اثر انگشت HPLC و رابطه اثر طیف-ضد تومور برای تبعیض بین Mylabris Phalerata Pallas و Mylabris Cichorii Linnaeus

مخاطب: emily.li@wecistanche.com

جیان یونگ ژانگ، چی-هنگ چن، شیان پی 1، رونگ یان، کان-کان دوان، یون لیو4، شیائو-فی لی

1 دانشکده داروسازی، دانشگاه پزشکی زونی، زونی، چین،

2 آزمایشگاه کلیدی فارماکولوژی پایه وزارت آموزش و پرورش و آزمایشگاه مشترک تحقیقات بین المللی Ethnomedicine وزارت آموزش، دانشگاه پزشکی زونی، زونی، گوئیژو، چین.

3 دانشکده علوم پایه پزشکی، دانشگاه پزشکی زونی، زونی، چین، آزمایشگاه کلیدی مستقر در کالج استان گوئیژو برای پیشگیری و درمان تومور با داروهای متمایز، دانشگاه پزشکی زونی، زونی، چین.

برای دریافت اطلاعات بیشتر در مورد ضد تومور سیستانچ اینجا را کلیک کنید

نکات برجسته

این مطالعه یک روش HPLC کاربردی، معتبر و کارآمدتر برای تمایز دو گونه Mylabris ارائه می دهد. و انگشت نگاری و طیف HPLCاثرات ضد تومورادغام شدند و سه نشانگر دیفرانسیل مهم برای یک نشانگر جدید Mylabris پیدا شد.

خلاصه

هدف: ارزیابی تمایز بین دو گونه Mylabris بر اساس انگشت نگاری HPLC و طیف-اثر ضد تومورارتباط. روش کار: در این مطالعه، یک روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) ساده و کارآمد با آنالیز کمومتری و طیفاثر ضد توموررابطه برای تبعیض بین دو گونه از Mylabris ایجاد شد: Mylabris phalerata Pallas (MP) و Mylabris cichorii Linnaeus (MC). نتایج: در تجزیه و تحلیل اثر انگشت، 14 پیک مشخصه برای ارزیابی تفاوت بین MP و MC با استفاده از تجزیه و تحلیل تشابه و تشخیص الگو با استفاده از PCA و OPLS-DA انتخاب شد. کروماتوگرام HPLC نمونه های 10 منطقه چین تفاوت بین MP و MC را نشان داد و 7 نشانگر شیمیایی مشخصه یافت شد. در طیف -اثر ضد تومورتجزیه و تحلیل رابطه، 4 نشانگر فعالیت نقش حیاتی در کاهش IC50 ایفا کردند و ممکن است اجزای ضد توموری Mylabris با تجزیه و تحلیل رابطه خاکستری و تجزیه و تحلیل رگرسیون خطی چند متغیره باشند. تجزیه و تحلیل شیمی سنجی در ترکیب با نتایج رابطه طیف-اثر نشان داد که پیک های 2 (سیتوزین)، 4 (ناشناخته)، و 14 (ناشناخته) نشانگرهای تفاضلی مهمی برای تشخیص دو گونه Mylabris هستند.

نتیجه‌گیری: این روش برای تمایز MP و MC کاربردی، معتبر و کارآمدتر است و راهی جدید برای تسهیل کنترل کیفی داروهای حشرات ارائه می‌دهد.

