بخش 1 آنتی اکسیداسیون و محافظت سیتوزی از اکتئوزید و مشتقات آن: مقایسه و شیمی مکانیکی

Xican Li 1,2,*,† ID, Yulu Xie 1,2,†, Ke Li 3,4, Aichi Wu 1,2,*, Hong Xie 1,2, Qian Guo 1,5, Penghui Xue 1, Yerkingul Maleshibek 1، Wei Zhao 6، Jiasong Guo 7 و Dongfeng Chen 3،4

1 دانشکده طب گیاهی چینی، دانشگاه طب چینی گوانگژو، گوانگژو 510006، چین;

2 آزمایشگاه تحقیق و توسعه نوآورانه TCM، دانشگاه پزشکی چینی گوانگژو، گوانگژو 510006، چین

3 دانشکده علوم پایه پزشکی، دانشگاه پزشکی چینی گوانگژو، گوانگژو 510006، چین.

4 مرکز تحقیقات پایه پزشکی یکپارچه، دانشگاه پزشکی چینی گوانگژو، گوانگژو 510006، چین

5 دانشکده علوم پزشکی پایه، دانشگاه دارویی گوانگدونگ، گوانگژو 510007، چین

6 دانشکده پزشکی Zhongshan، دانشگاه Sun Yat-sen، شماره 74 جاده Zhongshan. 2، گوانگژو 510080، چین;

7 گروه بافت شناسی و جنین شناسی، دانشگاه پزشکی جنوبی، گوانگژو 510515، چین.

دریافت: 24 ژانویه 2018; پذیرش: 20 فوریه 2018; تاریخ انتشار: 23 فوریه 2018

خلاصه:در این مطالعه سعی شد نقش باقی مانده های قند و مکانیسم های آنتی اکسیدان های فنیل پروپانوئید فنلی بررسی شود.اکتئوزیدهمراه با طرف مقابل فورسیتوزید B و رامنوزید پودیوم آن، با استفاده از سنجش‌های مختلف آنتی‌اکسیدانی به طور مقایسه‌ای مورد بررسی قرار گرفتند. در سه سنجش مبتنی بر انتقال الکترون (ET) (FRAP، CUPRAC، PTIO*-scavenging در pH 4.5)، سطوح نسبی آنتی اکسیدان تقریباً به عنواناکتئوزید>فورسیتوزید B > پولیوموزید. چنین نظمی در ح^{به علاوه}-آزمایش حذف PTIO*-مشمول انتقال در pH 7.4 و در سه روش مهارکننده رادیکال با چند مسیر، به عنوان مثال، ABTS به علاوه •-scavenging، DPPH• -scavenging، و • O{10}}scavenging. در طیف UV-vis، هر یک از آنها یک تغییر قرمز در 335-364 نانومتر و دو قله ضعیف (480 و 719 نانومتر) را نشان دادند، زمانی که با آهن مخلوط شدند.^{2 به علاوه}; با این حال،اکتئوزیدضعیف ترین جذب را داد. در تجزیه و تحلیل کروماتوگرافی مایع با عملکرد فوق العاده همراه با طیف سنجی جرمی پشت سر هم چهار قطبی یونیزاسیون الکترواسپری (UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS)، پیک تشکیل ترکیب اضافی (RAF) یافت نشد. سنجش MTT نشان داد که پولیوموزید بیشترین قابلیت زنده‌مانی سلول‌های بنیادی مزانشیمی مشتق از مغز استخوان را با استرس اکسیداتیو نشان می‌دهد. در نتیجه،اکتئوزیدفورسیتوزید B و پولیوموزید ممکن است در چندین مسیر برای اعمال اثر آنتی اکسیدانی از جمله ET، H دخیل باشند.^{به علاوه}-انتقال یا Fe^{2 به علاوه}-کلات، اما نه RAF. انتقال ET و H پلاسممکن است توسط بخش های رامنوسیل و آپیوسیل مانع شود. با این حال، Fe^{2 به علاوه}پتانسیل کیلیت را می توان با دو باقیمانده قند (به خصوص بخش رامنوسیل) افزایش داد. اثر کلی بخش‌های رامنوسیل و آپیوسیل بهبود اثرات آنتی‌اکسیدانی یا محافظ سلولی است.

