Xican Li 1,2,*,† ID , Yulu Xie 1,2,†, Ke Li 3,4, Aizhi Wu 1,2,*, Hong Xie 1,2, Qian Guo 1,5,

Penghui Xue 1، Yerkingul Maleshibek 1، Wei Zhao 6، Jiasong Guo 7 و Dongfeng Chen 3،4

مخاطب:joanna.jia@wecistanche.com

1 دانشکده طب گیاهی چینی، دانشگاه طب چینی گوانگژو، گوانگژو 510006، چین; xieyulu1900@163.com (YX); xiehongxh1@163.com (HX); 15622178307@163.com (QG); 15228738137@163.com (PX); pandiphd@163.com (YM)

2 آزمایشگاه تحقیق و توسعه نوآورانه TCM، دانشگاه پزشکی چینی گوانگژو،

گوانگژو 510006، چین

3 دانشکده علوم پایه پزشکی، دانشگاه پزشکی چینی گوانگژو، گوانگژو 510006، چین. ys1090992678@163.com (KL); chen888@gzucm.edu.cn (DC)

4 مرکز تحقیقات پایه پزشکی یکپارچه، دانشگاه پزشکی چینی گوانگژو،

گوانگژو 510006، چین

5 دانشکده علوم پزشکی پایه، دانشگاه دارویی گوانگدونگ، گوانگژو 510007، چین

6 دانشکده پزشکی Zhongshan، دانشگاه Sun Yat-sen، شماره 74 جاده Zhongshan. 2، گوانگژو 510080، چین; zhaowei23@mail.sysu.edu.cn

7 گروه بافت شناسی و جنین شناسی، دانشگاه پزشکی جنوبی، گوانگژو 510515، چین.

† این نویسندگان به طور مساوی به این کار کمک کردند.

دریافت: 24 ژانویه 2018; پذیرش: 20 فوریه 2018; تاریخ انتشار: 23 فوریه 2018

چکیده: در این مطالعه سعی شد نقش باقیمانده‌های قند و مکانیسم‌های فنلی بررسی شودفنیل پروپانوئیدآنتی اکسیدان ها. اکتئوزیدهمراه با آپیوزید فورسیتوزید B و رامنوزید آن

پولیوموزید، با استفاده از روش‌های مختلف آنتی‌اکسیدانی مورد بررسی قرار گرفت. در سه سنجش مبتنی بر انتقال الکترون (ET) (FRAP، CUPRAC، PTIO·-scavenging در pH 4.5)، سطوح نسبی آنتی اکسیدان تقریباً به عنواناکتئوزید >فورسیتوزید B > پولیوموزید. چنین نظمی نیز در

روش حذف PTIO·-انتقال H پلاس در pH 7.4، و در سه روش مهار رادیکال با مسیرهای متعدد، به عنوان مثال، ABTS پلاس · - مهار، DPPH · - مهار، و · O2.-scavenging. در طیف‌های UV-vis، هر یک از آنها یک جابجایی قرمز در 335 364 نانومتر و دو قله ضعیف (480 و 719 نانومتر)، هنگامی که با Fe2 پلاس مخلوط می‌شوند، نشان دادند. با این حال،اکتئوزیدضعیف ترین جذب را داد.

در آنالیز کروماتوگرافی مایع با عملکرد فوق‌العاده همراه با طیف‌سنجی جرمی پشت سر هم چهار قطبی یونیزاسیون الکترواسپری (UPLC.ESI.Q.TOF.MS/MS)، هیچ پیک تشکیل رادیکال افزایشی (RAF) یافت نشد. سنجش MTT نشان داد که پولیوموزید بیشترین قابلیت زنده‌مانی سلول‌های بنیادی مزانشیمی مشتق از مغز استخوان را با استرس اکسیداتیو نشان می‌دهد. در نتیجه،اکتئوزیدفورسیتوزید B و پولیوموزید ممکن است در مسیرهای متعددی برای اعمال اثر آنتی اکسیدانی، از جمله ET، H plus -transfer یا Fe2 plus -chelating دخیل باشند، اما RAF نه. انتقال ET و H پلاس ممکن است توسط بخش‌های رامنوسیل و آپیوسیل مانع شود. با این حال، پتانسیل کیلیت Fe2 پلاس را می توان با دو باقیمانده قند (به خصوص بخش رامنوسیل) افزایش داد. اثر کلی بخش‌های رامنوسیل و آپیوسیل بهبود اثرات آنتی‌اکسیدانی یا محافظ سلولی است.