کلمات کلیدی: HPLC، اثر انگشت، طیف-اثر ضد تومور، میلابریس ، تبعیض

زمینه

Mylabris که در چین بان مائو نامیده می شود، به عنوان طب سنتی چینی (TCM) برای درمان فورونکل، زخم های ریشه دار، توده شکمی استفاده می شود و یک ماده مهم است.ضد تومورعامل. علاوه بر این، به طور گسترده ای در اروپا به عنوان طب عامیانه استفاده می شود [1]. ماده فعال اصلی میلابریس کانتاریدین است که یک ماده موثر استضد تومورترکیب [2]. مطالعات فارماکولوژیک مدرن نشان داده است که Mylabris دارای فعالیت های متعددی است و به دلیل دوگانه بودن آن برای درمان تومورها بسیار ارزشمند است.ضد سرطانخواص و توانایی افزایش تعداد لکوسیت ها [3-4]. در حال حاضر، Mylabris به طور گسترده در برخی از نسخه های بالینی ضد سرطان TCM در چین، مانند تزریق Aidi و کپسول مائو Compound ban استفاده شده است.

طبق فارماکوپه جمهوری خلق چین (نسخه 2015)، Mylabris به عنوان بدن خشک شده Mylabris phalerata Pallas (MP) و Mylabris cichorii Linnaeus (MC) تعریف می شود که در ویژگی های گیاهی، پویایی جمعیت و اکولوژی آنها متفاوت است. 5-6]. Mylabris نیز یک داروی بسیار سمی است. از آنجایی که داروهای موجود در چین معمولاً مخلوطی از MP و MC هستند، شناسایی تفاوت‌های شیمیایی و فعالیت بین این دو گونه ضروری است.

از آنجایی که TCM حاوی ترکیبات شناخته شده و ناشناخته متعددی است، تجزیه و تحلیل مشخصات کمی از ترکیبات شیمیایی آنها یک چالش قابل توجه است. اثر انگشت کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) نقش مهمی در کنترل کیفیت (QC) TCM ایفا می‌کند زیرا ویژگی‌های نمایه کلی اکثر ترکیبات در یک سیستم پیچیده است. علاوه بر این، تجزیه و تحلیل انگشت نگاری TCM ها تکرارپذیری و پایداری خوبی برای احراز هویت و ارزیابی کیفیت گونه ها دارد و توسط سازمان بهداشت جهانی، سازمان غذا و داروی دولتی چین (SFDA) و آژانس ارزیابی داروهای اروپایی (EMEA) پذیرفته شده است. اخیراً، یک تجزیه و تحلیل شیمی سنجی ترکیبی از اثر انگشت HPLC برای QC و تمایز منابع مختلف پیچیده طبیعی ایجاد شده است [7]. با این حال، تفکیک تفاوت‌ها در TCMها بی‌اثر است، زیرا نمی‌تواند تفاوت‌های سازنده فعال را منعکس کند، که برای استفاده بالینی مهم‌تر است. تا کنون، طیف-ضد تومور اثررویکردهای ارتباطی برای شناسایی موفقیت آمیز اجزای زیست فعال TCM ها استفاده شده است [8]. انگشت نگاری HPLC همراه با آنالیز شیمی سنجی و رابطه اثر طیف-ضد تومور، تفاوت منابع متعدد TCM را بهتر روشن می کند.

اخیراً روش هایی برای تعیین محتوای کانتاریدین گزارش شده است که می توان از آنها برای تعیین کیفیت میلابریس استفاده کرد [9]. برخی از چاپ های انگشت کروماتوگرافی نیز برای QC [10-11] اعمال شد. تنها یک مطالعه از روشی استفاده کرد که شامل شستشوی گرادیان ترکیبات محلول در آب Mylabris بر اساس HPLC بود. در همین حال، تنها ده نمونه استفاده شد و هیچ نمونه MC [12]. تا آنجا که ما می دانیم، تفکیک MP و MC بر اساس ترکیب شیمیایی و فعالیت قبلا مورد مطالعه قرار نگرفته است.

این مطالعه با هدف ایجاد یک روش ساده و کارآمد برای تشخیص دو گونه Mylabris با استفاده از انگشت نگاری HPLC همراه با تجزیه و تحلیل کمومتری و طیف- انجام شد.ضد توموراثررابطه ای که مبنایی برای QC Mylabris فراهم می کند. این روش همچنین می تواند برای شناسایی نشانگر QC سایر TCM ها استفاده شود.

