Party1: خواص ضد التهابی و آنتی اکسیدانی ارقام ارزن انگشتی (Eleusine Coracana (L.) Gaertn.) کشت شده در سریلانکا

برای اطلاعات بیشتر. مخاطبtina.xiang@wecistanche.com

شیوع بیماری های ناشی از التهاب و استرس اکسیداتیو در سراسر جهان در حال افزایش است و تقاضای فزاینده ای برای منابع جدید ایجاد می کند.ضد التهابعوامل وآنتی اکسیدان ها. این مطالعه بر روی تعیین آراشیدونات در شرایط آزمایشگاهی {{0}}لیپواکسیژناز (A5-LOX)، گزانتین اکسیداز (XO)، هیالورونیداز، فعالیت های مهاری انفجار اکسیداتیو و خواص آنتی اکسیدانی Ravi، Rawana متمرکز بود. و ارقام ارزن انگشتی اوشادا با استفاده از عصاره اتانولی و متانولی. در بین تمام عصاره‌ها، عصاره متانولی اوشادا بیشترین فعالیت بازدارندگی A5-LOX (ICsvalue∶ 484.42ug/ml) و XO (ICsvalue∶764.34ug/ml) را نشان داد. همه عصاره ها کمتر از 5 درصد فعالیت بازدارندگی هیالورونیداز را در غلظت 1 میلی گرم در میلی لیتر نشان دادند، عصاره های متانولی پتانسیل بازدارندگی متوسطی را بر روی گونه های فعال اکسیژن (ROS) تولید شده از فاگوسیت های کل خون، با مقادیر ICs در محدوده نشان دادند. بین 26.9 و 27.7 ug/ml، در مقایسه با ایبوپروفن (IC.value: 11.18ug/ml). همه عصاره‌ها در مقایسه با ایبوپروفن (ICsvalue: 2.47 ug/ml) و مقادیر IC عصاره‌های متانولی و اتانولی از 0.29 تا 0.47 ug/mg/ml و 11.17، از نوتروفیل‌های پلی‌مورفونوکلئر جدا شده از خون انسان، مهار قوی را نشان دادند. به ترتیب. همه عصاره ها دارای مقادیر قابل توجهی ترکیبات فنلی بودند از جملهفلاونوئیدهاو پتانسیل حذف کاتیونهای 2,2'-azino-bis({{4}ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid (ABTS,2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl DPPH) و رادیکال های اکسیژن. علاوه بر این، آنها قادر به کاهش یون‌های فلزی و یون‌های فلزی کلات شدند که واکنش‌های تولید رادیکال را خاتمه می‌دهند. این اولین گزارش از خواص بازدارندگی A{10}}LOX، XO، هیالورونیداز و ترکیدگی اکسیداتیو هر عصاره از هر گونه ارزن انگشتی است که در سریلانکا کشت می‌شود. این یافته ها پتانسیل استفاده از این عصاره ارزن انگشتی را به عنوان منابع طبیعی کاندیدای داروهای ضدالتهابی نشان داد. علاوه بر این، یافته ها نشان داد که گونه های راوی، راوانا و اوشادا منابع خوبی از آنتی اکسیدان ها هستند. بنابراین، مصرف این گونه های ارزن انگشتی به طور منظم ممکن است نقش مهمی در پیشگیری و مدیریت رژیم غذایی بیماری های مرتبط با استرس اکسیداتیو داشته باشد.

برای آشنایی با محصولات بیشتر اینجا را کلیک کنید

1. مقدمه

التهابیک واکنش دفاعی استمصونسیستمی برای از بین بردن محرک های مضر مانند پاتوژن ها، سلول های آسیب دیده و تحریکات آلرژیک یا شیمیایی و همچنین شروع فرآیند بهبودی. اگر چه التهاب یک پاسخ طبیعی است اگر کنترل نشود، التهاب بیش از حد منجر به بسیاری از بیماری های حاد و مزمن می شود. در حال حاضر، شیوع بیماری های ناشی از التهاب در سراسر جهان در حال افزایش است و تقاضای فزاینده ای برای عوامل ضد التهابی جدید و مؤثر ایجاد می کند [1، 2].

