میکرو در بیماری کلیوی لپتوسپیروز Ⅱ

4. پاسخ ایمنی میزبان به گونه Leptospira.

راه اصلی لپتوسپیرا نفوذ مستقیم به غشاهای مخاطی یا پوست باز شده از طریق خون، بافت ها، ادرار یا آب آلوده است که در سراسر گردش خون سیستمیک پخش می شود و به اندام های متعددی از جمله انتشار می یابد.کبد، ریه و توبول پروگزیمالنفرون در کلیه ها، جایی که می تواند تکثیر شود و یک ماه زنده بماند [51]. در مرحله اولیه عفونت،پاسخ ایمنی ذاتینقش اساسی را به عنوان اولین خط دفاعی در لپتوسپیروز ایفا می کند و بر پاسخ آن تأثیر می گذاردگیرنده های تشخیص الگوفاگوسیتوز ماکروفاژی، القای خارج سلولیتجمع نوتروفیل ها، ومداخله سیستم مکمل [52].

اینپاسخ ایمنیدر انسان نقش اساسی درتوسعه علائم بالینیمانند فاکتورهای حدت برخی از سویه های بیماری زا. بیشتر لپتوسپیروز انسانی بدون علامت یا خفیف است و تنها 10 درصد موارد به اشکال شدید با نارسایی چند عضوی و افزایش میزان مرگ و میر مربوط بهطوفان سیتوکینو وضعیت فلج ایمنی. گونه های بیماری زا یک پاسخ هومورال را در فاز باکتریمی تحریک می کنند، اگرچه رفتار بعدیپاسخ ایمنینامشخص است در مطالعات انجام شده بر روی بیماران با تظاهرات بالینی متعدد لپتوسپیروز، شدت تصویر بالینی با سطوح مختلف سیتوکین های سرمی مانند TNF-، IL{1}} و IL{2}} [53] مرتبط بوده است، اما این نتیجه گیری همچنان بحث برانگیز است [54]. این شرایط منجر به افزایش علاقه به درک پاسخ ایمنی به طور کلی و رویدادهای بیولوژیکی که در طول عفونت رخ می دهد، شده است.

چه مدت طول می کشد تا سیستانچ کار کند؟

4.1. لپتوسپیرا و سیستم مکمل

فعالیت پروتئولیتیک پروتئازهای لپتوسپیرال در برابر ماتریکس خارج سلولی به عفونت اجازه ورود به جریان گردش خون را می دهد. سیستم کمپلمان در سیستم گردش خون یکی از مکانیسم های اصلی پاسخ ایمنی ذاتی به لپتوسپیراهای بیماری زا است. با این حال، لپتوسپیرا استراتژی هایی را برای فرار از حمله سیستم کمپلمان با اتصال پروتئین ها به مولکول های مکمل و تولید پروتئازها، مانند ترمولیزین، آنزیم متالوپروتئیناز خنثی مقاوم در برابر حرارت که بر زنجیره پروتئین C3 تأثیر می گذارد، توسعه داده است. سویه های بیماری زا به فاکتور H (FH)، پروتئین 1 مرتبط با فاکتور H مکمل (FHR{3}})، پروتئین شبه فاکتور H 1 (FHL-1) و پروتئین اتصال دهنده C4b (C4BP) متصل می شوند. که مسئول مهار سیستم کمپلمان هستند [55]. سه استراتژی اصلی برای فرار از مکمل لپتوسپیراهای بیماریزا [55،56] از طریق تداخل تنظیم کننده های مکمل میزبان، پروتئاز میزبان و پروتئاز باکتریایی وجود دارد. برای تنظیم کننده های کمپلمان، لپتوسپیرا از فاکتور H (FH؛ تنظیم کننده مسیر جایگزین مکمل) و پروتئین اتصال C4 (C4BP؛ تنظیم کننده مسیرهای مکمل کلاسیک و لکتین) برای تسریع تجزیه کانورتازهای C3 و همچنین به عنوان کوفاکتور برای فاکتور I استفاده می کند. برای برش C3b و C4b [57،58]. پروتئین لپتوسپیرال (LcpA)، همراه با ویترونکتین (Vn؛ یک تنظیم کننده مسیر انتهایی) به C9 متصل می شود و پلیمریزاسیون آن را مهار می کند [59]، بنابراین به طور بالقوه تشکیل مجتمع فعال کننده غشاء (MAC) را مسدود می کند [60]. علاوه بر این، لپتوسپیراهای بیماریزا به چندین پروتئاز میزبان مانند فعال کننده پلاسمینوژن نوع اوروکیناز (uPA) متصل می شود که پلاسمین فعال [61] (یک پروتئاز سرین) را برای هضم C3b، C4b و C5 در سطح لپتوسپیرا القا می کند [62]. علاوه بر این، متالوپروتئازها و ترمولیزین، پروتئاز درون زا لپتوسپیرا، می توانند چندین پروتئین مکمل (C2، C3، C4 و فاکتور B) را بشکنند و غیرفعال کنند [60]. ترکیبی از تنظیم کننده های مکمل، از میزبان و لپتوسپیرا بیماری زا، کلونیزاسیون باکتری ها را در اندام های هدف میزبان تسهیل می کند [63].

