اسیدهای چرب امگا{0}} SIRT1/3 را افزایش می‌دهند، PGC را فعال می‌کنند-1 از طریق داستیله کردن، و تولید Nrf1 را در مدل نفرکتومی 5/6 موش صحرایی تحریک می‌کنند.

edmund.chen@wecistanche.com

مقدمه

کلیه هادر تنظیم عملکردهای مختلف از جمله مسیرهای متابولیک مختلف، تعادل آب و الکترولیت، کنترل فشار خون و تولید چندین هورمون نقش دارند. از آنجایی که این عملکردها انرژی زیادی مصرف می کنند،کلیه هاسرشار از میتوکندری هستند [1]. میتوکندری ها می توانند از طریق تنظیم اهداف مکانیکی راپامایسین (mTOR) و پروتئین کیناز فعال شده با AMP (AMPK) با مسیرهای حسگر مواد مغذی برای حفظ جمعیت میتوکندری سالم، با شرایط متابولیک متفاوت سازگار شوند [2]. در میان مطالعات انجام شده بر روی میتوکندری، تا به امروز، تنها چند مطالعه در مورد بیوژنز میتوکندری وجود دارد. اکثر مطالعات مربوط به بیوژنز میتوکندری بر اساس غیرکلیهبافت [3،4]، و مطالعات بر رویکلیه هاعمدتا مربوط به حاد هستندآسیب کلیهمدل‌های حیوانی (AKI)، سلول‌های لوله‌ای پروگزیمال و نفروپاتی دیابتی [5-7]. اگرچه بیوژنز میتوکندری ممکن است با پاتوژنز اختلال عملکرد میتوکندری در افراد مزمن غیر دیابتی مرتبط باشد.بیماری کلیوی (CKD)، تحقیقات در مورد این موضوع نیز بسیار محدود است. CKD و بیوژنز میتوکندریایی با بیماری قلبی عروقی مرتبط هستند [8،9]. بهبود بیوژنز میتوکندری ممکن است برای محافظت از قلب در CKD مفید باشد. مطالعه ای که نشان می دهد اسیدهای چرب امگا{2}} (FAs) بیوژنز میتوکندری را تسهیل می کنند با استفاده از غیرکلیهبافت ها [3،10]. یک مطالعه اخیر نقش امیدوارکننده امگا{2}} را در بیوژنز میتوکندری در مدل های حیوانی مبتلا به بیماری های قلبی عروقی و عصبی نشان داد [11]. بنابراین، در مطالعه حاضر، ما با هدف بررسی بیوژنز میتوکندری درکلیه هااز 5/6 نفرکتومی (Nx) موش صحرایی. علاوه بر این، ما با استفاده از این مدل، تأثیر اسیدهای چرب امگا-3 را بر بیوژنز میتوکندری ارزیابی کردیم.

کلید واژه ها:فاکتور تنفسی هسته ای 1; فاکتور هسته ای اریتروئید 2-مربوط به فاکتور 2; sirtuin 1; sirtuin 3; اسید چرب امگا-3; کلیه، کلیه

سیستانچ بیماری کلیوی/کلیوی را بهبود می بخشد

2. نتایج

2.1. تغییرات در عملکرد کلیه و یافته های بافت شناسی

در مقایسه با گروه کنترل، سطح نیتروژن اوره خون (BUN) در گروه‌های Nx و Nx تحت درمان با امگا{{{{{0}}} گروه‌های FA به طور قابل‌توجهی افزایش یافت (گروه کنترل 1.5 ± 17.7، گروه Nx 77.7 ✟ 28.4 و tit. با امگا-3 گروه FA 63.9 土 17.{18}} mg/dL، p = 0.{{2{23}}}}07). اگرچه تفاوت معنی‌داری بین Nx و Nx تحت درمان با گروه‌های FA امگا{16} وجود نداشت، سطوح BUN در گروه Nx تحت درمان با امگا-3 از نظر عددی کمتر بود. سطح کراتینین سرم (sCr) در بین سه گروه مشابه BUN (گروه کنترل، 0) بود. 0.3 mg/dL؛ y=0.008). در مقایسه با گروه کنترل، اتساع شدید لوله و آتروفی با استفاده از رنگ آمیزی PAS در گروه Nx مشاهده شد (شکل تکمیلی S1). علاوه بر این، نتایج نشان داد که گروه Nx تحت درمان با امگا{33}} FA تغییرات توبولو بینابینی کمتری نسبت به گروه Nx نشان داد. راعملکرد کلیهو تغییرات بافتی در سه گروه قبلاً در مطالعه قبلی گزارش شده است [12].