آراشیدونات 5-لیپوکسیژناز (A5-LOX) یک آنزیم کلیدی است که در بیوسنتز واسطه‌های قوی اختلالات التهابی و واکنش‌های آلرژیک نقش دارد. تشکیل لکوترین ها از اسید آراشیدونیک را کاتالیز می کند [3]. لوکوترین ها واسطه های درون زا در پاتوژنز تعدادی از بیماری های التهابی از جمله آسم، رینیت آلرژیک، برونشیت مزمن، آرتریت روماتوئید، بیماری التهابی روده و واکنش های آلرژیک هستند [3،4]. بنابراین، مهار A5-LOX در پیشگیری و درمان انواع اختلالات التهابی مهم است.

گزانتین اکسیداز (XO) اکسیداسیون هیپو گزانتین به گزانتین و گزانتین به اسید اوریک را کاتالیز می کند [5]. مهارکننده های XO بیوسنتز اسید اوریک را مسدود می کنند و در نتیجه سطح اسید اوریک و همچنین استرس اکسیداتیو عروقی را کاهش می دهند. در طی عمل کاتالیزوری XO، گونه‌های فعال اکسیژن (ROS) تشکیل می‌شوند و بنابراین، XO در سایر اختلالات التهابی نیز نقش بیماری‌زایی دارد. در نتیجه، مهارکننده‌های XO در درمان اختلالات التهابی مختلف همراه با عمل کاتالیزوری XO مهم هستند [2،5].

هیالورونیداز یک آنزیم لیزوزومی است که هیدرولیز موکوپلی ساکاریدهایی مانند اسید هیالورونیک را کاتالیز می کند. در آرتریت روماتوئید، هیالورونیداز بیش از حد اسید هیالورونیک را تجزیه می کند و مقدار و وزن مولکولی آن را کاهش می دهد و علائم آرتریت ایجاد می کند [6]. مهار تخریب اسید هیالورونیک در کنترل شرایط پاتولوژیک با واسطه هیالورونیداز حیاتی و ضروری است [7].

در شرایط التهابی، سلول های ایمنی به محل التهاب جذب می شوند. در طول واکنش‌های دفاعی و ایمونولوژیک، اکسیدازهای NADPH ساکن در سلول‌های ایمنی فعال می‌شوند و ROS را در مقادیر زیادی تولید می‌کنند و یک انفجار اکسیداتیو ایجاد می‌کنند [1، 8]. مقادیر کم و متوسط ​​ROS در فرآیندهای فیزیولوژیکی مختلف مفید است. با این حال، تولید بیش از حد ROS عملکردهای سلولی را از تنظیم خارج می کند که به نوبه خود شرایط التهابی را افزایش می دهد [8،9]. بنابراین، مهار انفجار اکسیداتیو ناشی از ROS یک درمان بالقوه برای پیشگیری و مدیریت بیماری‌های ناشی از التهاب است.

در طول فسفوریلاسیون اکسیداتیو،رادیکال های آزاداز جمله ROS به عنوان محصولات جانبی تشکیل می شوند [10].علاوه بر متابولیسم سلولی طبیعی، بسیاری از عوامل دیگر نیز وجود دارند که منجر به تشکیل رادیکال های آزاد می شوند و اگر سرعت تولید رادیکال های آزاد از سرعت خنثی سازی بیشتر شود، استرس اکسیداتیو ایجاد می شود. ایجاد می شود و به طور قابل توجهی به همه بیماری های التهابی کمک می کند. از آنجایی که آنتی اکسیدان ها قادر به جلوگیری از تشکیل رادیکال های آزاد و فرونشاندن رادیکال های آزاد هستند، تعادل بین آنتی اکسیدان ها و رادیکال های آزاد برای حفظ عملکردهای فیزیولوژیکی به درستی ضروری است [8،11،12].

ارزن انگشتی (Eleusine coracana(L.)Gaertn.) مهمترین ارزن کوچک در مناطق استوایی است و چندین خواص درمانی ارزن انگشتی قبلا گزارش شده است [13-17]. با این حال، برای انواع ارزن انگشتی که در حال حاضر در سریلانکا کشت و مصرف می شود، شواهد علمی در مورد خواص درمانی آن وجود ندارد.