4.2. لپتوسپیرا و نوتروفیل ها

در طول عفونت، گونه های بیماری زا لپتوسپیرا باعث فعال شدن قوی نوتروفیل ها و پاسخ پیش التهابی می شود. نوتروفیل ها برای کنترل میکروارگانیسم ها مهم هستند، اما در آسیب بافتی میزبان نیز نقش دارند. نشان داده شده است که سطوح پایین تجمع نوتروفیل های خارج سلولی به دلیل فعالیت کم نوتروفیل در گردش خون، لپتوسپیرمی را افزایش می دهد، که نشان می دهد تشکیل داخل عروقی نوتروفیل ها ممکن است در جلوگیری از گسترش زودهنگام لپتوسپیراهای بیماری زا حیاتی باشد [64].

4.3. لپتوسپیرا و ماکروفاژها

در مرحله اولیه عفونت لپتوسپیرا، ماکروفاژها نقش مهمی در از بین بردن اسپیروکت دارند. این مکانیسم موثر همراه با یک پاسخ سیتوکین کارآمد به کنترل فاگوسیتیک و گسترش عفونت مربوط می شود، اگرچه گونه های Leptospira. نشان داده شده است که آپوپتوز را در ماکروفاژها از طریق مسیر Fas/FasL-کاسپاز-8/-3 القا می‌کند و بقا و تکثیر آنها را در میزبان تسهیل می‌کند به دلیل آزادسازی آپوپتوز و اندونوکلئاز محرک عامل میتوکندری در افراد آلوده. ماکروفاژها [65]. تحقیقات اخیر بر روی میکرو رونویسی ماکروفاژهای آلوده به لپتوسپیرا برای تعیین مکانیسم‌های اپی ژنتیکی مانند تنظیم پس از رونویسی توسط RNA انجام شده است. ماکروفاژهای آلوده به لپتوسپیرا نشان داده اند که میکرو RNA ها (miRNA ها) توسط عفونت با اسپیروکت تنظیم می شوند و نشان می دهد که این تنظیم در پاسخ این سلول های سیستم ایمنی در عفونت لپتوسپیرا بسیار مهم است [66]. در ماکروفاژهای انسانی، فعال شدن التهاب ناشی از گونه‌های فعال اکسیژن و لیزوزومی کاتپسین B تولید شده توسط عفونت لپتوسپیرا، دارای سطوح برجسته‌ای از NLRP3 و IL-18 است که به تولید IL{10}} کمک می‌کند و منجر به افزایش امکان فاگوسیتوز و مدل سازی سریع برخی از سیتوکین ها با مقاومت لپتوسپیروز در ارتباط است [67].

