قسمت 2: ژرانیول از طریق تغییر وضعیت آنتی اکسیدانی، التهاب و آپوپتوز، آسیب کلیه ناشی از دوکسوروبیسین را بهبود می بخشد: نقش های بالقوه NF-kB و Nrf2/Ho-1

برای اطلاعات بیشتر. مخاطبtina.xiang@wecistanche.com

3. نتایج

3.1. ژرانیول از کلیه ها در برابر آسیب های ناشی از دوکسوروبیسین محافظت می کند

این مطالعه سطوح کراتینین، آلبومین و BUN خون را برای تعیین اینکه آیا تجویز Dox باعث آسیب کلیوی شده است مورد بررسی قرار داد. همانطور که انتظار می رفت، درمان Dox باعث افزایش قابل توجهی در BUN و کراتینین، در کنار کاهش قابل توجه آلبومین شد (شکل 1A-C). ژرانیول، قبل از درمان، ناهنجاری های مشاهده شده در سطوح کراتینین، آلبومین و BUN را بهبود بخشید، که نشان می دهد ممکن است در برابر آسیب کلیوی با واسطه Dox محافظت کند.

برای دریافت مزایای عصاره سیستانچ توبولوزا اینجا را کلیک کنید

3.2. ژرانیول از استرس اکسیداتیو ناشی از دوکسوروبیسین محافظت می کند

برای تأیید اینکه آیا مکمل ژرانیول ممکن است استرس اکسیداتیو مرتبط با Dox را کاهش دهد و ظرفیت آنتی اکسیدانی را بهبود بخشد، مقدار MDA و GSH، فعالیت CAT و بیان ژن و پروتئین Nrf{1}}، Ho{{2} را کمیت کردیم. }، SOD-2 و GPx-1 در بافت کلیه. در مقایسه با گروه کنترل، یک تزریق داکس (20 میلی گرم بر کیلوگرم) منجر به افزایش قابل توجهی در MDA همراه با کاهش قابل توجه محتوای GSH و فعالیت CAT شد (شکل 2A-C). همچنین بیان ژن و پروتئین Nrf-2، Ho{9}}، GPx{10}} و SOD-2 را به طور قابل توجهی کاهش داد (شکل 3A-G). با این حال، مکمل های پیشگیرانه با ژرانیول به طور قابل ملاحظه ای تغییرات این پارامترها را به شیوه ای وابسته به دوز بهبود داد. این یافته ها اثر آنتی اکسیدانی بالقوه ژرانیول را نشان می دهد.

<005;**,p><><000l; ns,p="">005 یا غیر قابل توجه. Gr100 و Gr200 به ترتیب 100 و 200 میلی‌گرم ژرانیول را به ازای هر کیلوگرم وزن بدن نشان می‌دهند." alt{6}}"شکل 2. Gr100 and Dox plus Gr200) روی شاخص‌های استرس اکسیداتیو کلیه "،پ<005;**,p><><000l; ns,p="">005 or non-sigrificant. Gr100 and Gr200 indicate 100 and 200 mg of geraniol per kilogram of body weight, respectively." width="455" height="320" border="0" vspace="0" style="width: 455px; height: 320px;"/>

3.3. ژرانیول از التهاب کلیه ناشی از دوکسوروبیسین محافظت می کند

فعالیت های ضد التهابی Geraniol در جاهای دیگر نشان داده شده است. برای تأیید بیشتر اثر ضد التهابی بالقوه ژرانیول در زمینه درمان Dox، ما از وسترن بلات برای ارزیابی بیان پروتئین‌های مهم در تنظیم التهاب (NfkB-p65، TNF-a و IL{5}}) استفاده کردیم. نتایج نشان داد که تغییرات بیانی ناشی از Dox در موش‌های تحت درمان با ژرانیول بازسازی شد (شکل 4A-D) و نشان می‌دهد که ژرانیول دارایضد التهاباثرات

3.4. ژرانیول از آپوپتوز ناشی از دوکسوروبیسین محافظت می کند

برای بررسی اینکه آیا ژرانیول آپوپتوز ناشی از داکس را سرکوب می‌کند، ما بیان نشانگرهای پروتئینی پرو آپوپتوز و ضد آپوپتوز را اندازه‌گیری کردیم. در مقایسه با گروه کنترل، یک دوز منفرد Dox منجر به افزایش قابل توجهی در بیان بافت کلیوی پروتئین‌های پرو آپوپتوز (Bax و کاسپاز شکافته شده{3}}) و کاهش قابل‌توجه در سطوح ضد آپوپتوز شد. پروتئین Bcl{5}} (شکل 5A-D). در همین حال، مکمل ژرانیول این ناهنجاری ها را اصلاح کرد. این یافته ها نشان می دهد که قبل از درمان با ژرانیول آپوپتوز با واسطه Dox در کلیه موش صحرایی را کاهش می دهد.