کلید واژه ها:اکتئوزید; آپیوسیل; فورسیتوزید B;فنیل پروپانوئیدگلیکوزیدها; پولیوموزید؛ رامنوسیل

سیستانچ دارای اثر ضد اکسیداسیون است

1. مقدمه

اخیراً اکتئوزید (ورباسکوزید، شکل 1)، یک فنولیک استفنیل پروپانوئیدگلیکوزیدمشاهده شد که در ورواین و سایر گیاهان [1]، کارایی انتقال هسته ای سلول سوماتیک سگ (SCNT) را در طول فرآیند شبیه سازی سگ بهبود می بخشد [2]. علاوه بر این، اکتئوزید می‌تواند از سلول‌های نوروبلاستوم انسانی SH-SY5Y در برابر آسیب‌های ناشی از آمیلوئید [3] و فیبروبلاست‌های پوست انسان در برابر آسیب ناشی از اشعه ایکس [4] محافظت کند. اپیوزید فورسیتوزید B آن (شکل 1) نیز در گیاهان توزیع شده است [5]، و مشاهده شده است که اثرات محافظت کننده عصبی قوی با یک پنجره زمانی درمانی مطلوب دارد [6]. تصور می شود که این اثرات مفید روی سلول ها و بافت ها با محافظت از برخی مولکول های زیستی مانند لیپیدها و DNA مرتبط باشد. در واقع، اکتئوزید و سیستانوزید F آنالوگ آن نشان داده شده است که پراکسیداسیون لیپید میتوکندریایی را در موش‌ها مهار می‌کند [7]. پراکسیداسیون لیپیدی به عنوان نتیجه استرس اکسیداتیو سلولی و در نهایت از گونه های فعال اکسیژن (ROS) شناخته شده است.

شکل 1. ساختارها (سمت چپ) و مدل های توپ و چوب مبتنی بر ترکیب ترجیحی (راست) از سه مدل طبیعیفنیل پروپانوئیدگلیکوزیدها(اکتئوزید، فورسیتوزید B و پولیوموزید).

از جنبه محافظت از DNA، اکتئوزید و مشتقات آن می توانند رادیکال های DNA را به سرعت ترمیم کنند، مانند 2'-deoxyadenosine-5'-monophosphate (dAMP) و 2'-deoxyguanosine-5'-monophosphate (dGMP) [ 8]. این رادیکال‌های دئوکسی نوکلئوتید ثانویه می‌توانند به طور اکسیداتیو به سلول‌ها آسیب بزنند که منجر به جهش‌زایی و سرطان‌زایی می‌شود [9]. مطالعه بیوفیزیکی نشان داد که اکتئوزید و مشتقات آن می توانند به شیارهای کوچک DNA متصل شوند و به سرعت چنین آسیب اکسیداتیو DNA را ترمیم کنند [10]. مدل چوب توپ مبتنی بر ترکیب ترجیحی پیشنهاد می کند (شکل 1، سمت راست) که این مولکول ها پرولات هستند و می توانند به راحتی به حلقه DNA برسند، و بنابراین، آنها می توانند به سرعت آسیب رادیکال های DNA را ترمیم کنند [8].

با این حال، از نقطه نظر بیوشیمی، ترمیم اساساً از طریق یک مسیر حذف کننده ROS (یعنی آنتی اکسیدان) انجام می شود. همانطور که قبلا ذکر شد، تولید کاتیون‌های رادیکال دئوکسی نوکلئوتید در نهایت از حمله ROS، از جمله رادیکال‌های آزاد (به عنوان مثال، رادیکال ·OH [11]) و مولکول‌های اکسیدان (مانند H2O2 [12]) است. تصور می شود که حذف ROS به طور موثری وضعیت اکسیداتیو سلولی را کاهش می دهد [13،14] و کیفیت سلول های بنیادی را بهبود می بخشد [12،15]. بنابراین، بررسی توانایی آنتی اکسیدانی آنها و بحث بیشتر در مورد مکانیسم های احتمالی ضروری است.