4.4. پاسخ طنز به لپتوسپیرا

پاسخ هومورال خاص علیه لپتوسپیرا با تولید آنتی بادی های IgM و IgG در روز سوم شروع علائم مشخص می شود. علاوه بر این، تولید IgA از روز اول تا نهمین ماه پس از آلودگی گزارش شده است. در واقع، افزایش IgM به عنوان یک معیار جایگزین در تشخیص زودهنگام لپتوسپیروز استفاده شده است [68]. تأثیر پاسخ هومورال در انسان‌های مبتلا به لپتوسپیروز باعث می‌شود که تشخیص سرولوژیک پس از عفونت طبیعی انجام شود [69]. مهمترین جنبه پاسخ هومورال در عفونت لپتوسپیرا ممکن است تشکیل آنتی بادی های محافظ باشد. واکسن‌هایی که در حال حاضر برای لپتوسپیروز در دسترس هستند از آماده‌سازی سلولی کامل تشکیل شده‌اند و دارای محدودیت‌هایی مانند اثربخشی کم، عوارض جانبی متعدد، تولید حافظه کم ایمنی و عدم محافظت متقابل برای تفاوت‌های سروواری هستند. بنابراین، توسعه واکسن های جدید برای کنترل بیماری ضروری است و در حال حاضر تحقیقاتی برای تولید واکسن از ایمن سازی ژنتیکی در حال انجام است [70]. OMP های لپتوسپیرا یک آنتی ژن با ایمنی زایی بهتر برای لنفوسیت های B در نظر گرفته شده اند که شامل اپی توپ های ساختاری OmpL187- 98، OmpL1173-191، OmpL1297-320، LipL4130-48، LipL{ {9}} و LipL{10}} [71]. این اپی توپ ها نامزدهای امیدوارکننده ای برای توسعه یک واکسن جهانی هستند.

4.5. پاسخ ایمنی تطبیقی ​​به لپتوسپیرا: سلول های T و سیتوکین ها

گونه های بیماری زا لپتوسپیرا یک پاسخ ایمنی با واسطه لنفوسیت های T و B را القا می کنند، همراه با بیان سیتوکین هایی که ممکن است با نمودارهای جاذبه مرتبط باشد. فعال شدن سلول های T در طول عفونت با لپتوسپیرا باعث شروع پاسخ التهابی، عمدتاً از طریق تولید سیتوکین می شود. این در از بین بردن زودهنگام عفونت بسیار مهم است، اما تولید کنترل نشده سیتوکین های پیش التهابی نیز می تواند منجر به تولید بیش از حد سیتوکین و به دنبال آن حالت فلج ایمنی شود که می تواند منجر به سپسیس و نارسایی چند ارگانی شود. لنفوسیت‌های T IL-1، IL{3}}، IL-12، اینترفرون (IFN)- و TNF- تولید می‌کنند که به‌عنوان جذب‌کننده‌های شیمیایی برای جذب لکوسیت‌ها در محل عفونت عمل می‌کنند. جالب توجه است که در شرایط محیطی، سلول‌های δ T ساده در کشت‌های سلول‌های تک هسته‌ای خون محیطی (PBMCs) تحریک شده با آنتی‌ژن‌های لپتوسپیرا همراه با تولید IL{8}} و IFN [72] تکثیر شدند. علاوه بر این، در حالی که موش‌های نوع وحشی آلوده به لپتوسپیروز سطوح بالاتری از سیتوکین‌ها از جمله IL{12}}، IL{13}} و IL{14}} را در مقایسه با موش‌های غیر آلوده نشان دادند، مزمن موش ناشی از لپتوسپیرا نفریت (Daf{16}}/- موش) بیان بالاتری از اکتین عضله صاف، IL{18}}، IL-13 را نشان داد، اما تفاوتی بین IL{-12 و IL{21} وجود نداشت. } سطوح [73]. به این ترتیب، Daf1 و IL{24}} ممکن است نقش محافظتی مهمی در پیشرفت CKD به عنوان پیوند بین CKD موش ناشی از لپتوسپیرا با فیبروز کلیوی ایفا کنند [72،73]. با این حال، فرضیه پاسخ سیتوکین انتخاب شده در پیشرفت بیماری هنوز در لپتوسپیروز انسانی غیرقابل قطعیت است. در بیماران مبتلا به لپتوسپیروز شدید و درگیری ریوی، سطوح بالای IL{28}}، CXCL8 و IL{30}} در مقایسه با بیماران مبتلا به لپتوسپیروز خفیف به دست آمد [53]. این غلظت بالای سیتوکین ها در بیماران مبتلا به لپتوسپیروز نقش کلیدی آنها را در ایجاد لپتوسپیروز شدید برجسته می کند.