و مزایای سلامتی بالقوه برای مصرف کنندگان. در نتیجه، مطالعه خواص ضد التهابی و آنتی اکسیدانی انواع ارزن انگشتی سریلانکا و شناخت پتانسیل آنها برای بهبود وضعیت تغذیه و سلامت مصرف کنندگان ضروری است. شیوع بیماری های ناشی از التهاب و استرس اکسیداتیو در سراسر جهان در حال افزایش است و تقاضای نوظهور برای منابع جدید عوامل ضد التهابی و آنتی اکسیدان ها را ایجاد می کند. با این پیشینه، مطالعه حاضر بر ارزیابی ارقام ارزن انگشتی سریلانکا برای خواص ضدالتهابی آزمایشگاهی از نظر A{7}}LOX، XO، هیالورونیداز، فعالیت های مهاری انفجار اکسیداتیو و خواص آنتی اکسیدانی با استفاده از سنجش های مختلف آنتی اکسیدانی متمرکز بود. .

2. مواد و روشها

2.1. جمع آوری و آماده سازی نمونه. ارقام ارزن انگشتی که توسط دپارتمان کشاورزی برای کشت در سریلانکا توصیه می شوند، یعنی راوی، راوانا و اوشادا، از موسسه تحقیقات و توسعه محصولات مزرعه (FCRDI)، Mahailuppallama، سریلانکا جمع آوری شدند. این واریته‌ها در کرت‌های آزمایشی در منطقه خشک پایین کشور، در FCRDI، Mahailuppallama کشت شدند و بذرها توسط خدمات گواهی بذر وزارت کشاورزی سری‌لانکا تأیید شدند.

دانه های ارزن انگشتی پوسته پوسته شدند (TM 05C، Satake Cor-poration، ژاپن)، و آرد از غلات کامل با آسیاب کردن (Pulverisette 14، Fritsch، آلمان) و عبور از یک الک 0.5 میلی متری به دست آمد. آرد غلات کامل با اتانول و متانول به طور جداگانه استخراج شد. آرد غلات کامل (100 گرم) با حلال (400 میلی لیتر) یک شبه در دمای اتاق (2±28 درجه) با استفاده از همزن مغناطیسی استخراج شد و با دور 4000 به مدت 20 دقیقه سانتریفیوژ شد. مایع رویی به طور جداگانه جمع آوری شد، و باقی مانده دو بار با استفاده از شرایط یکسان استخراج شد. مواد رویی با استفاده از یک اواپراتور چرخشی (R{12}}، Büchi Labortechnik AG، سوئیس) تحت فشار کاهش یافته در 40 درجه تا خشک شدن، ترکیب و تبخیر شدند. عصاره های بدون حلال در ظروف شیشه ای بدون هوا در درجه{14} نگهداری می شوند تا زمانی که برای تجزیه و تحلیل استفاده شوند.

2.2. آنزیم ها، مواد شیمیایی و تجهیزات. معرف فنل Folin-Ciocalteu، آلومینیوم کلرید، 2،4، 6-Tri(2-pyridyl)-s-triazine (TPTZ)، 2،2'-azobis (2-amidinopropane) dihydrochloride (AAPH)، 2،2-دی فنیل-1-پیکریل هیدرازیل (DPPH)، کوئرستین،6-هیدروکسی-2،5،7،{18}}تترا متیل کرومان{19} }اسید کربوکسیلیک (Trolox)، اتیلن دی آمین تترا استیک اسید (EDTA)، 2،2'-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-}}}}} ethylbenzothiazoline-6-}}}}} ethylbenzothiazoline-6-}}}}} ethylbenzothiazoline-6-}}}}}} ethylbenzothiazoline-6-}}}}}} ethylbenzothiazoline, diammonium salt (ABTS)، فلورسین،3-( 2-پیریدیل)-5،6-دی فنیل-1،2،{32}}تریازین-p، نمک مونوسدیم اسید پی دی سولفونیک

هیدرات (فروزین)، آراشیدونات 5-لیپوکسیژناز، اسید لینولئیک، بایکالئین، گزانتین اکسیداز، گزانتین، آلوپورینول، هیالورونیداز، نمک سدیم اسید هیالورونیک، p-dimethylaminobenzaldehyde، اسید گالیک، اسید تانیک سولفن دی، خرید از سیگما آلدریچ، MO، ایالات متحده آمریکا. HBSs* plus و HBSS از Thermo Fisher Sci-entific Inc.، ماساچوست، ایالات متحده آمریکا خریداری شدند. Zymosan از Wako Pure Chemical Industries Ltd.، اوزاکا، ژاپن خریداری شد.