در این مطالعه سه فنولیکفنیل پروپانوئیدگلیکوزیدها(اکتئوزید، فورسیتوزید B و پولیوموزید) با استفاده از سنجش‌های آنتی‌اکسیدانی مختلف، از جمله 2-فنیل{1}}، 4،5،5-تترا متیل ایمیدازولین{5}}اکسیل{6 مورد بررسی مقایسه قرار گرفتند. }}سنجشی رادیکال اکسید (PTIO·) سنجش قدرت آنتی اکسیدانی کاهش دهنده یون آهن (FRAP)، سنجش ظرفیت آنتی اکسیدانی کاهش دهنده مس (CUPRAC)، 2,2→-azino-bis(3-ethylbenzene-thiazoline{13} }}آزمایش مهار رادیکال سولفونیک اسید (ABTS plus ·)

روش 1، 1-دی فنیل-2-پیکریل هیدرازین (DPPH·)، و روش مهارکننده O2 و همچنین تجزیه و تحلیل طیف UV-کلات کننده Fe2. پس از آن، محصولات واکنش آنها با DPPH · با استفاده از کروماتوگرافی مایع با عملکرد فوق العاده همراه با آنالیز طیف سنجی جرمی پشت سر هم زمان پرواز یونیزاسیون الکترواسپری (UPLC.ESI.Q.TOF.MS/MS) تعیین شد. در نهایت، اثر محافظت سلولی آنها نسبت به سلول‌های بنیادی مزانشیمی مشتق از مغز استخوان (bmMSCs) با استفاده از

سنجش 3-(4،5-دی متیل تیازول-2-ایل)-2،5-دی فنیل (MTT). همانطور که در شکل 1 مشاهده می شود، تفاوت بین سه فنلیفنیل پروپانوئیدگلیکوزیدها(یعنی اکتئوزید، فورسیتوزید B و پولیوموزید) نوع گلیکوزید است: فورسیتوزید B آپیوزید آکتئوزید است، در حالی که پولیوموزید رامنوزید اکتئوزید است. بنابراین، این مطالعه تطبیقی ​​همچنین به درک نقش آپیوسیل و رامنوسیل درآنتی اکسیداناثرات

اثر سفید کننده سیستانچ بر روی پوست به ضد اکسیداسیون

2. نتایج

2.1. سنجش های کاهش دهنده فلز (FRAP و CUPRAC)

در این مطالعه، ما دو روش کاهنده فلز، یعنی سنجش FRAP و سنجش CUPRAC را انجام دادیم. همانطور که در Suppl نشان داده شده است. 1، اکتئوزید و مشتقات آن درصد FRAP نسبی (یا Cu2 به اضافه قدرت کاهش) را در 0-10 گرم در لیتر به روشی وابسته به دوز افزایش دادند. ترتیب سطوح نسبی کاهنده فلز آنها تقریباً به ترتیب اکتئوزید > فورسیتوزید B > پولیوموزید کاهش یافت (جدول 1).

جدول 1. مقادیر IC50 اکتئوزید، فورسیتوزید B و پولیوموزید در انواع مختلفآنتی اکسیدان هاسنجش

2.2. PTIO· - سنجش پاکسازی

آزمایش مهار PTIO به تازگی توسط آزمایشگاه ما توسعه یافته است [16]. می توان از آن برای ارزیابی سطوح آنتی اکسیدانی و کشف مسیرهای آنتی اکسیدانی استفاده کرد. همانطور که در Suppl نشان داده شده است. 1، اکتئوزید و مشتقات آن می توانند PTIO· را در pH 4.5 و pH 7.4 با موفقیت از بین ببرند. با این حال، با توجه به مقادیر IC50 در جدول 1، سطوح نسبی مهار PTIO · در مقدار pH یکسان با یکدیگر متفاوت بود. همچنین، هر اکتئوزید و مشتقات آن سطوح مختلف مهار PTIO را بین pH 4.5 و pH 7.4 نشان دادند. به طور کلی، سطوح مهار PTIO در 7.4 بالاتر از سطوح pH 4.5 بود.