کلید واژه ها:اکتئوزید; آپیوسیل; فورسیتوزید B; گلیکوزیدهای فنیل پروپانوئید؛ پولیوموزید؛ رامنوسیل

برای اطلاعات بیشتر لطفا تماس بگیرید:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola اثرات زیادی دارد، برای اطلاعات بیشتر اینجا را کلیک کنید

1. مقدمه

به تازگی،اکتئوزید(ورباسکوزید، شکل 1، یک گلیکوزید فنیل پروپانوئیدی فنلی که در وروین و سایر گیاهان وجود دارد، برای بهبود کارایی انتقال هسته سلول سوماتیک سگ (SCNT) در طول فرآیند شبیه سازی سگ یافت شد.اکتئوزیدمی تواند از سلول های نوروبلاستوم انسانی SH-SY5Y در برابر آسیب های ناشی از p-آمیلوئید و فیبروبلاست های پوست انسان در برابر آسیب های ناشی از اشعه ایکس محافظت کند. فورسیتوزید B مناسب آن (شکل 1) نیز در گیاهان توزیع شده است و مشاهده شده است که اثرات محافظت کننده عصبی قوی با یک بازه زمانی درمانی مطلوب دارد. تصور می‌شود که این اثرات مفید روی سلول‌ها و بافت‌ها با محافظت از برخی مولکول‌های زیستی مانند لیپیدها و DNA مرتبط است. در حقیقت،اکتئوزیدو آنالوگ آنczsتانوسیدFنشان داده شده است که پراکسیداسیون لیپیدی میتوکندری را در موش ها مهار می کند. پراکسیداسیون لیپیدی به عنوان نتیجه استرس اکسیداتیو سلولی و در نهایت از گونه های فعال اکسیژن (ROS) شناخته شده است.

از جنبه حفاظت از DNA،اکتئوزیدو مشتقات آن می توانند رادیکال های DNA را به سرعت ترمیم کنند، مانند 2'-deoxyadenosine-5'-monophosphate (dAMP) و 2'-deoxyguanosine-5'-monophosphate (dGMP) [8]. این رادیکال‌های دئوکسی نوکلئوتید ثانویه می‌توانند به طور اکسیداتیو به سلول‌ها آسیب بزنند که منجر به جهش‌زایی و سرطان‌زایی می‌شود [9]. مطالعه بیوفیزیکی نشان داد کهاکتئوزیدو مشتقات آن می توانند به شیارهای جزئی DNA متصل شوند و به سرعت چنین آسیب اکسیداتیو DNA را ترمیم کنند [10]. مدل چوب توپ مبتنی بر ترکیب ترجیحی پیشنهاد می کند (شکل 1,درست است) که این مولکول ها پرولاتی هستند و به راحتی می توانند به حلقه DNA برسند و در نتیجه قادر به ترمیم سریع آسیب رادیکال های DNA هستند [8].

با این حال، از نقطه نظر بیوشیمی، ترمیم اساساً از طریق یک مسیر حذف کننده ROS (یعنی آنتی اکسیدان) انجام می شود. همانطور که قبلا ذکر شد، تولید کشورهای رادیکال دئوکسی نوکلئوتید در نهایت ناشی از حمله ROS، از جمله رادیکال‌های آزاد (به عنوان مثال، رادیکال OH 11) و مولکول‌های اکسیدان (مانند H2O2 [12]) است. تصور می شود که حذف ROS به طور موثر وضعیت اکسیداتیو سلولی را کاهش می دهد [13،14] و کیفیت سلول های بنیادی را بهبود می بخشد [12،15]. بنابراین، بررسی توانایی آنتی اکسیدانی آنها و بحث بیشتر در مورد مکانیسم های احتمالی ضروری است.