مواد و روش ها

در مجموع، 20 دسته از Mylabris phalerata Pallas (MP) و Mylabris cichorii Linnaeus (MC) از استان های مختلف چین جمع آوری شدند (جدول 1) و توسط پروفسور ما Xiao-Fei Li شناسایی شدند. نمونه های کوپن در آزمایشگاه های ما سپرده شد.

مرجع استاندارد سیتوزین، یوریدین، گوانوزین و آدنوزین از شرکت بیوتکنولوژی ChengduPush (چنگدو، چین) خریداری شد. استونیتریل و متانول درجه HPLC از Thermofisher Scientific (Fairlawn، NJ، ایالات متحده آمریکا) خریداری شد. در طول مطالعه از آب خالص واتسون استفاده شد. سایر مواد شیمیایی و حلال ها دارای درجه تحلیلی بودند و از معرف علاءالدین (شانگهای، چین)، معرف چنگدو کلونگ (چنگدو، چین) و معرف شیمیایی سینوفارم (پکن، چین) به دست آمدند.

دستگاه و شرایط کروماتوگرافی

تجزیه و تحلیل HPLC با استفاده از یک سیستم HPLC 126{21}} Infinity در 30 درجه بر روی Phenomenex Synergy Polar-RP80 (4.6 میلی‌متر × 250 میلی‌متر، 5 میکرومتر) برای انگشت نگاری انجام شد. شستشوی گرادیان خطی با شوینده های A (آب / اسید استیک یخبندان، 100:1، حجم / حجم) و B (متانول) برای جداسازی استفاده شد. برنامه گرادیان به شرح زیر توسعه داده شد: 0-1 دقیقه، 3.{12}}.6 درصد B; 1-9 دقیقه، 4.{16}}.8 درصد B; 9-25 دقیقه، 6.{20}}.0 درصد B; 25-30 دقیقه، 51.{24}} درصد . سرعت جریان فاز متحرک 1.0 میلی لیتر در دقیقه بود. کروماتوگرام در طول موج 254 نانومتر بررسی شد. پس از یک دوره تعادل 15 دقیقه، 10 میکرولیتر نمونه برای تزریق استفاده شد.

آماده سازی نمونه

نمونه های خشک شده به صورت پودر خرد شده و 2.5 گرم از هر نمونه پودر شده دو بار با 5{14}} میلی لیتر اتانول 75 درصد به مدت 1.5 ساعت در هر بار رفلاکس استخراج شد. نمونه استخراج شده مخلوط و تحت فشار کاهش یافته تا 20 میلی لیتر تغلیظ شد. سپس مخلوط با 80 میلی لیتر آب به مدت 24 ساعت در دمای 4 درجه ته نشین شد. سپس عصاره در 3000 گرم در دقیقه به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ شد تا مایع رویی جدا شود. مایع رویی تحت فشار کاهش یافته تا 25 میلی لیتر غلیظ شد. در نهایت، مایع رویی قبل از تجزیه و تحلیل HPLC از طریق یک فیلم 0.22 میکرومتر میلی‌پور فیلتر شد.

اعتبار سنجی روش

روش HPLC برای دقت، تکرارپذیری و پایداری ({0}} ساعت، 2 ساعت، 4 ساعت، 8 ساعت، 12 ساعت، 24 ساعت) تأیید شد. اعتبار بر اساس زمان ماند (RT) و منطقه اوج (PA) برآورد شد. در نهایت، اثر انگشت شیمیایی 20 دسته از Mylabris برای شناسایی ویژگی‌های شیمیایی یکپارچه ترکیبات متعدد ایجاد شد. برخی از تکنیک های کمومتری روی اثر انگشت شیمیایی برای تجزیه و تحلیل معرفی شدند.