2.3. ABTS plus ·-Scavenging and DPPH·-Scavenging Assas

ABTS plus ·-scavenging و DPPH·-scavenging اکنون به طور گسترده برای مطالعات آنتی اکسیدانی ترکیبات یا عصاره های خالص استفاده می شود. همانطور که در Suppl. 1، اکتئوزید و مشتقات آن به طور وابسته به غلظت ABTS به علاوه درصد حذف یا DPPH را افزایش دادند.

با این حال، بر حسب مقادیر IC50 در جدول 1، سطوح نسبی ABTS به اضافه · - مهار کننده به ترتیب اکتئوزید > فورسیتوزید B > پولیوموزید > ترولوکس یافت شد. نظم مشابهی را نیز می توان در روش مهار DPPH مشاهده کرد.

2.4. UPLC.ESI.Q.TOF.MS/MS تجزیه و تحلیل DPPH· محصولات واکنش

محصول واکنش DPPH· با هر سهفنیل پروپانوئیدگلیکوزیدهابا استفاده از آنالیز UPLC.ESI.Q.TOF.MS/MS مورد بررسی قرار گرفت. در تجزیه و تحلیل (ضمیمه 2)، هیچ یک از سه گلیکوزید فنیل پروپانوئید اوج محصول RAF را تولید نکرد. در مقایسه، اسید کافئیک یک محصول دایمر تولید می‌کند (m/z 359-360، Suppl. 2).

2.5. تجزیه و تحلیل طیف UV-Vis-Fe2 Plus -Chelating محصولات

از آنجایی که طیف UV-vis می تواند کمپلکس های فلزی را مشخص کند، بنابراین این مطالعه از طیف UV-vis برای تجزیه و تحلیل واکنش احتمالی Fe2 به علاوه کلاتینگ با سه مورد استفاده کرد.فنیل پروپانوئید گلیکوزیدها. همانطور که در شکل 2 نشان داده شده است، هر یک از آنها می توانند یک تغییر باتوکرومیک (335 نانومتر ● 364 نانومتر) در طیف UV ایجاد کنند. در همین حال، هر یک از آنها می تواند دو قله ضعیف طیف بینایی در طیف های مرئی (480 نانومتر و 719 نانومتر) ایجاد کند و به ظاهر سبز روشن منجر شود. با این حال، شدت اوج به ترتیب نزولی poliumoside> forsythoside B> اکتئوزید بود.

2.6. سنجش اتواکسیداسیون پیروگالول برای پاکسازی آنیون سوپراکسید (·O2.).

سنجش اتواکسیداسیون پیروگالول توسط آزمایشگاه ما در سال 2012 بهبود یافت [17]. در مطالعه حاضر از آن برای تخمین پتانسیل جذب O2 استفاده شد. همانطور که در Suppl. 1، تمام اکتئوزیدها و مشتقات آن می توانند به طور وابسته به دوز، درصد مهارکننده O2 را افزایش دهند. با این حال، با توجه به مقادیر IC50 در جدول 1، زیست فعالی نسبی به ترتیب پولیوموزید > فورسیتوزید B > اکتئوزید کاهش یافت.

2.7. اثر محافظتی سلولی در برابر سلول‌های بنیادی مزانشیمی با استرس اکسیداتیو (آزمایش MTT)

برای ارزیابی اثرات سیتوپروتکتیو اکتئوزید و مشتقات آن، ما یک سنجش MTT را انجام دادیم. در این سنجش، bmMSCها توسط معرف اکسیداتیو H2O2 آسیب دیدند، سپس bmMSCهای آسیب دیده توسط آکتئوزید و مشتقات آن تیمار شدند. مقادیر A490nm برای ارزیابی اثرات نسبی سیتوپروتکتیو استفاده شد. همانطور که در جدول 2 مشاهده می شود، هر اکتئوزید و مشتقات آن وابسته به دوز مقادیر A490nm را افزایش دادند. با این حال، در همان غلظت، پلیوموزید بالاترین مقادیر A490nm را داد.