22 تغییر در عوامل مرتبط با بیوژنز میتوکندری

2.2.1. بیان Nrf1 وNrf2.در مقایسه با گروه شاهد، گروه Nx سطح بیان فاکتور 1 تنفسی هسته ای (Nefl) و فاکتور 2 مربوط به اریتروئید 2-(Nrf2) را به طور قابل توجهی کاهش داد. با این حال، در گروه Nx تحت درمان با امگا{4}}، سطح بیان Nrf1 و Nrf2 به طور قابل توجهی نسبت به گروه Nx افزایش یافت، اما به سطح گروه کنترل نرسید (Oigure P، شکل مکمل St) . این نتایج همچنین Cn Nrf1 mRNA تجزیه و تحلیل کمی PCR زمان واقعی پیدا شد (شکل S3 تکمیلی).

2.2.3. بیان عوامل مرتبط با فعالیت PGC{3}}: pAMPK، SIRT1/3.در مقایسه با گروه کنترل، Nx و Nx تحت درمان با گروه‌های امگا{0}} سطوح پایین‌تری از AMPK فسفریله (نسبت کدو تنبل به AMPK) را نشان دادند (شکل 3A). علاوه بر این، گروه Nx سطح قابل توجهی پایین‌تری از بیان سیرتوئین 1 (SIRT1) را در مقایسه با گروه کنترل نشان داد (شکل 3B، شکل تکمیلی S6). با این حال، به دنبال افزودن امگا{6} FA، بیان SIRT1 نسبتاً افزایش یافت، اما این تفاوت از نظر آماری معنی‌دار نبود. این نتایج در آنالیز کمی SIRT1 mRNA PCR در زمان واقعی یافت شد (شکل S7 تکمیلی). برعکس، بیان سیرتوئین 3 (SIRT3) در گروه Nx به طور قابل توجهی در مقایسه با گروه کنترل کاهش یافت، که به طور قابل توجهی در گروه Nx تحت درمان با امگا{13}} گروه FA نجات یافت (شکل 3C).

2.2.4. بیان Keap1، mTOR، FoxO1 و FoxO3، در مقایسه با گروه کنترل، بیان پروتئین 1 مرتبط با EC H شبه کلچ (Keap1) و پروتئین های جعبه فورکهد O1 و O3 (FoxO1/3) به طور قابل توجهی در گروه Nx افزایش یافت. . در گروه Nx تحت درمان با امگا{14}} FA، سطح بیان Keap1 و FoxO1/3 به طور قابل توجهی در مقایسه با گروه Nx کاهش یافت (شکل 4C، E، F). در مقایسه با گروه کنترل، بیان mTOR در گروه Nx به طور قابل توجهی کاهش یافت. با این حال، در گروه Nx تحت درمان با امگا{19}} FA، بیان mTOR نجات یافت اما به سطح گروه کنترل نرسید (شکل 4B)

2.2.5. محتوای DNA میتوکندری (mtDNA)، کاهش قابل توجهی از mtDNA در گروه Nx نسبت به گروه کنترل مشاهده شد. با این حال، مقدار کاهش mtDNA به طور قابل توجهی در گروه امگا{4} Nx تیمار شده با Nx بازیابی شد (شکل تکمیلی S9).