3.5. ژرانیول از تغییرات ناشی از دوکسوروبیسین در معماری کلیه محافظت می کند

در نهایت، برای تایید بیشتر نتایج، هیستوپاتولوژی بافت کلیه را بررسی کردیم. موش‌های گروه کنترل دارای لوله‌ها و گلومرول‌های طبیعی بودند (شکل 6A)، در حالی که موش‌هایی که داکس تجویز شده بودند، احتقان گلومرولی و تخریب لوله‌ای را نشان دادند (شکل 6B). ما دریافتیم که مکمل با ژرانیول آسیب ناشی از Dox را به روشی وابسته به دوز بازیابی می کند (شکل 6C، D).

4. بحث

داروهای شیمی درمانی اغلب برای درمان انواع مختلف سرطان استفاده می شود. با این حال، این داروها اغلب هموستاز فیزیولوژیکی را در بسیاری از اندام‌ها از بین می‌برند و می‌توانند منجر به اثرات نامطلوب فیزیولوژیکی در سلول‌های غیر توموری شوند که بیشتر به دلیل تشکیل رادیکال‌های آزاد و سمیت استرس اکسیداتیو است. هدف از این تحقیق تعیین این بود که آیا ژرانیول می‌تواند از موش‌های صحرایی ویستار در برابر آسیب کلیوی ناشی از داکس محافظت کند. بر این اساس، ما با واسطه Dox را بررسی کردیمالتهاب, آپوپتوز، واسترس اکسیداتیوو ارزیابی کرد که آیا ژرانیول می تواند به عنوان یک عامل پیشگیرانه عمل کند یا خیر.

آلبومین، کراتینین و نیتروژن اوره خون (BUN) شاخص های قابل اعتمادی هستندآسیب کلیه[11]. بافت طبیعی کلیه اجازه نمی دهد آلبومین از جریان خون به ادرار خارج شود، در حالی که کراتینین و BUN را از جریان خون به داخل ادرار فیلتر می کند. با این حال، در صورت اختلال عملکرد کلیه، این فرآیندها مختل می شوند: آلبومین از طریق ادرار دفع می شود و در نتیجه غلظت سرمی کاهش می یابد و کراتینین و BUN به درستی فیلتر نمی شوند و در نتیجه مقادیر سرمی افزایش می یابد [11]. در کار فعلی، درمان Dox باعث افزایش کراتینین سرم و BUN در کنار کاهش قابل توجه آلبومین شد. نتایج با گزارش های منتشر شده مطابقت دارد [11. ما همچنین مکمل‌های پیشگیرانه با ژرانیول را برای کاهش این تغییرات یافتیم که نشان می‌دهد ژرانیول ممکن است از آسیب کلیوی ناشی از Dox جلوگیری کند.

پراکسیداسیون لیپیدی مشخصه استرس اکسیداتیو است و بسیاری از تحقیقات نشان داده اند که تجویز Dox منجر به افزایش سطح مالون آلدئید (MDA)، محصول پراکسیداسیون لیپیدی می شود [7،43]. ما تأیید کردیم که Dox باعث افزایش قابل توجهی در سطوح MDA در بافت کلیه شد و علاوه بر این، پیش مکمل‌سازی با ژرانیول به طور قابل توجهی و وابسته به دوز این اثر را کاهش داد. یونس و همکارانش نیز نشان دادند که ژرانیول به طور قابل توجهی سطوح MDA را در متوترکسات کاهش می دهد.آسیب کلیه. این نتایج نشان می دهد که ژرانیول ممکن است در درمان آسیب کلیوی با واسطه Dox به دلیل مهار قوی پراکسیداسیون لیپیدی موثر باشد.

موجودات زنده از آنتی اکسیدان های آنزیمی و غیر آنزیمی مختلف برای حذف رادیکال های آزاد استفاده می کنند و در نتیجه دفاع موثری در برابر ROS ارائه می دهند. عوامل آنتی اکسیداتیو ضروری عبارتند از آنتی اکسیدان غیر آنزیمی GSH و آنالوگ های اکسید شده آن. GSH به طور مستقیم با رادیکال های آزاد از طریق گروه آن-SH تعامل دارد. در مطالعه حاضر، یک تزریق داکس به طور آشکاری مخزن GSH را کاهش داد و پیش تیمار ژرانیول توانست این اثر را معکوس کند. این یافته ها توسط مطالعات منتشر شده قبلی پشتیبانی می شود.

تولید ROS در سلول ها نیز با کاهش آنزیم های آنتی اکسیداتیو مرتبط است. به طور خاص، آنزیم‌های CAT و گلوتاتیون ردوکتاز (GR) تبدیل H2O2 و سایر ROS به H2O2 و O را تسریع می‌کنند، در حالی که SOD به تبدیل رادیکال‌های آزاد آنیون سوپراکسید به H2O2 کمک می‌کند، که متعاقباً توسط CAT یا GPx حذف می‌شوند [45]. ما دریافتیم که بیان همه آنزیم‌های آنتی‌اکسیدان مورد بررسی، یعنی SOD، CAT و GPx{8}} در گروه Dox در مقایسه با گروه شاهد کاهش آماری داشت. با این حال، ژرانیول قبل از تجویز، کاهش سطح SOD، GPx{11}} و CAT ناشی از Dox را نجات داد، احتمالاً با از بین بردن ROS از طریق توانایی آنتی اکسیدانی خود.