3. بحث

اثر آنتی اکسیدانی ترکیبات فنلی طبیعی در انتقال الکترون (ET) نقش دارد [18،19]. بنابراین، برخی از سنجش‌های کاهنده فلز مبتنی بر ET به طور گسترده برای ارزیابی سطوح آنتی‌اکسیدانی فنولیک‌ها، مانند سنجش‌های FRAP و CUPRAC استفاده شده‌اند. دستورالعمل های سنجش FRAP باید با pH کمتر از 3.6 تکمیل شود. چنین محیط اسیدی با موفقیت یونیزاسیون H به علاوه از فنول ها را سرکوب کرده است. بنابراین، سنجش FRAP یک فرآیند ET صرف در نظر گرفته می شود [20،21]. اثربخشی اکتئوزید و مشتقات آن در سنجش FRAP به این معنی است که وقتی اکتئوزید و مشتقات آن به عنوانآنتی اکسیدان هاآنها ممکن است از مسیر ET برای اعمال اثر آنتی اکسیدانی خود استفاده کنند.

علاوه بر این، ما همچنین یک سنجش CUPRAC را در بافر pH 7.4 انجام دادیم. همانطور که در Suppl. 1، اکتئوزید و مشتقات آن به طور وابسته به دوز، درصد قدرت کاهش دهنده Cu2 خود را افزایش دادند، که نشان می‌دهد می‌توانند پتانسیل ET را در pH فیزیولوژیکی حفظ کنند. با این حال، پتانسیل ET آنها به ترتیب زیر کاهش یافت: اکتئوزید > فورسیتوزید B > پولیوموزید (جدول 1). این پویایی به وضوح نشان می دهد که نصف apiosyl در فورسیتوزید B و نصفه رامنوسیل در پولیوموزید پتانسیل ET را کاهش داد.

سیستانچیک مهار کننده تیروزیناز است

برای آزمایش احتمال وقوع ET در طول فرآیندهای رادیکال زدایی آنها، یک رادیکال آزاد PTIO با محوریت اکسیژن در این مطالعه معرفی شد. شواهد ولتامتری چرخه‌ای نشان داد که مهار PTIO· زیر pH 5.{4}} یک واکنش تک الکترون-اکسایشی است [22]. مشاهده که اکتئوزید و مشتقات آن می توانند به طور موثر رادیکال PTIO را در pH 4.5 از بین ببرند، احتمال وجود ET را در طول فرآیندهای رادیکال زدایی آنها نشان می دهد. بدیهی است که این یافته بیشتر از نتایج فوق الذکر از سنجش FRAP و CUPRAC پشتیبانی می کند و نتایج قبلی که الکترون اهدا کننده (e) یکی از ویژگی های فنلی است.آنتی اکسیدان ها[23]. با این حال، در pH فیزیولوژیکی 7.4، مقاله مهار PTIO صرفاً یک مسیر ET نیست، بلکه شامل یک مسیر انتقال پروتون (H پلاس) نیز می‌شود. در طول فرآیند، PTIO پیشنهاد شده است که H پلاس را از فنولیک ها برای تولید پیک محصول ([PTIO-H] plus) بپذیرد [16]. از آنجایی که انتقال H پلاس همیشه با ET در مکانیسم های گام به گام یا همزمان [24] همراه است، محصول واقعی (یا نهایی) یک مولکول [PTIO-H] است [22]. پاکسازی PTIO· در pH 7.4 (ضمیمه 1) به این معنی است که اکتئوزید و مشتقات آن دارای پتانسیل انتقال H + H نیز هستند. مقادیر IC50 (جدول 1) نشان داد که

پتانسیل انتقال نسبی H به علاوه انتقال به ترتیب نزولی از آکتئوزید > فورسیتوزید B > پولیوموزید بود. واضح است که بخش‌های apiosyl و rhamnosyl نیز پتانسیل انتقال H پلاس را در طول فرآیند آنتی‌اکسیدانی تضعیف کردند.