در این مطالعه، سه گلیکوزید فنیل پروپانوئید فنلی (اکتئوزید، فورسیتوزید B و پولیوموزید) با استفاده از سنجش‌های آنتی‌اکسیدانی مختلف، از جمله 2-فنیل{1}}، 4،5،{4}{4}}تترا متیل ایمیدازولین{4} مورد بررسی مقایسه قرار گرفتند. {5}}oxyl-3-oxide radical (PTIO・)scavening assay, feric ion reducing power antioxidant assay (FRAP) assay, copic reducing antioxidant assay (CUPRAC), 2,2'-casino-bis({11) }}اتیل بنزن-تیازولین{13}}آزمایش مهار رادیکال سولفونیک اسید (ABTS پلاس •)، 1،{15}}دی فنیل{16}}پیکریل هیدرازین (DPPH・) و ・.{18} } سنجش مهار و همچنین Fe^{2 به علاوه}تجزیه و تحلیل طیف UV کیلیت. متعاقباً، محصولات واکنش آنها با DPPH با استفاده از کروماتوگرافی مایع با عملکرد فوق‌العاده همراه با آنالیز طیف‌سنجی جرمی پشت سر هم زمان پرواز (UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS) یونیزاسیون الکترواسپری تعیین شد. در نهایت، اثر محافظت سلولی آنها نسبت به سلول‌های بنیادی مزانشیمی مشتق از مغز استخوان (bmMSCs) با استفاده از 3-(4,{9}}dimethylthiazol{10}}yl){11}}،{12} برآورد شد. }} سنجش دی فنیل (MTT). همانطور که در شکل مشاهده می شود 1,تفاوت بین سه گلیکوزید فنیل پروپانوئید فنلی (یعنی آکتئوزید، فورسیتوزید B و پولیوموزید) در نوع گلیکوزید است: فورسیتوزید B از آکتئوزید است، در حالی که پولیوموزید رامنوزید آکتئوزید است. بنابراین، این مطالعه تطبیقی ​​همچنین به درک نقش آپیوسیل و رامنوسیل در اثرات آنتی اکسیدانی کمک می کند.

2. نتایج

2.1. سنجش های کاهش دهنده فلز (FRAP و CUPRAC)

در این مطالعه، ما دو روش کاهنده فلز، یعنی سنجش FRAP و سنجش CUPRAC را انجام دادیم. همانطور که در Suppl نشان داده شده است. 1، اکتئوزید و مشتقات آن FRAP (یا مس) نسبی را افزایش دادند^{2 به علاوه}-قدرت کاهش دهنده) درصدهای 0-10 昭/L به روشی وابسته به دوز. ترتیب سطوح نسبی کاهنده فلز آنها تقریباً به ترتیب اکتئوزید > فورسیتوزید B > پولیوموزید کاهش یافته است (جدول 1).

2.2. PTIO・-ScavengingAssay

آزمایش PTIO*-scavenging اخیراً توسط آزمایشگاه ما توسعه یافته است [16]. می توان از آن برای ارزیابی سطوح آنتی اکسیدانی و کشف مسیرهای آنتی اکسیدانی استفاده کرد. همانطور که در Suppl نشان داده شده است. 1، اکتئوزید و مشتقات آن می توانند PTIO* را در pH 4.5 و pH 7.4 با موفقیت از بین ببرند. با این حال، با توجه به مقادیر IC50 در جدول 1، سطوح نسبی PTIO*-scavenging آنها در مقدار pH یکسان با یکدیگر متفاوت بود. همچنین، هر اکتئوزید و مشتقات آن سطوح مختلف حذف PTIO• بین pH 4.5 و pH 7.4 را نشان دادند. به طور کلی، سطوح حذف PTIO^ در 7.4 بالاتر از سطوح pH 4.5 بود.