3. بحث

PGC{0}} که از طریق فسفوریلاسیون و استیل زدایی فعال می شود، تنظیم کننده اصلی بیوژنز و تولید انرژی میتوکندری است. ما کاهش در بیان و استیل زدایی PGC-1 در مدل CKD پیدا کردیم. قابل توجه است که کاهش استیلاسیون PGC-1 مکانیسم اصلی کمک به بیوژنز ناکارآمد میتوکندری و کاهش تولید انرژی در CKD است. AMPK PGC{3}} را از طریق فسفریله کردن باقیمانده‌های ترئونین یا سرین خود فعال می‌کند [13،14]. هنگامی که نسبت AMP/ATP بالا باشد، AMPK نیز با فسفوریلاسیون فعال می شود. با این حال، AMPK در CKD به دلیل اختلال در حس سطوح بالای AMP غیرفعال می شود [15،16]. مشابه با مطالعات قبلی، ما نشان دادیم که فسفوریلاسیون AMPK به طور قابل توجهی کاهش یافته استکلیهبافت از گروه Nx اگرچه به نظر می رسد که pPGC-1/PGC-1 تا حدی در گروه Nx افزایش یافته است، اما بعید است که سطح فسفوریلاسیون PGC-1 به دلیل کاهش PGC افزایش یابد{{3 }} اصطلاح. علاوه بر این، Nx تیمار شده با امگا-3 گروه FA نیز نتایج مشابهی با گروه Nx نشان داد، که نشان می‌دهد تجویز امگا{5}} FA بر فسفوریلاسیون AMPK و PGC تأثیری ندارد{{6} } . استیل‌زدایی می‌تواند در کل دنباله PGC اتفاق بیفتد، و SIRT1 و 3 نقش عمده‌ای در فرآیند استیل‌زدایی دارند [13،14]. پس از تجویز امگا{12}} FA، سطح بیان PGC-1، SIRT1 و 3 افزایش یافت که منجر به نجات PGC{16}} دی استیله به همان سطح گروه کنترل عادی شد. . نجات در سطح بیان Nrf1 و Nrf2، که در Nx تیمار شده با گروه FA نشان داده شده است، مستقیماً با افزایش سطح بیان SIRT1 و 3 مرتبط است که منجر به استیل زدایی PGC می‌شود{19} {22}} .

CISTANCHE عملکرد کلیه/کلیه را بهبود می بخشد

مطالعات اخیر در مورد میتوکندری دربیماری کلیوینشان داده اند که افزایش سطح بیان PGC- 1 یا SIRT از طریق مداخلات ژنتیکی یا دارویی بهبود یافته است.آسیب کلیهدر مدل های حیوانی AKI [5-7،17،18]. مکانیسم اساسی شامل اثر بهبود اکسیداسیون FA یا پاسخ آنتی اکسیدانی است. یک مطالعه قبلی گزارش داد که تجویز امگا{4} FA باعث بهبود بتا اکسیداسیون FA میتوکندری شده و اثرات آنتی اکسیدانی را در مدل موش 5/6 Nx نشان داد [19]. همچنین گزارش‌هایی وجود دارد که نشان می‌دهد امگا{9}} بیان PGC-1، Nrf1، و SIRT1 را در سلول‌های ماهیچه‌ای، ماکروفاژها و سلول‌های عصبی افزایش می‌دهد [3،10،11]. از آنجایی که اثرات اسیدهای چرب امگا{16} بر میتوکندری در مدل CKD هنوز گزارش نشده است، ما نشان دادیم که امگا{17}} در بازیابی مولکول‌های مرتبط با بیوژنز میتوکندری و mtDNA با استفاده از مدل CKD در این مدل مؤثر است. مطالعه.

