شده با دارونما در افراد مبتلا به فشار خون بالا (قبل از درمان)، همچنین اشاره شد که یک دوره 4-هفته‌ای مصرف نمک بر نشانگرهای التهابی مانند سطوح پلاسمایی TNF-، IL{6} تأثیری نداشت. }، IL-6، IL-8، یا MCP-1) (Gijsbers et al., 2015). همچنین اشاره شد که فشار خون در انسان در طول مصرف کم نمک بدون تغییر باقی ماند که منجر به افزایش تولید سایتوکین‌های التهابی مانند TNF-، IL{13}}، یا پرو کلسی تونین شد (Mallamaci et al., 2013). بنابراین، ارتباط مستقیم بین تغییرات در سایتوکین های التهابی و تغییرات BP هنوز به صورت تجربی ثابت نشده است.

مطالعات قبلی ما در جوندگان (Kopkan et al., 2010; Kopkan & Majid, 2005; Singh et al., 2017) نشان داده است که تولید NO درون زا توسط eNOS حساسیت نمک را در پاسخ به دریافت رژیم غذایی HS به حداقل می رساند. مطالعات انجام شده بر روی حیوانات در شرایط عادی نشان می دهد که مصرف مزمن HS به تنهایی باعث عدم تغییر یا حداقل تغییر در BP می شود. با این حال، مصرف HS باعث ایجاد حساسیت به نمک و فشار خون بالا می‌شود که تولید NO در موش‌های eNOSKO (Kopkan et al., 2010) یا موش‌هایی (Kopkan & Majid, 2005) که بطور مزمن با یک مهارکننده NOS، L-NAME تحت درمان قرار می‌گیرند، به خطر بیفتد. مشاهدات ما در مطالعه حاضر نشان می‌دهد که مصرف HS تنها در موش‌های eNOSKO فشار خون حساس به نمک را القا می‌کند اما موش‌های WT را تحریک نمی‌کند (شکل 1). این به احتمال زیاد به دلیل افزایش بازجذب سدیم در لوله استکلیهزمانی که تولید NO توسط فعالیت eNOS به خطر بیفتد، ناشی از افزایش سطح سوپراکسید بافتی است (کوپکان و همکاران، 2010). مصرف مزمن HS معمولاً با تنظیم مثبت فعالیت eNOS باعث تولید NO می شود (ماتسون و هیگینز، 1996). چنین افزایشی در سطح NO، فعالیت سوپراکسید بافت را به حداقل می‌رساند تا وضعیت «تعادل اکسیداتیو» را حفظ کند که هموستاز طبیعی سدیم را تسهیل می‌کند و بنابراین، افزایش BP را به حداقل می‌رساند. ما همچنین نشان داده‌ایم که پاسخ پرفشاری خون به مصرف مزمن HS در موش‌های حذفی Il{2}} به دلیل افزایش بیان eNOS در این موش‌ها کاهش می‌یابد (Singh et al., 2017). افزایش سطح TNF پلاسما در طول مصرف مزمن HS همچنین به حداقل رساندن چنین افزایشی در بازجذب سدیم لوله‌ای کمک می‌کند، به دلیل افزایش بار سدیم در موش‌های WT با وجود کاهش درکلیهسطح بافت TNF- . با این حال، در شرایط عدم تعادل اکسیداتیو به دلیل کمبود NO، چنین اثر محافظتی سطح TNF- پلاسما به خطر می‌افتد که منجر به افزایش احتباس سدیم می‌شود و در نتیجه باعث حساسیت به نمک و فشار خون بالا در موش‌های eNOSKO می‌شود. ما قبلاً نشان داده‌ایم که افزایش سطح TNF پلاسما باعث ایجاد پاسخ ناتریورتیک از طریق فعال‌سازی گیرنده لوله‌ای TNF نوع 1 (TNFR1) می‌شود (Castillo et al., 2012). داده‌های اولیه اخیر ما همچنین نشان می‌دهد که بیان پروتئین TNFR1 در طول مصرف مزمن HS در موش‌های WT افزایش می‌یابد اما در شرایط کمبود NO در موش‌های eNOSKO (Majid et al., 2018) یا در موش‌هایی که به طور مزمن با L-NAME درمان شده‌اند (Majid) کاهش می‌یابد. و همکاران، 2017). چنین کاهشی در فعالیت TNFR1 همچنین به حساسیت نمک و فشار خون بالا در طول مصرف HS در موش‌های eNOSKO کمک می‌کند. بنابراین، می توان تصور کرد که eNOS نقش مهمی در به حداقل رساندن تأثیر مصرف مزمن HS در موش های WT دارد.