تجزیه و تحلیل تشخیص الگو

تفاوت بین دو گونه از نواحی پیک از نظر معناداری آماری با استفاده از آزمون t-paired Student ارزیابی شد. مقدار p کمتر از 0.05 از نظر آماری معنی دار در نظر گرفته شد. به عنوان یک روش کلاسیک بدون نظارت، تجزیه و تحلیل مؤلفه اصلی (PCA) به طور گسترده برای تجزیه و تحلیل داده های آماری استفاده می شود. PCA به جای استفاده از متغیرهای زیاد، تعداد کمی از رایانه های شخصی را بدون از دست دادن اطلاعات زیادی می گیرد و سپس نمودارهای امتیاز برای جداسازی رایگان مشاهدات به تصویر کشیده می شوند. در این مطالعه، PCA بر روی نواحی پیک نرمال شده هر جزء در اثر انگشت HPLC با استفاده از نرم افزار SIMCA-P plus 14.0 (Umetrics، Umea، سوئد) برای یافتن تمایز بین دو گونه Mylabris انجام شد.

برای تبعیض ارجح تر بین دو گونه Mylabris، یک روش نظارت شده از تجزیه و تحلیل تفکیک حداقل مربعات جزئی متعامد (OPLS-DA) برای تجزیه و تحلیل تفاوت‌ها در نواحی اوج نرمال شده هر جزء در اثر انگشت HPLC استفاده شد. مقدار VIP یک مجموع وزنی از مربع های اوزان OPLS است که سهم نسبی هر متغیر X را در مدل منعکس می کند. متغیرهای با VIP > 1، همراه با S-plot برای جداسازی نمونه‌ها در نمودارهای امتیازی تولید شده از تجزیه و تحلیل OPLS-DA تأثیرگذار در نظر گرفته شدند. سپس، نشانگرهای شیمیایی مشخصه برای تمایز به دست آمد.

تجزیه و تحلیل رابطه اثر طیف-ضد توموری

برای کشفضد تومورمنطقه اوج اثر برای نمونه‌های Mylabris با داده‌های اثر انگشت ادغام شده و تفاوت‌های بین دو گونه، همبستگی بین پیک اثر انگشت وضد-توموراثرات مورد مطالعه قرار گرفت. دو روش ترکیبی از تحلیل رابطه خاکستری و تحلیل رگرسیون خطی چند متغیره (MLRA) با استفاده از SPSS19.{1}} (IBM، ایالات متحده آمریکا) و GM6.{3}} نرم (موسسه تئوری سیستم‌های خاکستری، NUAA، چین) استفاده شد. راضد-تومورآزمایش با روش‌های منتشر شده ما [12] انجام شد، سلول‌های رده سلولی HepG2 سرطان کبد انسان در محیط RPMI1640 همراه با 10 درصد سرم جنین گاوی نگهداری شدند. سلول ها در اتمسفر مرطوب حاوی 5 درصد CO2 در دمای 37 درجه سانتیگراد رشد کردند. برای ارزیابی تکثیر از روش SRB استفاده شدضد-تومورفعالیت هاسپس IC50 سلول های HepG2 محاسبه شد و در نهایت از IC50 و نواحی پیک نرمال شده برای آنالیز کمومتری استفاده شد. سپس نشانگرهای فعالیت مشخصه میلابریس به دست آمد.

نتایج و بحث

بهینه سازی شرایط عصاره

برای استخراج کافی ترکیبات املاح آب از Mylabris، سیستم استخراج بهینه شد. اولتراسونیک و رفلاکس نشان داد که این ترکیبات را می توان با رفلاکس به طور بهینه استخراج کرد.

بهینه سازی روش HPLC

برای به دست آوردن حداکثر پیک های کروماتوگرافی برای توصیف ویژگی کلی گیاه، ترکیب ستون کروماتوگرافی، فاز متحرک و طول موج های تشخیص (200، 254، 265 و 278 نانومتر) مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد که ستون Phenimenex Synergy Polar-RP80، آب (حاوی 1 درصد اسید استیک گلاسیال) و متانول و 254 نانومتر بهترین شرایط برای تجزیه و تحلیل HPLC Mylabris بودند (شکل 1)، ساختار 4 ماده استاندارد در شکل 2 نشان داده شده است. .