هر دو mTOR و AMPK در بیوژنز میتوکندری نقش دارند، اما نقش آنها بسته به وضعیت تغذیه متفاوت است. mTOR، هدف کمپلکس راپامایسین 1 (mTOC1)، می‌تواند از طریق محرک‌های انرژی مانند اسید آمینه یا گلوکز فعال شود و می‌تواند مسیرهایی را ایجاد کند که منجر به فرآیندهای آنابولیک و بیوژنز میتوکندری می‌شود. برعکس، AMPK را می توان از طریق هیپوکسی و کمبودهای تغذیه ای فعال کرد، که منجر به فعال شدن فرآیند کاتابولیک و بیوژنز میتوکندری می شود و مصرف انرژی را از طریق mTOC1 مهار می کند [2]. در این مطالعه، ما نه تنها کاهش pAMPK/AMPK، بلکه کاهش mTOR را در مدل CKD نشان دادیم. علاوه بر این، تجویز امگا{4}} FA منجر به بهبودی تقریباً بیان mTOR شد، اما کاهش pAMPK/AMPK بازیابی نشد. بنابراین، اسیدهای چرب امگا{5}} ممکن است کاهش بیوژنز میتوکندری را با افزایش بیان mTOR درکلیه هامدل حیوانی CKD با این حال، برای روشن شدن اینکه آیا mTOR در بیماران CKD کاهش می‌یابد و اینکه چگونه افزایش بیان mTOR از طریق درمان امگا{0}} بر سلامت میتوکندری و پیشرفت CKD تأثیر می‌گذارد، باید مطالعات بیشتری انجام شود.

FoxO1 و 3 به پروموتر PGC{2}} متصل می شوند و رونویسی آن را افزایش می دهند [20،21]. اما در این مطالعه مشخص شد که FoxO1 و 3 در گروه Nx افزایش و در گروه شاهد و Nx تحت درمان با امگا{7}} کاهش یافت. بنابراین، فرض بر این است که بیان FoxO1 و 3 برای پاسخ جبرانی کاهش PGC{10}} در CKD یا افزایش PGC-1 از طریق تجویز امگا-3 FA مرتبط است. Nrf2 نقش مهمی در هموستاز ردوکس سلولی و بیوژنز میتوکندری ایفا می کند. سه سیستم لیگاز یوبیکوئیتین مرتبط با تخریب Nrf2 وجود دارد (Keap1، پروتئین حاوی تکرارهای ترانسدوسین، و سینوویال یوبیکوئیتین لیگاز E3) [22]. در این مطالعه، کاهش معنی‌داری در Nrf2 و افزایش معنی‌دار Keap1 در گروه Nx نسبت به گروه کنترل نشان دادیم. اما در گروه Nx تحت درمان با امگا{22}}، بیان Keap1 مشاهده شد. کاهش و Nrf2 افزایش یافت. نتایج نشان می‌دهد که بهبود اثر آنتی‌اکسیدانی تجویز امگا{25}} FA در مدل موش CKD ممکن است با کاهش بیان Keap1 و تخریب Nrf2 مرتبط باشد، که ممکن است بیوژنز میتوکندری را افزایش دهد. بر اساس نتایج به‌دست‌آمده در این مطالعه، تحقیقات بیشتری برای روشن کردن رابطه علی بین FoxO1/3 و Nrf2 در محیط CKD و تأثیر تجویز امگا{31}} مورد نیاز است.