مصرف مزمن HS از طریق "عملکرد گیرنده اسموری" یک مکانیسم ایمنی را القا می کند که سلول های سیستم فاگوسیت تک هسته ای (MPS) را در بافت های میلوئیدی در مغز استخوان، طحال و بافت پوست فعال می کند که سپس به گردش در می آید و به بسیاری از اندام ها از جمله اندام ها نفوذ می کند.کلیه(Machnik و همکاران، 2009). این سلول های MPS فعال شده، TNF- را آزاد می کنند که در گردش خون به صورت محلول آن (sTNF- ) ظاهر می شود. sTNF- توسط برش پروتئولیتیک از فرم متصل به غشاء (mTNF-) توسط آنزیم تبدیل کننده TNF (TACE)، یک شیداز که به عنوان دیستگرین و متالوپروتئاز 17 (ADAM17) نیز شناخته می شود، تشکیل می شود (Black et al. ، 1997؛ کریگلر و همکاران، 1988؛ ماس و همکاران، 1997). همراه با تولید TNF-، سلول های MPS فعال شده نیز NO فراوانی را عمدتاً از فعال سازی eNOS آزاد می کنند (Connelly et al., 2003). مشاهدات انتقادی پاسخ‌های متفاوت TNF- در مطالعه حاضر نشان می‌دهد که مصرف مزمن HS، از یک طرف، sTNF- را در پلاسما افزایش می‌دهد، اما mTNF- را در پلاسما کاهش می‌دهد.کلیهبافت، از سوی دیگر، به احتمال زیاد با افزایش فعالیت TACE (بلک و همکاران، 1997؛ کریگلر و همکاران، 1988؛ ماس و همکاران، 1997). اگرچه نشان داده شده است که فشار خون DOCA نمک با ناک داون TACE در مغز جلوگیری می شود (Xia et al., 2013)، تنظیم دقیق آن درکلیهدر طول مصرف مزمن HS به وضوح تعریف نشده است. برای رسیدگی به این بافت به تحقیقات بیشتری نیاز است. با این حال، می توان در اینجا اضافه کرد که TNF- پاسخ های بیولوژیکی خود را از طریق تعامل با دو گیرنده سطح سلولی، گیرنده TNF- نوع 1 (TNFR1) و نوع 2 (TNFR2) اعمال می کند که به طور متفاوتی بیان و تنظیم می شوند.کلیه(اللامکی و مایاداس، 2015). در حالی که mTNF- میل ترکیبی یکسانی برای هر دو گیرنده دارد، sTNF- در گردش دارای حداکثر میل ترکیبی بالا برای برهمکنش با TNFR1 بدون هیچ یا حداقل میل ترکیبی برای TNFR2 است (گرل و همکاران، 1998). درکلیهدر جایی که TNFR2 در التهاب کلیه نقش دارد (Singh et al., 2013)، فعال شدن TNFR1 با مهار انتقال Na به علاوه لوله و فعالیت ENaC باعث ایجاد یک اثر ناتریورتیک می شود (Castillo et al., 2012) که نشان دهنده نقش محافظتی برای TNF است{4 }} محور TNFR1 در طول مصرف مزمن HS. در چنین شرایطی، افزایش TNF- (sTNF-) پلاسما در پاسخ به مصرف مزمن HS مشاهده شده در مطالعه حاضر نقش مهم تری در حفظ هموستاز سدیم نسبت به تغییرات بافت کلیوی در سطوح TNF- (mTNF-) دارد. جالب است بدانید که مصرف مزمن HS باعث کاهش سطح پلاسمایی IL{10}} در مطالعه حاضر می‌شود (شکل 3a)، که نشان‌دهنده نقش متمایز این سیتوکین‌های پیش التهابی در کنترل هموستاز سدیم است. بنابراین، به نظر می‌رسد که در حالی که TNF- توسط سیستم فاگوسیت تک هسته‌ای فعال (MPS) از طریق مکانیسم تنظیم اسمزی در طی مصرف HS به گردش خون آزاد می‌شود، به نظر می‌رسد آزادسازی IL{14} بیشتر به عوامل دیگری مانند افزایش رنین بستگی دارد. سیستم آنژیوتانسین (Chamarthi و همکاران، 2011). در طی مصرف HS به تنهایی، سیستم رنین-آنژیوتانسین کاهش می یابد، و بنابراین، تأثیر آن بر تشکیل IL{18}} هم در غلظت پلاسما و هم در غلظت کلیوی این سیتوکین منعکس می شود. برای درک بیشتر نقش تنظیمی IL{19}} در عملکرد دفع کلیه، آزمایش‌های بیشتری لازم است.