Luminol (3-aminophthalhydrazide) از Alfa Aesar GmbH & Co KG، کارلسروهه، آلمان خریداری شد. محیط جداسازی لنفوسیت از MP Biomedicals, Inc., Ohio, USA خریداری شد. تمام مواد شیمیایی و معرف های دیگر مورد استفاده در آزمایش ها از ACS، HPLC و گریدهای تحلیلی بودند. برای تعیین ظرفیت جذب رادیکال اکسیژن، از یک میکروپلیت خوان فلورسانس (SpectraMax-Gemini EM، Molec-ular Devices Inc.، USA) استفاده شد. برای سنجش نورتابی شیمیایی، از یک لومینومتر (Luminoskan RS، Labsystems، فنلاند) استفاده شد. برای سایر سنجش‌های زیستی، از یک میکروپلیت‌خوان (Spectra-Max Plus384، Molecular Devices Inc، ایالات متحده آمریکا) استفاده شد.

2.3. تعیین محتوای فنلی کل. محتوای فنلی کل (TPC) بر اساس روش Folin-Ciocalteu 【18】 تعیین شد. عصاره ارزن انگشتی (2{12}}ul) با 110 لیتر از معرف فولین-سیوکالتیو 10 بار رقیق شده تازه تهیه شده و 70 لیتر محلول کربنات سدیم (10 درصد وزنی بر حجم) مخلوط شد و به مدت 30 دقیقه در دمای اتاق (RT) انکوبه شد. میزان جذب در طول موج 765 نانومتر اندازه گیری شد. از اسید گالیک برای رسم منحنی استاندارد (y{10}}.0532x به علاوه 0.0339;r=0.9992) استفاده شد و TPC به عنوان میلی گرم معادل اسید گالیک (GAE) در هر 100 گرم آرد در یک محیط خشک محاسبه شد. بر اساس وزن

2.4. تعیین محتوای فلاونوئید کل. محتوای فلاونوئید کل (TFC) بر اساس روش رنگ سنجی کلرید آلومینیوم [19] تعیین شد. عصاره ارزن انگشتی (100 میکرولیتر) با محلول کلرید آلومینیوم (2 درصد w/v، 100ul) مخلوط شد، به مدت 10 دقیقه در RT انکوبه شد و جذب در 415 نانومتر اندازه‌گیری شد. از کوئرستین برای رسم منحنی استاندارد (y=0.0349x-0.2091) استفاده شد. r²=0.9974）، و TFC به عنوان میلی گرم معادل کوئرستین در هر 100 گرم آرد بر اساس وزن خشک محاسبه شد.

2.5. تعیین فعالیت رادیکال DPPH. توانایی پاکسازی رادیکال‌های DPPH با توجه به روشی که توسط Blois [20] شرح داده شد، تعیین شد. عصاره ی عصاره ی انگشتی (50 ul) با 90 میکرولیتر متانول و 60 لیتر محلول DPPH (0.02 درصد وزنی بر حجم) مخلوط شد و در RT در تاریکی به مدت 10 دقیقه انکوبه شد. مقادیر جذب نمونه (As) و شاهد (Ac) در طول موج 517 نانومتر اندازه‌گیری شد. Trolox به عنوان استاندارد استفاده شد. فعالیت مهار رادیکال DPPH به عنوان درصد مهار با استفاده از رابطه (1) محاسبه شد. مقدار ICs با استفاده از نمودار دوز-پاسخ محاسبه شد.

2.6. تعیین فعالیت مهار رادیکال کاتیون ABTS. توانایی حذف رادیکال های کاتیونی ABTS با توجه به روشی که توسط Re و همکارانش توضیح داده شد تعیین شد. [21] با برخی تغییرات. محلول رادیکال کاتیونی ABTS با انکوبه کردن 10 میلی‌گرم ABTS در 5/2 میلی‌لیتر پرسولفات پتاسیم در دمای 37 درجه سانتی‌گراد در تاریکی به مدت 16 ساعت و رقیق کردن 7 بار با 50 میلی‌مولار بافر فسفات سالین (PH 7.4) تهیه شد. عصاره ارزن انگشتی (12.5 ul) با بافر فسفات سالین (147.5 ul) و محلول رادیکال کاتیونی ABTS تازه تهیه شده (40 ul) مخلوط شد و در RT در تاریکی به مدت 10 دقیقه انکوبه شد. مقادیر جذب نمونه (As) و شاهد (Ac) در طول موج 734 نانومتر اندازه‌گیری شد. Trolox به عنوان استاندارد استفاده شد. فعالیت مهار رادیکال کاتیون ABTS به عنوان درصد مهار با استفاده از معادله (2) محاسبه شد. مقدار ICs با استفاده از نمودارهای دوز-پاسخ محاسبه شد.