همانطور که قبلاً بحث شد، در طول فرآیند آنتی اکسیدانی فنولیک ها، ET معمولاً با انتقال پروتون (H پلاس) همراه می شود تا چندین مکانیسم آنتی اکسیدانی را تشکیل دهد [24]، مانند انتقال اتم هیدروژن (HAT) [23،25-27]، الکترون متوالی. -انتقال پروتون (SEPT) [26،27]، از دست دادن متوالی پروتون انتقال تک الکترون (SPLET) [26]، و انتقال الکترون جفت شده با پروتون (PCET) [24-26،28].

به عنوان مثال، ABTS پلاس · مهار، واکنشی که توسط انتقال تک الکترون (SET) [29] غالب است، اخیراً نیز ثابت شده است که تحت تأثیر سطوح H پلاس قرار می گیرد [30]. ABTS plus ·-scavenging، بنابراین، یک سنجش آنتی اکسیدانی مبتنی بر چند مسیر است [21،31]. این واقعیت که اکتئوزید و مشتقات آن می‌توانند رادیکال‌های ABTS پلاس · را از بین ببرند، نشان می‌دهد که اثر آنتی‌اکسیدانی آن‌ها نیز ممکن است از طریق چند مسیر انجام شود. این فرضیه بیشتر توسط شواهد حاصل از روش مهار DPPH تأیید می‌شود، واکنشی که شامل مسیرهای چندگانه HAT، ET، SEPT و PCET است [26،32]. با این حال، تجزیه و تحلیل کمی بر اساس مقادیر IC50 (جدول 1) نشان داد که در جنبه‌های ABTS مبتنی بر چند مسیر به علاوه حذف‌کننده و DPPH، اکتئوزید نسبت به آپیوزید فورسیتوزید B و رامنوزید پولیوموزید برتری داشت. بنابراین، می توان استنباط کرد که بخش های آپیوسیل و رامنوسیل در نهایت مانع از پتانسیل های چند مسیری (به ویژه ET و H به علاوه انتقال) در طول فرآیند حذف رادیکال های آزاد می شوند. همانطور که نویسندگان و دیگران [14،26] اشاره کردند، در طول فرآیند آنتی اکسیدانی، یک واکنش RAF نیز ممکن است رخ دهد. با این حال، برای تأیید احتمال RAF، سهفنیل پروپانوئیدگلیکوزیدهاهمراه با اسید کافئیک با استفاده از آنالیز UPLC.ESI.Q.TOF.MS/MS مورد مطالعه قرار گرفت. اسید کافئیک یک محصول دایمر تولید می کند، در حالی که سهفنیل پروپانوئیدگلیکوزیدهاهیچ اوج محصول RAF را تولید نکرد.

این یافته به وضوح نشان می دهد که سهفنیل پروپانوئیدگلیکوزیدهانمی توانند مسیر RAF را برای اعمال اثر آنتی اکسیدانی خود طی کنند. از آنجایی که سه گلیکوزید فنیل پروپانوئید را می توان به عنوان استرهای کافئیک اسید در نظر گرفت (شکل 1)، چنین تفاوتی بین استرهای کافئیک اسید و کافئیک اسید نیز نشان می دهد که نصف عظیم ممکن است مانع از تولید RAF شود.

روی هم، از جنبه مهار رادیکال های آزاد، اکتئوزید و مشتقات آن ممکن است مسیرهای متعددی را برای اعمال اثر آنتی اکسیدانی خود طی کنند. این مسیرهای آنتی اکسیدانی حداقل در ET و H plus -transfer دخیل هستند (اما نه RAF). یافته‌های ما تا حدی توسط مطالعه نظری حمایت می‌شود که اکتئوزید می‌تواند اثر آنتی‌اکسیدانی را از طریق مسیر SPLET اعمال کند. در این فرآیند، آکتئوزید ممکن است ابتدا از پروتونه خارج شود (H به علاوه انتقال) تا آنیون تولید کند. تصور می شود که deprotonation در قسمت های کاتکول با اسیدیته ضعیف رخ می دهد. متعاقباً، آنیون الکترون اهدا کرد تا شکل رادیکال فنوکسی را ایجاد کند [33]. رادیکال‌های فنوکسی با کونژوگاسیون pu تا حدودی پایدار هستند. البته در این راستا در آینده به کارهای تجربی بیشتری نیاز است.