در بیماران مبتلا به عفونت شدید، لنفوسیت‌های CD{0} T با مشخصات پیش‌التهابی و تولیدکنندگان IL-2 و IFN- یافت می‌شوند در حالی که CD{4}} CD25 تولیدکنندگان بالای IL-10 تقریبا غایب هستند به نظر نمی رسد تنظیم پاسخ ایمنی با واسطه لنفوسیت T از آسیب بافتی ایجاد شده توسط پاسخ التهابی به لپتوسپیرا جلوگیری کند. در لنفوسیت‌های T CD{8}} انسان‌های مبتلا به لپتوسپیروز شدید، تولید TNF- و سایر سایتوکین‌های پیش‌التهابی بیشتر از لنفوسیت‌های با فرم خفیف بیماری است که نشان می‌دهد این سیتوکین‌ها می‌توانند به عنوان نشانگرهای بیماری استفاده شوند. شدت در مرحله ایمونولوژیک عفونت [74]. تولید IL{12}} با خطر مرگ در انسان مبتلا به لپتوسپیروز مرتبط است. با این حال، مطالعه‌ای که بر روی انسان‌های در معرض تماس و بدون علامت انجام شد، تولید این سیتوکین را با کنترل پاسخ التهابی و بقا مرتبط کرد [74]. در طول عفونت لپتوسپیرا، واسطه‌های التهابی و عملکرد برخی از سلول‌های لکوسیتی، مانند لنفوسیت‌های T، به سرعت در افراد مقاوم تنظیم می‌شوند، برخلاف آنچه در افراد مبتلا به اشکال شدید لپتوسپیروز رخ می‌دهد [75].

به طور خلاصه، پاسخ ایمنی به عفونت لپتوسپیرا به دلیل رفتارهای بالینی بیماران مبتلا به لپتوسپیروز، که با فاکتورهای حدت مختلف ژنوم باکتری در تعامل هستند، به طور کامل درک نشده است، که به لپتوسپیرا یک ظرفیت بیماری زایی جامد می دهد.

5. تظاهرات بالینی

تظاهرات بالینی لپتوسپیروز متنوع است، از علائم خفیف و غیر اختصاصی، مانند علائم شبه آنفولانزا (تب، میالژی، و سردرد)، تا علائم شدید همراه با آسیب های اندام در مرحله پایانی (مانند AKI، نارسایی حاد کبدی). و دیاتز خونریزی، همچنین به عنوان سندرم ویل شناخته می شود)، هموپتیزی حاد ناشی از خونریزی ریوی، گیجی حاد ناشی از مننگوآنسفالیت آسپتیک، و نارسایی حاد قلبی ناشی از میوکاردیت حاد یا تحت حاد [7]. بر این اساس، سه شاخص مشکوک به عفونت لپتوسپیروز عبارتند از:بیماری حاد تب دار، (ii) زردی و (iii)آسیب حاد کلیه[12]. پیش‌بینی‌کننده‌های نوع شدید لپتوسپیروز، میالژی شدید در شروع، تمایل به خونریزی شدید و زردی مشخص است. جالب توجه است، حضور هر دو از قبل موجود استبیماری مزمن کلیوی(اندازه کلیه کوچک) یا بزرگ شدن کلیه ها با احتقان همراه با آنوری با بدترین نتیجه مرتبط است [12]. بنابراین، بیماران مبتلا به بیماری کلیوی مرتبط با لپتوسپیروز باید به سرعت تحت درمان قرار گیرند.