اعتبار سنجی روش

در این مطالعه 14 قله به خوبی از هم جدا شده و به عنوان «قله مشترک» استفاده شد. دقت، تکرارپذیری و پایداری بر اساس زمان ماند (RT) و منطقه پیک (PA) بود. مقادیر RSD RT و PA برای دقت (n=6) به ترتیب از 0.2 و 4 درصد تجاوز نکرد. مقادیر RSD RA و PA برای تکرارپذیری (n=6) به ترتیب زیر 0.2 و 4 درصد و مقادیر RSD برای پایداری (0-24 ساعت) کمتر از 0 بود. {10}}.4 و 5 درصد به ترتیب، که نشان می‌دهد نمونه‌ها در 24 ساعت پایدار بودند. این نتایج نشان داد که کیفیت نمونه های مورد مطالعه و روش HPLC پایدار و به خوبی کنترل شده است.

ارزیابی تشابه اثر انگشت

The fingerprint similarity analysis was used to evaluate the similarity of HPLC peaks. The similarities of MP and MC were calculated by the reference HPLC fingerprint, respectively. As shown in Table 1, except for two MP samples (from Guizhou2 and Guizhou5) with lower similarities (0.880 and 0.920, respectively), other samples of MP were >0.930. The similarities of MC samples were >{0}}.921 به جز نمونه‌های MC (از Guizhou2 و Guizhou4) که شباهت‌های آنها به ترتیب 0.888 و 0.887 بود. این داده ها نشان داد که کیفیت Mylabris در یک گونه پایدار است. با این حال، شباهت تنها سه نمونه MP در مقایسه با اثر انگشت مرجع HPLC > 0.930 بود. و شباهت تنها دو نمونه MC در مقایسه با اثر انگشت HPLC مرجع > 0.921 بود. این نتایج نشان داد که دو گونه Mylabris در برخی از مناطق قله‌ای دارای تنوع قابل‌توجهی هستند.

تبعیض MP و MC با تجزیه و تحلیل تشخیص الگو

For global analysis of the difference, PCA was used to find the quality variation of the samples from the two species of Mylabris. Figure 3 shows that the two-dimensional PCA model was constructed by the first two PCs, which included approximately 61.8% of the original data. The score plot showed that the MP and MC samples could not be separated by PCA. To understand the differences between MP and MC, an OPLS-DA model was established. As shown in Figure 4, the Mylabris samples could be classified into two groups with R2X=0.502, R2Y=0.492, and Q2=0.0769 as compared to the PCA model. These results showed that the OPLS-DA model was more suitable than the PCA model for distinct separation of the test samples based on their different components. From the S-plot of OPLS-DA, peak markers including peaks 1, 2, 4, 7, 9, 12, and 14 between MP and MC could be found (Figure 5). Based on VIP>1، قله های 1، 2، 4، 7، 9، 12 و 14 ممکن است مهم ترین متغیرها در تمایز بین دو گونه باشند (شکل 6). گروه پیک (1، 2، 4، 7، 9، 12 و 14) ممکن است نقشی حیاتی در تمایز بین MP و MC به عنوان نشانگرهای شیمیایی مشخص داشته باشد.

رابطه طیف-اثر با تحلیل رابطه ای خاکستری

To further evaluate the relationship between the variations of normalized peak area and IC50, grey relational analysis (GRA) was performed. The influence rank by normalized peak area was P13>P14>P3>P2>P12>P4>P9>P1>P10>P7>P6>P8>P5> P11 as shown in Table 2. The results indicated that the top-6 peak including peaks 13, 14, 12, 2, 3, and 4 were the main influencing factors for the antitumor effect based on the standard of Relative Grey correlative degree (RGCE) >0.75.

