نشانگرهای کیفیت Cistanches Herba بر اساس رابطه طیف اثر آنتی اکسیدانی Ⅱ

3 نتیجه

3.1 ایجاد نقشه اثر انگشت

10 دسته از محلول های آزمایشی را مطابق روش زیر 2.1 تهیه کنید، از شرایط کروماتوگرافی زیر 2.2 برای تشخیص استفاده کنید، اثر انگشت هر دسته از نمونه ها را به دست آورید (شکل 1) و پیک شماره 11 (C11) را به عنوان پیک مرجع انتخاب کنید. اثر انگشت. فایل دیتای فاز مایع.AIA اثر انگشت محصول آزمایشی Cistanche deserticola را در نرم افزار "سیستم ارزیابی تشابه اثر انگشت کروماتوگرافی طب چینی" (نسخه 2012) وارد کنید. هفده پیک کروماتوگرافی مشترک در حالت مشترک کالیبره شدند و در مقایسه با طیف استاندارد مرجع مختلط (شکل 2)، در مجموع 10 پیک مشترک شناسایی شد.

3.2 تحقیق در مورد اثر آنتی اکسیدانی Cistanche deserticola

3.2.1 اثر Cistanche deserticola بر زنده ماندن سلول های HEK 293.

در مقایسه با سلول‌های گروه نرمال، Cistanche deserticola سمیت سلولی در غلظت 50 تا 100 ug·mL-1 ایجاد نکرد و نرخ بقای سلولی بیش از 90٪ بود. با افزایش غلظت Cistanche deserticola، زنده ماندن سلول کاهش یافت. بنابراین، Cistanche deserticola با غلظت جرمی 100 میکروگرم در میلی لیتر-1 برای تجویز بعدی انتخاب شد.

3.2.2 اثر Cistanche deserticola بر ROS القا شده توسط H2O2 در سلول های HEK 293

ROS IC50 گیاه Cistanche deserticola در غلظت های مختلف با استفاده از نرم افزار GraphPad Prism 8 محاسبه شد. نتایج در شکل 3 و جدول 2 نشان داده شده است.

برای اطلاعات بیشتر در مورد سیستانچ، بیایید نگاهی به نحوه تشخیص کیفیت سیستانچ بیندازیم. کیفیت سیستانچ به محتوای مواد فعال Echinacoside و Acteoside بستگی دارد، محتوای بالاتر به معنای عملکرد قوی تر است، امروز ما 30٪ Echinacoside و 12٪ Acteoside Cistanche مکمل ها را به عنوان مثال برای توضیح ما استفاده می کنیم، به طور کلی در این مقاله سیستانچ نامیده می شود.

چه مدت طول می کشد تا سیستانچ کار کند؟

3.2.3 اثر سیستانچ کویر روی H2O{4}}SOD القا شده سلولهای HEK 293

همانطور که در شکل 4 نشان داده شده است، در مقایسه با گروه نرمال، فعالیت SOD در سلول های گروه مدل به طور قابل توجهی کاهش یافت و فعالیت SOD گروه تجویز Cistanche deserticola به درجات مختلف افزایش یافت (P<0.001), indicating that Cistanche deserticola can increase the intracellular SOD enzyme activity.

3.2.4 اثر سیستانچ کویر بر روی CAT القایی H2O{4} در سلول های HEK 293

همانطور که در شکل 5 نشان داده شده است، H2O2 می تواند باعث کاهش قابل توجهی در فعالیت آنزیم CAT داخل سلولی شود (P<0.001), with the activity only reaching 30% of the normal group, indicating that H2O2 has seriously damaged the antioxidant system of cells. After Cistanche deserticola administration, intracellular CAT enzyme activity decreased significantly (P<0.001). The enzyme activity was significantly increased (P<0.001).

3.3 غربالگری نشانگر Q Cistanche deserticola بر اساس تجزیه و تحلیل همبستگی بازده طیفی

3.3.1 PCA از مقدار ویژه > 1 و نرخ مشارکت واریانس تجمعی > 85% به عنوان استاندارد برای استخراج 4 جزء اصلی استفاده می کند. نمودار اسکری (شکل 6) از سه جزء اصلی اول دارای منحنی تندتر است، به این معنی که نرخ مشارکت آن بیشتر است. بزرگ. نرخ مشارکت واریانس تجمعی چهار مؤلفه اصلی 87.640 درصد است که نشان می دهد این چهار مؤلفه اصلی می توانند 87.640 درصد از اطلاعات متغیرهای اصلی را نشان دهند. مقادیر ویژه اولیه و نرخ مشارکت واریانس در جدول 3 نشان داده شده است. ماتریس اجزای چرخشی با روش حداکثر واریانس نرمال سازی کایزر به دست می آید، جدول 4 را ببینید. با توجه به مقدار بارگذاری هر پیک کروماتوگرافی در چهار جزء اصلی، اطلاعات منعکس شده توسط هر کدام جزء اصلی را می توان استخراج کرد. یعنی هر چه مقدار بار بزرگتر باشد، تأثیر پیک کروماتوگرافی بر مولفه اصلی بیشتر است. در جزء اصلی 1، قله های 1 تا 3، 5، 7، 11، و 13 تا 15 بیشترین بار مطلق را دارند. در جزء اصلی 2، قله های 6 و 16 بیشترین بارگذاری مطلق را دارند. پیک 17 اطلاعات جزء اصلی 3 را توضیح می دهد، قله 8 بیشترین تأثیر را بر مولفه اصلی 4 دارد، بنابراین 13 جزء شیمیایی پیک های 1~3، 5~8، 11، 13~17 به عنوان پایه مادی اصلی سیستانچ انتخاب شدند. deserticola برای تجزیه و تحلیل بازده طیفی بعدی