2.7. تعیین ظرفیت جذب رادیکال اکسیژن (ORAC). ORAC با توجه به روش توصیف شده توسط Ou و همکاران ارزیابی شد.[22] محلول های فلورسئین (4.8uM) و AAPH (40mg/ml) در بافر فسفات 75mM (pH 7.4) تهیه شد. عصاره ارزن انگشتی (10 میکرولیتر) با 40 لیتر بافر فسفات و 100 لیتر فلورسئین مخلوط شد و در دمای 37 درجه به مدت 10 دقیقه انکوبه شد. AAPH (50ul) اضافه شد، و فروپاشی فلورسین در طول موج های تحریک و انتشار 494 نانومتر و 535 نانومتر، به ترتیب، در 37 درجه به مدت 35 دقیقه در فواصل یک دقیقه با استفاده از یک میکروپلیت خوان فلورسانس اندازه گیری شد. Tro-lox به عنوان استاندارد استفاده شد. مقدار ناحیه زیر منحنی (AUC) نمونه (AUC)، کنترل (AUC) و Trolox (AUC-) ثبت شد. مقدار ORAC با استفاده از رابطه (3) که در آن conc محاسبه شد. مخفف تمرکز نتایج به صورت mg Trolox معادل در 100 گرم آرد بر اساس وزن خشک بیان شد.

2.8. تعیین فعالیت کیلینگ یون آهن (FIC).. توانایی کلات کردن یون های آهن با توجه به روش توصیف شده توسط کارتر [23] تعیین شد. عصاره ارزن انگشتی (100 میکرولیتر) با 1 میلی مولار محلول سولفات آهن (20 میکرولیتر) و 40 لیتر آب مقطر مخلوط شد. سپس، 1 میلی مولار محلول فروزین (40 ul) اضافه شد و به مدت 10 دقیقه در RT انکوبه شد. مقادیر جذب نمونه (As) و شاهد (Ac) در طول موج 562 نانومتر ثبت شد. EDTA به عنوان استاندارد استفاده شد. فعالیت FIC به عنوان درصد کیلاسیون با استفاده از رابطه (4) محاسبه شد.

2.9. تعیین قدرت آنتی اکسیدانی کاهنده آهن (FRAP). FRAP با توجه به روشی که توسط Benzine و Szeto [24] شرح داده شد با برخی تغییرات تعیین شد. معرف FRAP با مخلوط کردن 3{18}} 0 میلی مولار بافر استات (pH 3.6)، 20 میلی مولار کلرید آهن و 10 میلی مولار TPTZ در نسبت 10: 1: 1 و انکوباتور در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 10 دقیقه تهیه شد. عصاره ارزن انگشتی (20 میکرولیتر) با 30 لیتر بافر استات و 150 لیتر از معرف FRAP تازه تهیه شده مخلوط شد، در RT به مدت 8 دقیقه انکوبه شد و جذب در 600 نانومتر ثبت شد. از Trolox برای رسم منحنی استاندارد (y=0.17x به علاوه 0.15;产=1.00) استفاده شد، و FRAP به عنوان معادل mg Trolox در هر 100 گرم آرد بر اساس وزن خشک محاسبه شده است.

2.10. تعیین فعالیت بازدارنده A5-LOX. A{0}}فعالیت بازدارندگی LOX با توجه به روشی که توسط Tappel [25] توضیح داده شده با برخی تغییرات ارزیابی شد. عصاره ارزن انگشتی (1{12}} ul) با 115 لیتر بافر فسفات سدیم 100 میلی‌مولار (pH 8.0) و 50 لیتر از محلول A{8}}LOX (5000U/ml) مخلوط شد و به مدت 10 دقیقه در RT انکوبه شد. واکنش با افزودن 25 میکرومولار اسید لینولئیک 0.08 میلی مولار آغاز شد. تغییر جذب در 234 نانومتر در فواصل 1 دقیقه به مدت 10 دقیقه در RT ثبت شد و مقادیر حداکثر سرعت (Vmxk) نمونه (Vmaxs) و شاهد (Vmaxc) ثبت شد. Baicalein به عنوان استاندارد استفاده شد. A{17}}فعالیت بازدارندگی LOX به عنوان بازداری درصد سن با استفاده از معادله (5) محاسبه شد. مقدار ICs با استفاده از نمودارهای دوز-پاسخ محاسبه شد.