آنزیم‌های مختلفی که از سلول‌ها در برابر استرس اکسیداتیو مضر محافظت می‌کنند با مسیر Nrf2 مرتبط هستند و نشان داده شده است که تحریک مسیر Nrf2/Ho{2}} به طور قابل توجهی بهبود می‌یابد.عملکرد کلیه[21،48،49]. برای تأیید مکانیکی اثر محافظتی ژرانیول، سطوح Nrf2 و Ho{4}} را در رابطه با تجویز Dox بررسی کردیم. ما متوجه شدیم که سطوح این پروتئین ها در گروه Dox به طور قابل توجهی پایین تر از گروه کنترل است که مطابق با مطالعات قبلی است. در همین حال، مکمل ژرانیول با افزایش بیان mRNA و پروتئین اعضای مسیر سیگنالینگ Nrf2/Ho{7}} که مطابق با یافته‌های یونس و همکاران است، از آسیب کلیوی مرتبط با Dox جلوگیری کرد.

در نهایت، التهاب یکی از محتمل ترین علل آسیب کلیه با واسطه داکس است. القای مسیر فاکتور هسته ای کاپا B(NF-kB) نقش بسیار مهمی در پاتوفیزیولوژی التهاب کلیه با واسطه داکس دارد [50]، با NF-kB یک فاکتور رونویسی است که بیان چندین ژن مرتبط را تنظیم می کند. با التهاب [51]، مانند آنهایی که TNF-، IL{7}} و IL-6 را کد می‌کنند [52،53]. در اینجا، حیوانات تحت درمان با Dox سطوح افزایش یافته TNF-، IL{13}}، و NfkB-p65 [54] را نشان دادند، در حالی که مکمل ژرانیول پیش از مصرف این واسطه‌های التهابی را به شیوه‌ای وابسته به دوز کاهش داد. این داده ها نشان می دهد که اثر ضد التهابی ژرانیول ممکن است به دلیل اثر مهاری در برابر مسیر NF-kB باشد.

یکی دیگر از عوامل مهم در علت سمیت کلیوی با واسطه Dox، آپوپتوز است که توسط تعادل پروتئین های پرو آپوپتوز و ضد آپوپتوز تنظیم می شود. کاسپاز{3}} و Bax پروتئین‌های طرفدار آپوپتوز هستند که تخلخل غشای میتوکندری را افزایش می‌دهند و سیتوکروم c را قادر می‌سازند از شکاف بین غشایی نشت کند و از طریق مسیر آپوپتوز ذاتی باعث آپوپتوز شود. در مقابل، Bcl-2 یک پروتئین ضد آپوپتوز واقع در غشای خارجی میتوکندری است که به حفظ ساختار میتوکندری کمک می کند و از نشت سیتوکروم C به داخل سیتوپلاسم جلوگیری می کند و از آپوپتوز جلوگیری می کند. بنابراین، نسبت Bax و Bcl{7}} بر بقای سلول تأثیر می‌گذارد [11،{9}}،55]. در کار فعلی، درمان Dox منجر به افزایش قابل توجهی از کاسپاز بریده شده-3 و Bax در کنار آن شد. کاهش چشمگیر بیان Bcl{13}}، الگویی که در ادبیات منتشر شده گزارش شده است [11]. قبل از مکمل ژرانیول به طور قابل توجهی این تغییر مرتبط با Dox در تعادل پروتئین های آپوپتوز را کاهش داد.

در نهایت، ما یک بررسی هیستوپاتولوژیک انجام دادیم تا بررسی کنیم که آیا تجویز Dox باعث آسیب کلیوی می شود یا خیر. این معاینه تأیید کرد که تجویز Dox منجر به احتقان عروق خونی کلیه، التهاب بینابینی شامل لنفوسیت‌ها و خونریزی بین لوله‌ها می‌شود. در همین حال، قبل از مکمل ژرانیول به وضوح آسیب بافتی ناشی از Dox را کاهش داد.

در نتیجه، داده‌های به‌دست‌آمده از تحقیق حاضر، برای اولین بار، اثرات مفید ژرانیول را در برابر سمیت کلیوی با واسطه Dox نشان می‌دهد که احتمالاً با کاهش استرس اکسیداتیو، التهاب و آسیب بافت آپوپتوز از طریق مدولاسیون NF-kB تحقق می‌یابد. ، مسیرهای Bax/Bcl-2 و Nrf2/Ho-1. با این حال، مکانیسم حفاظتی دقیق ژرانیول باید مشخص شود. مطالعات بیشتری برای مشخص کردن جزئیات اقدام آن مورد نیاز است.