سیستانچ عفونت کلیه/کلیه را بهبود می بخشد

وزن مولکولی Nrf2 در منطقه 68 کیلو دالتون (kDa) در این مطالعه و سایر مطالعات اخیر یافت شد [23،24]. با این حال، مطالعات قبلی با شواهد نشان داد که وزن مولکولی مربوط به بیولوژیکی Nrf2 95-110 کیلو دالتون است [25،26]. ما همچنین نوارهایی را پیدا کردیم که مشکوک به Nrf2 مربوط به بیولوژیکی بودند (شکل تکمیلی S8). مطالعات بیشتر برای یافتن وزن مولکولی Nrf2 مهم بیولوژیکی ضروری است. در مطالعات قبلی، تغییرات در میتوکندری در روز 28 پس از 5/6 Nx گزارش شده است که نشان دهنده کاهش بیان ژن یا پروتئین مرتبط با اکسیداسیون بتا، فسفوریلاسیون اکسیداتیو و پروتئین ساختاری غشای داخلی است، اما هیچ نتیجه ای وجود نداشت. مربوط به PGC{16}} عبارت [27,28]. در این مطالعه، ما تایید کردیم که مولکول‌های مرتبط با بیوژنز میتوکندری و mtDNA منعکس‌کننده بیوژنز میتوکندری در مرحله مزمن تعدیل شدند، زیرا تغییرات در روز 45 پس از 5/6 Nx در موش‌ها مشاهده شد. علیرغم بهبودهای بافتی و بیولوژیکی، درمان با امگا{23}} FA منجر به بهبود عملکردی نشد.کلیه هادر مقایسه با مدل Nx بنابراین، تحقیقات بیشتری برای تعیین اینکه آیا اسیدهای چرب امگا-3 در بازیابی مؤثر هستند یا نه، مورد نیاز استعملکرد کلیهبا القای اثراتی که ممکن است عملکرد میتوکندری را بهبود بخشد. محدودیت های متعددی در این مطالعه وجود دارد. اول، ما فعالیت سیترات سنتاز و تشکیل سوپراکسید را در زنجیره تنفسی میتوکندری ارزیابی نکردیم. دوم، ما آزمایش نکردیم که اجزای FA Omacor عمدتاً بر روی مولکول‌های مربوط به بیوژنز میتوکندریایی تأثیر می‌گذارند. سوم، ما مکانیسم واضحی برای بهبود مولکول‌های مربوط به بیوژنز میتوکندری نشان ندادیم. ما فقط پیشنهاد می کنیم که اثر ضد التهابی، کاهش استرس اکسیداتیو و خود اسید چرب امگا{3}} به عنوان ترکیبات متابولیکی، ممکن است با مکانیسم مرتبط باشد.

4. مواد و روش ها بیوژنز میتوکندری

4.1. حیوانات و طراحی تجربیمطالعات بر روی موش های صحرایی نر نژاد Sprague-Dawley (9-هفته ای) که از Japan SLC, Inc. (Shizuoka، ژاپن) خریداری شده بودند، انجام شد. همه موش ها تحت کنترل شم و یا 5/6 Nx قرار گرفتند. تمام مراحل مربوط به حیوانات مطابق با تأیید کمیته مراقبت از حیوانات سازمانی دانشگاه دونگ-آ (DIACUC{6}}) انجام شد. موش ها در شرایط استاندارد نگهداری شدند و اجازه دسترسی آزاد به آب لوله کشی و رژیم غذایی استاندارد را دادند. همه موش‌ها به گروه‌های زیر تقسیم شدند: گروه 1 (کنترل شم، n=6)، موش‌های کنترل در محلول سالین (1 میلی‌لیتر/کیلوگرم در روز با شستشوی معده). گروه 2 (گروه Nx، n=6)، موش‌های Nx که در محلول نمکی نگهداری می‌شوند (1 میلی‌لیتر/کیلوگرم در روز با شستشوی معده). گروه 3 (امگا-3 گروه FA)، موش های Nx تحت درمان با امگا-3. دوز و مسیر مصرف اسیدهای چرب امگا (Omacor، 300 میلی گرم/کیلوگرم در روز با گاواژ معده، Pronova Biocare، Sandefjord، نروژ) بر اساس مطالعات قبلی تعیین شد [19]. Omacor یک امگا{20} FA با منشا دریایی است و از 460 میلی گرم ایکوزاپنتانوئیک اسید (EPA) و 380 میلی گرم دوکوزاهگزانوئیک اسید (DHA) در 1 گرم Omacor تشکیل شده است. Omacor معمولاً برای پیشگیری ثانویه پس از انفارکتوس میوکارد و درمان هیپرتری گلیسیریدمی تجویز می شود [29]. دو اسید چرب امگا (EPA به علاوه DHA) جزء اصلی (84 درصد) و فعال Omacor هستند که به صورت دارویی تهیه می شوند.