6. تشخیص

6.1. تشخیص بالینی

تشخیص لپتوسپیروز بر اساس سابقه مواجهه، عوامل خطر و تظاهرات بالینی است. شاخص بالای سوء ظن می تواند آسیب بعدی اندام را دور بزند. با این حال، علائم لپتوسپیروز اغلب با علل دیگر سندرم تب حاد، مانند عفونت دنگی، مالاریا، هپاتیت و بیماری خودایمنی فعال اشتباه گرفته می شود. فقدان علائم پاتوگنومونیک لپتوسپیروز به این معنی است که تشخیص به طور آزمایشی بر اساس ارزیابی تب و میالژی در بیماران از یک منطقه آندمیک است. به همین دلیل، تشخیص آزمایشگاهی لپتوسپیروز ضروری است.

6.2. تشخیص آزمایشگاهی

تشخیص لپتوسپیروز در آزمایشگاه، به ویژه در مرحله حاد، دشوار است. این می تواند با شناسایی مستقیم اسپیروکت ها یا اجزای آنها در مایعات یا بافت های بدن، جداسازی لپتوسپیرها در کشت، یا شناسایی آنتی بادی های خاص در مراحل مختلف بالینی انجام شود. تشخیص لپتوسپیروز از بیماری هایی مانند مالاریا، تب دنگی، ریکتزیا، آنفولانزا، هپاتیت و تب زرد به دلیل ظاهر بالینی مبهم آن دشوار است. در نتیجه، آزمایشات آزمایشگاهی برای تأیید تشخیص مورد نیاز است. تشخیص آنتی بادی علیه لپتوسپیرها، خود لپتوسپیرها یا اسید دئوکسی ریبونوکلئیک آنها اساس این آزمایشات (DNA) است. تشخیص آزمایشگاهی کنونی شامل شناسایی مستقیم (تشخیص اسپیروکت‌های لپتوسپیرا یا DNA در نمونه‌ها یا جداسازی ارگانیسم از نمونه‌ها) و تشخیص غیرمستقیم (تشخیص سرولوژیکی یا سرولوژی برای شناسایی عفونت لپتوسپیرال است که مبتنی بر تشخیص آنتی‌بادی‌های خاص علیه انواع مختلف است. آنتی ژن های لپتوسپیرال) (جدول 1).

6.2.1. بررسی مستقیم میکروسکوپی، کشت و تشخیص آنتی ژن

لپتوسپیرها مارپیچی‌های نازک، روشن و با تحرک فعال با چرخش مشخصه (حرکت انقباض) در زیر میکروسکوپ میدان تاریک معمولی (DFM) هستند و تقریباً 10 لپتوسپیر در میلی لیتر برای تشخیص یک سلول در هر میدان لازم است. با یک هفته بیشتر در طول مدت عفونت، تقریباً 10٪ از نظر عملکرد DFM (از 100 تا 90٪) فوت می کنند. برای افزایش حساسیت، چندین روش رنگ آمیزی خاص؛ رنگ‌آمیزی نقره ستاره‌ای Warthin [76] و ایمونوهیستوشیمی (ایمونوهیستوشیمی، ایمونوفلورسانس، جذب آنتی‌ژن ایمونومغناطیسی، و رنگ‌آمیزی ایمونوپروکسیداز [77]) که به آنتی‌بادی‌های اولیه اختصاصی سرووار (به صورت مجزا یا ترکیبی) نیاز دارند.