رابطه طیف اثر توسط MLRA

مدل MLRA رایج ترین روش مدل سازی برای استنتاج پیچیدگی رابطه بین دو یا چند متغیر و پاسخی است که با فرمول زیر ساخته شده است.

جایی که Y مقدار تخمینی است و نشان دهنده پاسخ است. Xn یک متغیر مستقل، b{{{0}} وقفه، و bn ضریب رگرسیون برای Xn است. در این مطالعه، MLRA برای ایجاد رابطه اثرانگشت-اثرانگشت بین مقادیر پیک نواحی در اثر انگشت HPLC و IC5{50}} آنتی-HepG2 و سپس یافتن اجزای احتمالی ضد تومور استفاده شد. تلفیق داده ها توسط یک مدل رایج MLRA پیدا شد که برای کشف همبستگی بین Y (IC50) و X (PA) نامناسب است. یک مدل PCA MLRA برای مطالعه رابطه اثر انگشت-اثر استفاده شد و شش رایانه اول با نرخ مشارکت واریانس تجمعی: 91.068 درصد برای تجزیه و تحلیل انتخاب شدند. در نهایت، معادله زیر با توجه به خروجی SPSS و رایانه های شخصی ایجاد شد: IC{9}}.115864 plus （ 1.87268PA1- 699.722PA2 plus 25.7138PA3 - 24.1528PA4 plus 7.22878PA{{{ 23}}.2114PA6 به علاوه 2.95283PA7- 15.5305PA8 به علاوه 13.0297PA9 به علاوه 22.5683PA10 - 10.3462PA11 به علاوه 123.762PA12 به علاوه 31.0428PA به اضافه 31.0428PA7- 15.{4}4} (R 0.682 بود، P <>

تجزیه و تحلیل ادغام دو گونه Mylabris

این آزمایش نشان داد که از اثر انگشت HPLC می توان برای انعکاس ویژگی های شیمیایی Mylabris استفاده کرد. الگوریتم‌های شباهت، PCA و OPLS-DA برای یافتن تفاوت بین MC و MP استفاده شدند. گروه پیک (1، 2، 4، 7، 9، 12 و 14) به عنوان نشانگرهای شیمیایی مشخصه تعریف شد.

علاوه بر این، هر دو GRA و MLRA روش های رضایت بخشی برای تبعیض بیشتر هستند. ادغام نتایج تجزیه و تحلیل GRA و MLRA، پیک های 2، 4 و 14 به عنوان نشانگرهای فعالیت Mylabris باید مسئول اثر ضد توموری باشد، که ممکن است اساس ماده فارماکودینامیک Mylabris باشد.

نشانگرهای تفاضلی مهم برای پیک با ویژگی‌های نشانگر شیمیایی و فعالیت مشخص شدند. بنابراین، بین MC و MP در اثر انگشت HPLC پس از تجزیه و تحلیل رابطه طیف-اثر، پیک‌های 2 (سیتوزین)، 4 (ناشناخته)، و 14 (ناشناخته) نشانگرهای افتراقی مهمی برای تفاوت بین MP و MC بودند که در شکل 7 نشان داده شده است.

نتیجه

در نتیجه، در تحقیق حاضر، یک روش HPLC برای انگشت نگاری شیمیایی MP و MC پیشنهاد شد. با ترکیب انگشت نگاری HPLC، PCA و تجزیه و تحلیل رابطه اثر طیفی مانند GAS و MLRA، خواص شیمیایی و دارویی دو گونه نزدیک از Mylabris قابل تشخیص است. این نشان داد که ترکیبات از قله های 2 (سیتوزین)، 4 (ناشناخته)، و 14 (ناشناخته) به عنوان نشانگرهای مهم، نقش غالب در تمایز بین MP و MC ایفا می کنند. ساختار قله های 4 و 14 باید با فناوری دیگری شناسایی شود. روش انگشت نگاری HPLC همراه با تجزیه و تحلیل آماری، شیمی سنجی و تجزیه و تحلیل رابطه اثر طیفی در کشف اجزای نشانگر یا برای ارتقای QC کارآمد نشان داده شد.داروهای گیاهی.