ترکیبات غلبه بر اجزای جزئی (16 درصد). ما Omacor را برای مکمل امگا{1}} با ضد التهاب و کاهش استرس اکسیداتیو انتخاب کردیم زیرا در مطالعات بالینی خطر بیماری قلبی عروقی را کاهش داد [30]. موش‌ها به طور یکنواخت تغذیه شدند و وزن آنها روزانه بررسی شد. موش‌ها به مدت 15 هفته پس از جراحی اجازه دسترسی آزاد به آب لوله‌کشی داشتند و سپس تحت بی‌هوشی دی اتیل اتر کشته شدند. در هنگام مرگ، نمونه خون آئورت جمع آوری شد و سپس با سرعت 3000 دور در دقیقه به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ شد. برای شناسایی تغییرات درعملکرد کلیهسطوح BUN و sCr با استفاده از یک آنالایزر خودکار (روش، آلمان) اندازه گیری شد.

4.2. معاینه هیستوپاتولوژیکفرمالین ثابت شدکلیهبافت ها در پارافین جاسازی شدند، به برش هایی (4 میکرومتر) برش داده شدند و با اسید پریودیک شیف رنگ آمیزی شدند. تغییرات هیستوپاتولوژیک با Aperio ScanScope (Aperio Technologies، Vista، CA، USA) مشاهده شد.

4.3. جداسازی RNA و تجزیه و تحلیل کمی PCR در زمان واقعی.RNA کل از آن استخراج شدکلیهبافت ها با استفاده از معرف TRIZol. سپس 1 میکروگرم از RNA کل با استفاده از کیت سنتز cDNA M-MLV (Enzynomics، Daejeon، کره) به cDNA تک رشته ای تبدیل شد. پرایمرها از توالی های ژنی مربوطه با استفاده از نرم افزار Primer3 و mfold طراحی شدند. برای تجزیه و تحلیل کمی PCR در زمان واقعی، cDNA با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن تحت تکثیر PCR قرار گرفت: موش PGC1 50- CCG AGA ATT CAT GGA GCA AT-30(حس)، 50- GTG TGA GGA GGG TCA TCG TT-30(antisense); rat Nrf1 50- GTT TCA TGG ACC CAA GCA TT-30(sense), 50- GGT GGC CTG AGT TTG TGT CT-30(antisense); rat SIRT3، 50- GAG ACT TGG TGG GGT CCT TT -30(sense), 50- ATC CTG CAG CTC TTG TGT CC -30(antisense); موش SIRT1، 50- CAG GTT GCA GGA ATC CAA AG -30(حس)، 50- CTC CAC GAA CAG CTT CAC AA -30(ضد حس); rat -actin، 50- GCG CAA GTA CTC TGT GTG GA -30(sense)، 50- CAT CGT ACT CCT GCT TGC TG -30 (ضد حس). PCR بلادرنگ با استفاده از SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) با ابزار ABI 7500 (Applied Biosystems, Waltham, MA, USA) انجام شد.