در مطالعه حاضر، اشاره شده است که موش‌های eNOSKO که رژیم غذایی NS را دریافت کرده‌اند، در مقایسه با موش‌های WT، دارای درجه بالاتری از فیبروز توبولو بینابینی کلیوی هستند، اما اسکلروز گلومرولی ندارند. به نظر می‌رسد این تغییرات در موش‌های eNOSKO با رژیم HS به حداقل می‌رسد، که منعکس‌کننده اثرات کاهش سطح سیتوکین‌های پیش التهابی (TNF- و IL-6) در بافت کلیه است. چنین یافته‌های آسیب کلیوی کاهش یافته در موش‌های eNOSKO تغذیه‌شده با HS با یافته‌های مطالعه دیگری در موش‌های eNOSKO که قبلاً گزارش شده بود (Daumerie et al., 2010) که سطوح سیتوکین کلیوی را اندازه‌گیری نکرد، در تضاد است. با این حال، این تفاوت در اثرات آسیب کلیوی در آن مطالعه (Daumerie et al., 2010) در مقایسه با مطالعه حاضر می تواند مربوط به سن موش ها (آزمایش ها از 6 ماهگی در مقابل 2 ماهگی) و همچنین بالا بودن آن باشد. محتوای نمک (8 درصد در مقابل 4 درصد نمک طعام) در رژیم غذایی داده شده برای مدت طولانی (8 هفته در مقابل 2 هفته). نتایج مطالعه حاضر نشان می‌دهد که حداقل در کوتاه‌مدت، مصرف HS سطوح سیتوکین کلیه را سرکوب می‌کند که به به حداقل رساندن آسیب کلیوی در مراحل اولیه کمک می‌کند.

اهمیت فیزیولوژیکی یا پاتوفیزیولوژیکی این یافته ها مبنی بر اینکه مصرف HS برای حداقل 2 هفته باعث کاهش سطح کلیه سایتوکاین های پیش التهابی می شود، ممکن است برای بررسی بیشتر مهم باشد. اگرچه سیتوکین های پیش التهابی، به ویژه TNF- در ایجاد حساسیت به نمک و فشار خون بالا نقش دارند (مجید و همکاران، 2015؛ رودریگز-ایتوربه و همکاران، 2014؛ شیفرین، 2013)، تحقیقات قبلی در آزمایشگاه ما (شهید و همکاران) آل.، 2008) نشان می دهد که تجویز TNF پاسخ های دیورتیک و ناتریورتیک را القا می کند که نشان می دهد TNF- نقش ضد تنظیمی در میانجی فشار خون حساس به نمک دارد. بنابراین، کاهش سطح کلیوی سیتوکین های پیش التهابی مانند TNF- در پاسخ به دریافت HS به مدت 2 هفته ممکن است عملکرد بازجذب لوله ای را افزایش دهد که ممکن است احتباس سدیم را در بدن تسهیل کند. چنین احتباس سدیم ممکن است در شرایط استرس اکسیداتیو ناشی از کمبود NO چندین برابر افزایش یابد. حساسیت به نمک مشاهده شده در موش‌های eNOSKO می‌تواند منجر به افزایش احتباس سدیم در شرایط استرس اکسیداتیو شود، همانطور که قبلاً نشان دادیم (Kopkan et al., 2010). ممکن است مطالعات بیشتری برای درک رابطه مکانیکی جامع بین کاهش سطوح کلیوی سایتوکاین‌های پیش التهابی و القای فشار خون بالا در پاسخ به مصرف مزمن HS مورد نیاز باشد. با این حال، منطقی است که فرض کنیم چنین کاهشی در سطوح کلیوی TNF- و سایر سیتوکین های پیش التهابی، احتباس سدیم را تسهیل می کند که منجر به القای فشار خون بالا در پاسخ به دریافت رژیم غذایی HS می شود.

نتیجه

یافته‌های مطالعه حاضر نشان می‌دهد که مصرف HS، حداقل برای مدت {0}} هفته، به طور کلی سطوح کلیوی سایتوکین‌های التهابی را در شرایط دست نخورده و همچنین در شرایط کمبود eNOS سرکوب می‌کند. به طور کلی، این داده ها نشان می دهد که مصرف HS معمولاً منجر به کاهش سیتوکین های پرو و ​​ضد التهابی درکلیهچنین کاهشی در تولید سیتوکین، به ویژه TNF- در طول مصرف HS، ممکن است در شرایط کمبود eNOS که ممکن است بازجذب سدیم لوله‌ای کلیوی را افزایش داده و منجر به احتباس نمک شود، حیاتی باشد، و در نتیجه، توسعه متعاقب پرفشاری خون حساس به نمک را تسهیل می‌کند.