2.11. تعیین فعالیت بازدارنده XO. فعالیت مهاری XO با توجه به روش توصیف شده توسط لی و همکاران تعیین شد. [26] با برخی تغییرات. عصاره ارزن انگشتی (1{7}} اول) با 15 میکرومولار بافر فسفات سدیم 50 میلی‌مولار (pH 7.4) و 20 لیتر XO (0.15U/ml) مخلوط شد و به مدت 10 دقیقه در RT انکوبه شد. واکنش با افزودن 20 میکرومولار گزانتین 0.1 میلی مولار آغاز شد. تغییر جذب در 295 نانومتر در فواصل دقیقه به مدت 15 دقیقه در RT ثبت شد و مقادیر Vmax نمونه (Vmaxs) و شاهد (Vmaxc) ثبت شد. آلوپورینول به عنوان استاندارد استفاده شد. فعالیت بازدارندگی XO به عنوان درصد مهار با استفاده از رابطه (6) محاسبه شد. مقدار ICs با استفاده از نمودار دوز-پاسخ محاسبه شد.

2.12. تعیین فعالیت مهاری هیالورونیداز. فعالیت مهاری هیالورونیداز بر اساس روش توصیف شده توسط Sahasrabudhe و Dedhar [27] با برخی تغییرات ارزیابی شد. عصاره ارزن انگشتی (5{15}}ul) با 1{18}} واحد هیالورونیداز (8400U/ml) مخلوط شد و در دمای 37 درجه به مدت 10 دقیقه انکوبه شد. آنزیم با افزودن 20 لیتر کلرید کلسیم (12.5 میلی‌مولار) و انکوبه کردن در دمای 37 درجه به مدت 10 دقیقه فعال شد. واکنش با افزودن هیالورونات سدیم (50 ul) آغاز شد و در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 40 دقیقه انکوبه شد. سپس، 10 میکرولیتر 0.9 مولار هیدروکسید سدیم و 20 میکرولیتر سدیم بورات 0.2 مولار اضافه شد و در 100 درجه به مدت 3 دقیقه انکوبه شد. پس از خنک شدن تا RT، 50 میکرومولار 67 میلی مولار p-dimethylaminobenzaldehyde اضافه شد و در دمای 37 درجه به مدت 10 دقیقه انکوبه شد. مقادیر جذب نمونه (As) و شاهد (Ac) در طول موج 585 نانومتر اندازه‌گیری شد. اسید تانیک به عنوان استاندارد استفاده شد. فعالیت مهاری هیالورونیداز به عنوان درصد مهار با استفاده از رابطه (7) محاسبه شد.

2.13. تعیین فعالیت های بازدارنده انفجار اکسیداتیو. پتانسیل‌های ضد التهابی از نظر فعالیت‌های بازدارنده انفجار اکسیداتیو در خون کامل انسان و نوتروفیل‌های پلی‌مورفونوکلئر جدا شده با استفاده از روش لومینسانس شیمیایی افزایش‌یافته لومینول [28، 29] با برخی تغییرات تعیین شد. آزمایش‌ها در مرکز تحقیقات دارویی و پزشکی مولکولی دکتر پنجوانی، مرکز بین‌المللی علوم شیمیایی و بیولوژیکی، دانشگاه کراچی، پاکستان انجام شد و این مؤسسه دارای مجوز اخلاقی برای مطالعات روی خون انسان از کمیته اخلاق مستقل، ICCBS، UoK است. . شماره:ICCB-S/IEC-008-BC-2015/Protocol/1.0.