2.3. ABTSبه علاوه9-جدا شدهging و DPPH・سنجش های پاکسازی

ABTS^{به علاوه}پاکسازی و DPPH اکنون به طور گسترده برای مطالعات آنتی اکسیدانی ترکیبات یا عصاره های خالص استفاده می شود. همانطور که در Suppl. 1، آکتئوزید و مشتقات آن به طور وابسته به غلظت، ABTS به علاوه - درصد مهار یا DPPH را افزایش دادند. با این حال، از نظر مقادیر IC50 در جدول 1، سطوح نسبی ABTS به اضافه ^-scavenging به ترتیب اکتئوزید > فورسیتوزید B > پولیوموزید > ترولوکس یافت شد. نظم مشابهی را می توان در روش DPPH-scavenging نیز مشاهده کرد.

2.4. UPLC-E SI-Q-TOF—MS/MS تجزیه و تحلیل DPP H Reacمحصولات

محصول واکنش DPPH با هر یک از سه گلیکوزید فنیل پروپانوئید با استفاده از آنالیز UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS مورد بررسی قرار گرفت. در تجزیه و تحلیل (ضمیمه 2)، هیچ یک از سه گلیکوزید فنیل پروپانوئید اوج محصول RAF را تولید نکرد. در مقایسه، اسید کافئیک یک محصول دایمر تولید می کند(m/z359-360، عرضه 2).

2.5. UV-Vis-Spectra Analysis ofFe^{2 به علاوه}-محصولات کیلیتی

از آنجایی که طیف UV-vis می تواند مجتمع های فلزی را مشخص کند، بنابراین این مطالعه از طیف UV-vis برای تجزیه و تحلیل آهن احتمالی استفاده کرد.^{2 به علاوه}واکنش کیلیت با سه گلیکوزید فنیل پروپانوئید. همانطور که در شکل 2 نشان داده شده است,هر یک از آنها می تواند یک تغییر باتوکرومیک (335 نانومتر T364 نانومتر) در طیف UV ایجاد کند. در همین حال، هر یک از آنها می توانند دو قله ضعیف طیف بینایی در طیف مرئی (480 نانومتر و 719 نانومتر) ارائه دهند.)و منجر به ظاهر سبز روشن می شود. با این حال، شدت اوج به ترتیب نزولی poliumoside> forsythoside B> اکتئوزید بود.

اکتئوزیدکه درسیستانچمی توانتقویت حافظه

2.6. سنجش اتواکسیداسیون پیروگالول برای آنیون سوپراکسید (•O2~) لاشه گیری

سنجش اتواکسیداسیون پیروگالول توسط آزمایشگاه ما در سال 2012 بهبود یافت [17]. برای تخمین پتانسیل ・O2--در مطالعه حاضر استفاده شد. همانطور که در Suppl. 1، تمام اکتئوزیدها و مشتقات آن می توانند به طور وابسته به دوز، درصد حذف -- را افزایش دهند. با این حال، با توجه به مقادیر IC50 در جدول 1، زیست فعالی نسبی به ترتیب poliumoside > forsythoside B > acteoside کاهش یافت.

سیستانچدسرتیکولااکتئوزیدفواید

2.7. اثر محافظتی سلولی در برابر سلول‌های بنیادی مزانشیمی با استرس اکسیداتیو (آزمایش MTT)

برای ارزیابی اثرات سیتوپروتکتیو اکتئوزید و مشتقات آن، ما یک سنجش MTT را انجام دادیم. در این سنجش، bmMSCها توسط معرف اکسیداتیو H آسیب دیدند₂O₂, the damaged bmMSCs were then treated by acteoside and its derivatives. The A_{490 نانومتر}مقادیر برای ارزیابی اثرات نسبی سیتوپروتکتیو استفاده شد. همانطور که در جدول 2 مشاهده می شود، هر اکتئوزید و مشتقات آن وابسته به دوز A را افزایش دادند_{490 نانومتر}ارزش های. با این حال، در همان غلظت، پلیوموزید بالاترین مقادیر A490nm را داد.