سیستانچ درد کلیه/کلیه را بهبود می بخشد

4.4. وسترن بلات و رسوب ایمنی.وسترن بلات همانطور که قبلا توضیح داده شد با تغییرات جزئی تجزیه و تحلیل شد [10].کلیهبافت ها توسط بافر لیز (محلول استخراج پروتئین PRO-PREP) همگن شدند، (30 دقیقه در دمای 4 درجه سانتیگراد) انکوبه شدند و (14،{4}} دور در دقیقه به مدت 20 دقیقه در دمای 4 درجه سانتیگراد) سانتریفیوژ شدند. غلظت پروتئین توسط معرف سنجش پروتئین برادفورد (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) تعیین شد. نمونه پروتئین برابر روی یک SDS-PAGE 7.5-15 درصد بارگذاری شد و به یک غشای نیتروسلولزی (Amersham Pharmacia Biotech، Piscataway، NJ، ایالات متحده آمریکا) منتقل شد. سپس، پروتئین ها با هر آنتی بادی ایمونبولت شدند. آنتی بادی علیه PGC{12}} و SIRT1 از بیوتکنولوژی سانتا کروز (سانتا کروز، کالیفرنیا، ایالات متحده آمریکا) به دست آمد. آنتی بادی ها علیه AMPK، pAMPK، Nrf1، SIRT3، FoxO1، FoxO3a، و mTOR از Cell Signaling Technology (Danvers، MA، ایالات متحده آمریکا) خریداری شدند. آنتی بادی ها علیه Nrf2، Keap1 (مونومر)، و -اکتین از Abcam (کمبریج، MA، ایالات متحده آمریکا) و Sigma (سنت لوئیس، MO، ایالات متحده آمریکا) خریداری شد. برای رسوب ایمنی، در مجموع 500 میکروگرم پروتئین با آنتی‌بادی‌های PGC{22} (سانتا کروز بیوتکنولوژی، سانتا کروز، کالیفرنیا، ایالات متحده آمریکا) و دانه‌های پروتئین A/G پلاس آگارز (سانتا کروز بیوتکنولوژی، سانتا کروز، کالیفرنیا، انکوبه شدند. ایالات متحده)، و اجازه دهید در دمای 4 درجه سانتیگراد یک شبه مخلوط شود. سپس رسوبات ایمنی با استفاده از الکتروفورز SDS-PAG جدا و با استفاده از آنتی‌بادی‌های استیل-لیزین (تکنولوژی سیگنال‌دهی سلولی، بورلی، MA، ایالات متحده آمریکا) و فسفوسرین (MerckMillipore، Burlington، MA، ایالات متحده) ایمونولات شدند. غشاها متعاقبا با آنتی بادی ثانویه کونژوگه با پراکسیداز ترب کوهی به مدت 60 دقیقه در دمای اتاق انکوبه شدند. سطح پروتئین توسط -اکتین استاندارد شد (ImageJ نسخه 1.48q). وسترن بلات و تجزیه و تحلیل ایمنی با آنتی بادی ها با استفاده از سوبسترای نورتابی شیمیایی افزایش یافته Super Signal West Pico (Thermo Scientific, Hudson, NH, USA) انجام شد و با استفاده از LAS{32}} Plus (Fuji Photo Film, Tokyo, Japan) شناسایی شد.

4.5 اندازه گیری محتوای mtDNAبرای تعیین محتوای نسبی mtDNA از qPCR استفاده شد. واکنش از طریق شیمی SYBR Green با استفاده از 3 نانوگرم DNA کل به عنوان الگو و پرایمرهای زیر انجام شد: mtDNA موش صحرایی 5'-GGTTCTTACTTCAGGGGCCATCA-3' (حس)، 5,-TGATTAGACCCGTTACCA TCGA-3' ( ضد حس)؛ موش p-actin، 5'- CCCAGCCATGTACGTAGCCA (حس)، C- CGTCTC- CGGAGTCCATCAC f (ضد حس). محتوای mtDNA نسبت به DNA هسته ای در [31] گزارش شده است.

4.6 تجزیه و تحلیل آماریتجزیه و تحلیل های آماری با استفاده از نرم افزار SPSS 18.{1}} (IBM Corp., Armonk, NYP USA) انجام شد. نتایج به صورت میانگین 土 SD بیان می شوند. میانگین گروه ها با استفاده از تحلیل واریانس و به دنبال آن مقایسه های چندگانه توکی مقایسه شد. p e 0.05 از نظر آماری معنی دار در نظر گرفته شد.

5. نتیجه گیری ها

در نهایت، مدولاسیون های قابل توجهی در بیان واسطه های مربوط به بیوژنز میتوکندری در یک مدل موش CKD مشاهده شد. امگا{0}} FA ممکن است با تنظیم مثبت Nrf1 و Nrf2، بیوژنز میتوکندری را بهبود بخشد. این مکانیسم محافظتی ممکن است از طریق افزایش بیان PGC-1 و استیل زدایی PGC-1، که با افزایش تولید SIRT1/3 ایجاد شد، آغاز شود (شکل 5). شکل 5. اثر امگا{9}} FA بر بیوژنز میتوکندری در CKD. فلش های سیاه پررنگ بیانگر واسطه های مربوط به بیوژنز میتوکندری در مدل موش CKD را نشان می دهد. فلش‌های قرمز بیانگر واسطه‌ها پس از تجویز امگا{10}} FA است. فلش های بالا / پایین نشان دهنده افزایش و کاهش بیان واسطه ها است.