جدول 1. تست های آزمایشگاهی برای تشخیص لپتوسپیروز.

لامپ، تقویت همدما با واسطه حلقه. PCR، واکنش زنجیره ای پلیمراز؛ NGS، توالی یابی نسل بعدی؛ IHA، هماگلوتیناسیون غیر مستقیم؛ ELISA، سنجش ایمونوسوربنت متصل به آنزیم. IgM، ایمونوگلوبولین M؛ MAT، تست آگلوتیناسیون ماکروسکوپی؛ MCAT، تست آگلوتیناسیون میکروکپسول؛ DNA، اسید دئوکسی ریبونوکلئیک؛ DFM، میکروسکوپ میدان تاریک

به طور موازی، کشت لپتوسپیرا از خون، ادرار، مایع مغزی نخاعی و بافت بیوپسی در طی چند روز اول تا 10 روز پس از شروع علائم بیماری (مرحله لپتوسپیروز) امکان پذیر است. از آنجایی که نمونه های کشت آهسته رشد می کنند (زمان دو برابر شدن 6 تا 8 ساعت)، سریع و مستعد آلودگی هستند، نمونه های کشت باید حداقل 3 تا 4 ماه قبل از دور انداختن به عنوان منفی) با حساسیت تنها 23 درصد، اما ضروری است. برای تست حساسیت دارویی [6]. به این ترتیب، محیط EMJH (Ellinghausen-McCullough-Johnson-Harris) (کمپلکس اولئیک آلبومین) از آلبومین سرم گاوی (کسر V)، Tween 80، کلرید آمونیوم تیامین، مونو پتاسیم فسفات، فسفات دی سدیم و مواد مغذی مختلف تشکیل شده است [78]. معمولا استفاده می شود، در حالی که محیط های تخصصی تر T80/40/LH (پلی سوربات 40، لاکتالبومین هیدرولیزات، سوپراکسید دیسموتاز، و سرم خرگوش)، برای برخی از سرووارها مورد نیاز است [79]. برای جداسازی اولیه طیف وسیع و متنوع لپتوسپیرهای بیماریزای سریع، Hornsby-Alt-Nally (HAN)، به نظر می رسد رسانه خوبی باشد [80].

تشخیص آنتی ژن های لپتوسپیرال توسط ایمونوپروکسیداز، ایمونوفلورسانس، یا سیستم جذب آنتی ژن ایمونومغناطیسی برای نمونه هایی با بار باکتریایی کم یا میکروسکوپ میدان تاریک قابل استفاده نیست اما به دلیل محدودیت در آنتی بادی اولیه به طور معمول انجام نمی شود [77]. در مقابل، شناسایی اسید نوکلئیک با تقویت DNA جدید. واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) (یعنی Nested-PCR، PCR کمی [qPCR])، تقویت همدما با واسطه حلقه (LAMP) و توالی یابی نسل بعدی (NGS) برای تشخیص زودهنگام و دقیق آزمایشگاهی، به ویژه با جداسازی لپتوسپیرا با استفاده از تلقیح محیط زیستی و هیبریداسیون DNA (کاوشگر DNA) [81،82]. انواعی از اهداف لپتوسپیرال (مانند RNA ریبوزومی 16S) یا DNA را می توان برای تشخیص تقویت کرد [83] و PCR بلادرنگ (RT-PCR) نسبت به PCR استاندارد حساس و اختصاصی تر است [84]. از آنجایی که برخی از پرایمرهای RT-PCR ممکن است به یک مکان غیر اختصاصی متصل شوند که منجر به نتایج مثبت کاذب شود، آخرین سنجش‌های Real-time Multiplex PCR با استفاده از دو مجموعه پرایمر توسعه یافته‌اند [85]. Nested PCR همچنین به شناسایی مکان‌های DNA خاص و حساس‌تر با مجموعه‌های پرایمرهای اضافی کمک می‌کند [86،87]. با این حال، روند فعلی برای تشخیص لپتوسپیروز استفاده از هر دو روش سرولوژیکی و مولکولی، مانند PCR و ELISA (ساده‌تر از استاندارد طلایی MAT سرولوژیکی)، برای کشورهای دارای منابع محدود است [88،89]. علاوه بر این، تکنیک LAMP [90] برای تشخیص ژن 16S rRNA (rrs)، یک روش مقرون به صرفه، سریع و پربازده برای تشخیص لپتوسپیرهای بیماریزا در ادرار است. در حال حاضر، NGS دقیق‌ترین روش مستقل از فرهنگ مبتنی بر تجزیه و تحلیل ژنوم هسته در مایعات بدن (خون و ادرار) است [91] و جهت آینده آزمایش‌های لپتوسپیروز حرکت به سمت طبقه‌بندی مولکولی لپتوسپیرها است که بر محدودیت‌ها غلبه می‌کند. جداسازی کشت لپتوسپیرها از نمونه های بالینی از این رو، ارزش PCR در تشخیص بالینی لپتوسپیروز بسیار خوب است و چندین تکنیک مدرن در حال ظهور هستند.