2.13.1. تعیین فعالیت مهاری انفجار اکسیداتیو در خون کامل انسان. خون انسان (1 میلی‌لیتر) از طریق سوراخ کردن ورید در یک لوله هپارینه شده از یک داوطلب سالم غیرسیگاری که بیش از یک هفته هیچ دارو یا مکملی مصرف نکرده بود، به‌طور غیرعادی جمع‌آوری شد و (رقت 1:20) با HBS به علاوه * (Hanks Balanced) رقیق شد. محلول نمک حاوی کلسیم و منیزیم). عصاره ارزن انگشتی (25 لیتر) با خون کامل رقیق شده (25 ul) مخلوط شد و در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه انکوبه شد. سپس 25 میکرولیتر زایموسان اپسونیزه شده سرم و 25 لیتر لومینول اضافه شد. تولید ROS انفجار اکسیداتیو به مدت 50 دقیقه با استفاده از یک لومینومتر با اسکن های مکرر در فواصل 30 ثانیه و زمان اندازه گیری نقطه 1 ثانیه بررسی شد. ایبوپروفن به عنوان داروی استاندارد استفاده شد. درصد بازداری با استفاده از رابطه (8) محاسبه شد.

که در آن RLU قرائت لومینومتر بر حسب واحدهای نور نسبی (RLU) برای کنترل است و RLU قرائت لومینومتر در RLU برای نمونه است. مقدار ICs با استفاده از نمودار دوز-پاسخ محاسبه شد.

2.13.2. تعیین فعالیت مهاری انفجار اکسیداتیو در نوتروفیل‌های پلی‌مورفونکلئر جدا شده. خون کامل انسان (10 میلی لیتر) با حجم های مساوی از HBSS (محلول نمک متعادل هنکس، بدون کلسیم و منیزیم) و محیط جداسازی لنفوسیت (LSM) مخلوط شد و اجازه داد تا گلبول های قرمز به مدت 30 دقیقه در RT ته نشین شوند. سپس، پلاسما به دقت روی LSM گذاشته شد و در 400×g به مدت 20 دقیقه در RT سانتریفیوژ شد. مایع رویی برداشته شد. گلبول های قرمز در گلوله حاصل با مخلوط کردن با آب سرد دیونیزه شده لیز شده، با HBSS7 سرد مخلوط شده و در 300×g به مدت 10 دقیقه در دمای 4 درجه سانتریفیوژ شدند. گلوله دو بار شسته شد و زنده ماندن نوتروفیل های پلی مورفونکلئر حاصل با استفاده از روش حذف تریپان بلو بررسی شد. غلظت سلول ها بر روی 10×1 درجه سلول در میلی لیتر تنظیم شد. نوتروفیل‌های پلی‌مورفونکلئر جدا شده (25 میکرولیتر) با عصاره ارزن انگشتی (25 ul) مخلوط شدند و به مدت 15 دقیقه در دمای 37 درجه انکوبه شدند. سپس، 25 میکرولیتر زایموسان اپسونیزه شده سرم و 25 لیتر لومینول اضافه شد و تولید ROS انفجاری اکسیداتیو به مدت 50 دقیقه با استفاده از یک لومینومتر با اسکن های مکرر در فواصل 30 ثانیه و زمان اندازه گیری نقاط ls کنترل شد. ایبوپروفن به عنوان داروی استاندارد استفاده شد. درصد بازداری با استفاده از رابطه (8) محاسبه شد.

2.14. تحلیل آماری. داده های هر آزمایش با استفاده از نرم افزار IBM SPSS Statistics (نسخه 20) مورد تجزیه و تحلیل آماری قرار گرفت و نتایج به صورت میانگین ± استاندارد خطا (SE) بیان شد. معناداری آماری در سطح اطمینان 95 درصد تعیین شد. برای تعیین تفاوت بین ارقام و عصاره ها از آنالیز واریانس یک طرفه (ANOVA) و آزمون توکی استفاده شد. برای تحلیل همبستگی از ضریب همبستگی پیرسون استفاده شد.

طبقه بندی التهاب

التهاب حاد: عمدتاً با قرمزی، تورم، درد و غیره مشخص می شود، یعنی التهاب عمدتاً از واکنش سیستم عروقی تشکیل شده است.

التهاب مزمن: عمدتاً برخی از بیماری های التهابی مزمن مانند گاستروانتریت مزمن، هپاتیت مزمن، التهاب مکرر زنان و سایر بیماری ها.