شایان ذکر است که استرس اکسیداتیو سلولی می تواند از فلزات واسطه (به ویژه Fe2 plus) نیز منشاء بگیرد. با این حال، یون Fe2 پلاس می‌تواند مولکول H2O2 را از طریق واکنش فنتون به مضرترین رادیکال‌های OH تبدیل کند (Fe2 به علاوه H2O2 ● Fe3 به علاوه ·OH به علاوه OH.). بنابراین، کاهش سطوح Fe2 پلاس می‌تواند به طور موثری رادیکال‌های ·OH را برای آزادسازی استرس اکسیداتیو سلولی مهار کند. در واقع، کلات کردن آهن توسط فنولیک طبیعیآنتی اکسیدان هااکنون به یک درمان موثر برای برخی از بیماری های استرس اکسیداتیو تبدیل شده است [34،35].

در مطالعه حاضر، اکتئوزید و مشتقات آن به‌عنوان شل‌کننده‌های مؤثر Fe2 + با تغییرات طیف‌سنجی و رنگ محلول پیشنهاد شدند (شکل 2). با این وجود، اکتئوزید در کیلیت Fe2 پلاس از دو گلوکوزید پایین‌تر است و فورسیتوزید B با نصف آپیوسیل نسبت به پولیوموزید با نصف رامنوسیل پایین‌تر است. بر اساس مقایسه ترکیبات ترجیحی آنها (شکل 1، سمت راست)، پیشنهاد می شود که قسمت آپیوسیل (یا رامنوسیل) می تواند به لیگاند اصلی کمک کند.فنیل پروپانوئیدگروهدر کیلیت Fe2 plus . چنین اثر هم افزایی بدون شک توانایی Fe2 plus-chelating را تقویت کرده و پیک های UV-vis را افزایش می دهد. با این حال، رامنوسیل از نظر توانایی Fe2 به علاوه -کلاتینگ موثرتر از آپیوسیل است. این تفاوت را می توان به این واقعیت نسبت داد که رامنوسیل به شکل هگزوسیکلیک (یعنی/-L-rhamnopyranosyl)، در حالی که آپیوسیل به شکل پنج حلقه ای (یعنی -D-apiofuransyl) است. شکل هگزوسیکلیک بزرگتر و پایدارتر شناخته شده است. از این رو، رامنوسیل هگزوسیکلیک در مقایسه با آپیوسیل پنتا سیکلیک در توانایی Fe2 به علاوه -کلاتینگ موثرتر است.

برای آزمایش اینکه آیا اکتئوزید و مشتقات آن می‌توانند ROS را از بین ببرند، ما یک سنجش خوداکسیداسیون پیروگالول را انجام دادیم. همانطور که در Suppl. 1، همه می توانند به طور موثری O2 را از بین ببرند. رادیکال، یک ROS معمولی که در سلول ها رخ می دهد. با این حال، زیست فعالی نسبی در راسته poliumoside> forsythoside B> acteoside کاهش یافت. این ترتیب نیز موازی با اثرات محافظت سلولی است (جدول 2). این یافته نشان می دهد که اثر کلی بخش رامنوسیل یا قسمت آپیوسیل افزایش اثرات مهار کننده ROS یا محافظت سلولی است.