3.3.2 PCC

ROS IC50 یک شاخص منفی اثربخشی دارو است، بنابراین ضریب همبستگی منفی به این معنی است که متغیر وابسته با اثربخشی دارو همبستگی مثبت دارد. ضرایب همبستگی 13 پیک کروماتوگرافی Cistanche deserticola همگی منفی است، که نشان می دهد همه آنها به طور مثبت با حذف ROS IC50 مرتبط هستند، که در این میان پیک های 14 و 3، 7، 11، 1 و 13 به شدت با ROSIC50 همبستگی داشتند. (پ<0.01), and peaks 2, 5, and 15 were strongly correlated (P<0.05); the 13 chromatographic peaks were all positively correlated with SOD, among which peaks 13 and 3 , 15, 11, 2 were extremely strongly correlated with SOD (P<0.01), and peaks 1, 14, 7, 5, and 6 were strongly correlated (P<0.05); 11 peaks were positively correlated with CAT, and peak 5 was positively correlated with CAT. There was a strong correlation (P<0.05). The results are shown in Table 5.

با ترکیب نتایج PCC ROS IC50، SOD و CAT، پیک‌های 1~3، 5، 7، 11، و 13~15 به عنوان گروه ماده فعال برای Cistanche deserticola برای اعمال اثرات آنتی اکسیدانی انتخاب شدند.

3.3.3 PLS

In PLS, the ROS IC50 regression coefficients of 13 chromatographic peaks are all negative and positively correlated with the pharmacodynamic activity. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 14, 3, 11, 1, 7, 13, 2, 5, 15 (Figure 7A); in the study of SOD enzyme activity, the coefficients of all peaks are positive, that is, all peaks are positively correlated with drug efficacy. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 13, 3, 15, 11, 2, 1 , 14, 7 (Figure 7B); in the study of CAT enzyme activity, except for peaks 6 and 16, the other chromatographic peaks are positively correlated with drug efficacy, among which the chromatographic peaks with VIP>1 عبارتند از: 5، 13، 14، 11، 7 (شکل 7C). ترکیبات نشان داده شده توسط پیک های 1~3، 5، 7، 11، و 13~15 به عنوان اجزای فعال آنتی اکسیدانی بالقوه در مدل PLS غربالگری شدند.

3.4 تأیید فعالیت نشانگر Q Cistanche deserticola

3.4.1 اثر مواد فعال بر سمیت سلولی HEK 293

بر اساس نتایج تجزیه و تحلیل همبستگی طیف-اثر، 6 ماده شامل جنیپینیک اسید، 8-اپیستریکنوئیک اسید، اکیناسئوزید، ورباسکوزید، آنتوسینوزید A و ایزورباسکوزید برای تأیید فعالیت انتخاب شدند. شش ماده فعال Cistanche deserticola هیچ سمیت سلولی در غلظت‌های بین 0.781 تا 3.125 μmol·mL-1 نشان ندادند و نرخ بقای سلولی همگی بیشتر از 90 درصد بود. با افزایش غلظت، حیات سلولی مهار می شود. بنابراین، غلظت‌های دوز بعدی به‌عنوان 0.781، 1.563 و 3.125 µmol·mL-1 انتخاب شدند.

3.4.2 جفت مواد فعال

اثر آنتی اکسیدانی سلول‌های HEK 293 القا شده با H2O با شناسایی اثر مهارکننده هر ماده فعال بر روی ROS داخل سلولی و توانایی تنظیم فعالیت آنزیم‌های SOD و CAT برای بررسی اینکه آیا اثر آنتی‌اکسیدانی دارد تأیید شد. در آزمایش مهار ROS، تفاوت بین گروه‌های اسید جنی‌پینیک با دوز متوسط ​​و بالا و گروه مدل از نظر آماری معنی‌دار بود (P<0.01, P<0.001, Figure 8A). Compared with the model group, there were statistically significant differences between the low, medium and high dose groups of inulin, anthoside A, verbascoside and isorbascoside (P<0.001, Figure 8B, Figure 8C), indicating that the six monomers All have a certain degree of ROS scavenging effect; in the SOD and CAT enzyme activity measurement test, the enzyme activities of the low, medium and high dose groups of active ingredients were all higher than the model group, indicating that all 6 monomers can increase SOD and CAT Enzyme activity.