علت التهاب

هر عاملی که می تواند باعث آسیب بافت شود می تواند عامل التهاب باشد، یعنی عوامل التهابی را می توان به دسته های زیر دسته بندی کرد:

(1) عوامل بیولوژیکی

باکتری ها، ویروس ها، مایکوپلاسماها، قارچ ها، اسپیروکت ها و انگل ها شایع ترین علل التهاب هستند. التهاب ناشی از پاتوژن های بیولوژیکی نیز عفونت نامیده می شود. اگزوتوکسین ها و اندوتوکسین های تولید شده توسط باکتری ها می توانند به طور مستقیم به بافت ها آسیب بزنند. تکثیر ویروس در سلول های آلوده منجر به نکروز سلولی می شود. پاتوژن های آنتی ژنی خاصی از طریق پاسخ های ایمنی القایی پس از عفونت، مانند عفونت های انگلی و سل، به بافت ها آسیب می رسانند.

2) عوامل فیزیکی

دمای بالا، دمای پایین، مواد رادیواکتیو، اشعه ماوراء بنفش و غیره و آسیب های مکانیکی.

(3) عوامل شیمیایی

مواد شیمیایی برون زا مانند اسید قوی، قلیایی قوی و سقز. مواد سمی درون زا مانند محصولات تجزیه بافت نکروزه و متابولیت هایی مانند اوره در شرایط پاتولوژیک خاص در بدن انباشته می شوند.

(4) جسم خارجی

اجسام خارجی که از طرق مختلف وارد بدن انسان می شوند مانند فلزات مختلف، بقایای چوب، گرد و غبار موجود در هوا، بخیه های جراحی و غیره به دلیل خاصیت آنتی ژنی متفاوت می توانند درجات مختلفی از پاسخ های التهابی ایجاد کنند.

(5) بافت نکروزه

عللی مانند ایسکمی یا هیپوکسی می تواند باعث نکروز بافتی شود که یک عامل التهابی بالقوه است. نوارهای هموراژیک احتقانی و نفوذ سلول های التهابی در لبه های انفارکتوس تازه هر دو تظاهرات التهاب هستند.

(6) آلرژی

هنگامی که پاسخ ایمنی بدن غیرطبیعی باشد، می تواند باعث پاسخ ایمنی نامناسب یا بیش از حد شود و باعث آسیب بافتی و سلولی شود و منجر به التهاب شود. مانند رینیت آلرژیک، کولیت، کهیر، سل، گلومرولونفریت و سایر بیماری ها.

آنتی بیوتیک ها باکتری کش و ضد التهاب هستند، استفاده طولانی مدت فلور طبیعی بدن انسان را از بین می برد، باکتری های خوب را از بین می برد، باعث عدم تعادل فلور روده می شود، باعث ایجاد انواع اختلالات روده و واکنش های نامطلوب می شود و باعث عفونت ثانویه، کاهش بدن می شود. مقاومت. علاوه بر این، آنتی بیوتیک ها بیشتر توسط کبد و کلیه متابولیزه می شوند و سوء مصرف آنتی بیوتیک ها به احتمال زیاد باعث آسیب به عملکرد کبد و کلیه می شود. می توانید به عبارت «در بیماران مبتلا به عملکرد ضعیف کبد و کلیه با احتیاط مصرف شود» در دستورالعمل تمام داروهای ضد التهابی توجه کنید. علاوه بر این، آنتی بیوتیک ها همچنین می توانند واکنش های آلرژیک به داروها را افزایش دهند. در سال های اخیر، شیوع بالای رینیت آلرژیک و آسم آلرژیک به سوء مصرف آنتی بیوتیک ها مرتبط است.

آزمایشات نشان داده است که عصاره سیستانچ پیپینسیس غنی از اکیناکوزید اثر بهبود خوبی بر کولیت دارد. سیستانش گلیکوزید K و پیپوزید B اثر مهاری خوبی بر ترشح نیتریک اکساید در سلول ها دارند که نشان دهنده اثر ضد التهابی خوب آن است.سیستانچیک ماده دارویی چینی با منشأ مشابه دارو و غذا است. این یکی از ده داروی گیاهی چینی در کشور من است. گنجینه ای از اعماق کویر و مقوی طبیعی است. سیستانچ سیستانچ سابقه دارویی نزدیک به 2،000 سال دارد. اولین بار در "شن نونگ ماتریا مدیکا" ضبط شد. در سال 2005، سیستانچ در "فارمکوپه جمهوری خلق چین" به عنوان یک ماده دارویی اصیل گنجانده شد. سیستانچ از زمان های قدیم یک مقوی خوب بوده است، بدون هیچ گونه سابقه سمیت، که به طور کامل ایمنی آن را ثابت می کند.