منابع

1 وانگ جی اس. کاربردهای پزشکی Mylabris در چین باستان و مطالعات اخیر J Ethnopharmacol 1989، 26(2): 147-162.

2. Lin YS، Lia YH، Peng ZP، و همکاران. تعیین محتوای کانتاریدین و اثر مهاری آن بر سلول های HepG2 هپاتوم انسانی Biomed Res-India 2016، 27(2): 533-536.

3. Xu MZ، Lee WS، Kim MJ، و همکاران. Acyl-CoA: فعالیت های بازدارنده کلسترول آسیل ترانسفراز آمیدهای اسید چرب جدا شده از Mylabris phalerate Pallas. Bioorg Med Chem Lett 2004, 14(16): 4277-4280.

4. دی RM، هاربورد ام، فوربس A، و همکاران. تاول های کانتاریدین: تکنیکی برای بررسی قاچاق لکوسیت و تولید سیتوکین در محل های التهاب در انسان. J Immunol Methods 2001، 257 (1-2): 213-220.

5. Mo RY، Sun NX، Peng R. مطالعه بر روی غذای ترجیحی Mylabris phalerata بالغ در جمعیت های جغرافیایی مختلف. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 2014، 39(22): 4293-4296.

6. Wang XM، Cheng XS، Li XF. ویژگی های بیولوژیکی ملوئیدها و تغذیه مصنوعی آن. Guizhou Agricultural Sciences (Chin) 2007، 35(2): 140-142.

7. Yang Y, Zhang J, Jin H, et al. تجزیه و تحلیل کمی در ترکیب با فناوری اثر انگشت و تجزیه و تحلیل کمومتری برای ارزیابی شش گونه از پاریس وحشی با استفاده از UHPLC-UV-MS اعمال شد. J Anal Methods Chem 2016: e3182796.

8. Liu Y، Liu Z، Sun G، و همکاران. پایش و ارزیابی قوام کیفی قرص‌های ترکیبی بیسموت آلومینات با روش اثر انگشت نسبت کمی ساده همراه با تعیین همزمان پنج ترکیب و مرتبط با فعالیت‌های آنتی‌اکسیدانی. پلوس وان 2015; 10: e0118223.

9. مهدی نیا، آسیابی م، جباری ع، و همکاران. تجزیه و تحلیل کانتاریدین در سوسک های تاول کاذب (Coleoptera: Oedemeridae) با میکرواستخراج فاز جامد و کروماتوگرافی گازی - طیف سنجی جرمی. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2011, 879(27): 2897-2901.

10. Li XM، Xiao JS. مطالعه بر روی اثر انگشت GC Mylabris phalerata. مجله داروسازی بیمارستانی چین (چین) 2010; 30(2): 116-119.

11. Luo CX، Sun، GX و Shi XF. اثر انگشت دیجیتالی Mylabris توسط HPCE. داروخانه مرکزی جنوب (چین) 2008; 6(2): 230-235.

12. Sun GX، Luo CX، و Wang، Z. مطالعه بر روی اثر انگشت HPLC دیجیتالی Mylabris. مجله چینی تجزیه و تحلیل دارویی (چین) 2008؛ 28 (7): 1031-1036.

13. Guo K, Li XF, Yan R, et al. فعالیت سلول‌های HepG 2 ضد سرطان کبد انسان کانتاریدین مشتق شده از استان گوئیژو و مناطق اطراف آن. مجله پزشکی و سلامت مدرن (چین) 2016; 32(5): 648-650.