سیستانچرا داشته باشندعملکردازسفید کردنپوست

4. مواد و روش ها

4.1. مواد شیمیایی و حیوانات

Acteoside (شماره CAS: 61276-17-3، 97 درصد)، forsythoside B (شماره CAS: 81525-13-5، 97 درصد) از BioBioPha (Kunming، چین، Suppl. 3) به دست آمد. Poliumoside (شماره CAS: 94079-81-9، 97 درصد) توسط تیم ما از گیاه سنتی چینی Callicarpa pei HT Chang (ضمیمه 3) جدا شد. اسید DPPH·، (o)-6-هیدروکسیل-2، 5،7،8-تترا متلی کرومان{13}}کربوکسیلیک اسید (Trolox)، 2،9-دی متیل{{ 16}}،10-فنانترولین (نئوکوپروئین)، 2،4،6-تری پیریدیل تریازین (TPTZ) و پیروگالول از شرکت بازرگانی Sigma-Aldrich Shanghai (شانگهای، چین) خریداری شد. (NH4)2ABTS [2،2→-azinobis ({27}}اتیل بنزن-تیازولین{29}} نمک دی آمونیوم اسید سولفونیک)] از شرکت شیمیایی Amresco (Solon، OH، ایالات متحده آمریکا) به دست آمد. رادیکال PTIO از شرکت توسعه TCI، آموزشی ویبولیتین (شانگهای، چین) خریداری شد. اسید کافئیک از موسسه ملی کنترل محصولات دارویی و بیولوژیکی (پکن، چین) خریداری شد. محیط Eagle اصلاح شده Dulbecco (DMEM)، سرم جنین گاوی (FBS) و تریپسین از Gibco (گرند آیلند، نیویورک، ایالات متحده آمریکا) خریداری شد. کیت سنجش Annexin V/Propidium Iodide (PI) از Invitrogen (Carlsbad، CA، USA) خریداری شد. همه مواد دیگر از درجه تحلیلی بود.

موش های Sprague-Dawley (SD) با سن 4 هفته از مرکز حیوانات دانشگاه پزشکی چینی گوانگژو به دست آمدند. پروتکل این آزمایش تحت نظارت کمیته اخلاق حیوانات در دانشگاه گوانگژو چین (شماره تایید 20170306A) انجام شد.

4.2. سنجش های کاهش دهنده فلز (FRAP و CUPRAC)

سنجش‌های کاهش‌دهنده فلز شامل سنجش قدرت کاهش‌دهنده Fe3 plus و سنجش قدرت کاهش‌دهنده Cu2 plus. سنجش کاهش دهنده Fe3 پلاس توسط Benzie و Strain ایجاد شد و به طور رسمی FRAP نامیده می شود [2{12}}]. پروتکل تجربی این سنجش در گزارش قبلی [9] توضیح داده شد. به طور خلاصه، معرف FRAP به تازگی با مخلوط کردن 10 میلی مولار TPTZ، 20 میلی مولار FeCl3 و 0.25 مولار بافر استات به نسبت 1:1:10 در pH 3.6 تهیه شد. نمونه آزمایش (x=4-20 لیتر، 0.05 میلی گرم در میلی لیتر) به (20. x) لیتر اتانول 95 درصد و سپس 80 لیتر معرف FRAP اضافه شد. پس از یک 30-دقیقه جوجه کشی در دمای محیط، جذب با استفاده از دستگاه میکروپلیت خوان (Multiskan FC، Thermo Scientific، شانگهای، چین) در طول موج 595 نانومتر اندازه گیری شد. قدرت کاهنده نسبی نمونه با استفاده از فرمول زیر محاسبه شد:

که در آن Amax حداکثر جذب مخلوط واکنش با نمونه بود و Amin حداقل جذب در آزمایش است. A میزان جذب نمونه است.

قدرت کاهش Cu2 پلاس همچنین می تواند سطح آنتی اکسیدان را مشخص کند و بنابراین CUPRAC نامیده می شود. این سنجش طبق روشی که قبلا منتشر شده بود [36] انجام شد. به طور خلاصه، 12 L محلول آبی CuSO4 (1{12}} mmol/L)، 12 L محلول اتانولی نئوکوپروئین (7.5 mmol/L) و (75. x) L محلول بافر CH3COONH4 ({16}}). 1 مول در لیتر، pH 7.5) به چاه هایی با حجم های مختلف نمونه (0.05 میلی گرم در میلی لیتر، 4 تا 20 لیتر) اضافه شد. جذب در 450 نانومتر پس از 30 دقیقه با استفاده از میکروپلیت ریدر فوق اندازه گیری شد. توان نسبی CUPRAC با استفاده از فرمول FRAP محاسبه شد. Amax حداکثر جذب مخلوط واکنش با sa بودmple و امین حداقل جذب در آزمایش است. A میزان جذب نمونه است.

سیستانچدارای اثرات سفید شدن پوست هستند

لطفا برای قسمت 2 اینجا را کلیک کنید