6.2.2. تشخیص آنتی بادی ضد لپتوسپیرا

چندین تشخیص سرولوژیکی استفاده می شود. برای مثال، آزمایش‌های آنتی‌بادی اختصاصی جنس (هماگلوتیناسیون غیرمستقیم [IHA]، سنجش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم [ELISA]، لپتو دری دات [آگلوتیناسیون لاتکس]، آگلوتیناسیون میکروکپسول [MCAT])، و آزمایش‌های آنتی‌بادی اختصاصی سرووار (آزمایش میکروسکوپی [آگلوتیناسیون میکروسکوپی] MAT]) [92،93]. به این ترتیب، معیارهای MAT برای تشخیص عبارتند از: (1) افزایش چهار برابری تیتر در سرم‌های جفت (تبدیل سرمی عفونت فعلی) یا (ب) یک تیتر بالا (بیشتر یا مساوی 1:400 یا 1:800، بالاتر در موارد همه‌گیری. نواحی) (سرم مثبت) (آنتی بادی ها ممکن است برای مدتی پس از عفونت یا واکنش متقابل با سایر بیماری ها باقی بمانند). علاوه بر این، MAT نیاز به یک پانل زنده از تمام سرووارهای لپتوسپیرا در منطقه دارد، با پانلی از سرووارهای استاندارد شده محلی [93،94] به دنبال سازمان جهانی بهداشت حیوانات (19 آنتی ژن نماینده 15 سروگروه) [95]. از آنجایی که آنتی بادی ها در 5 تا 7 روز پس از عفونت قابل تشخیص هستند، آزمایش MAT می تواند در چند روز اول عفونت منفی باشد (تیتر <1:50). تشخیص لپتوسپیروز را می توان با نمونه های ادرار [96] با استفاده از سرولوژی و تشخیص مولکولی (16S rRNA)، به ویژه در بیماران مبتلا به عفونت اخیر (MAT بزرگتر یا مساوی 1:800 یا ELISA IgM مثبت یا هر دو) انجام داد [97] .

با منابع محدود، یک امتیاز پیش‌بینی بالینی [98] بر اساس سابقه بالینی مربوطه و تست‌های آزمایشگاهی مرتبط با امتیازدهی در هفت جنبه به شرح زیر است: افت فشار خون (3)، زردی (2)، درد عضلانی (2)، AKI (1.5) ، هموگلوبین پایین (3)، هیپوکالمی همراه با هیپوناترمی (3) و نوتروفیلی (1) پیشنهاد شده است (نمره خلاصه شده برش 4 دارای ناحیه زیر منحنی مشخصه عملکرد گیرنده {{10}} است.78 ( 95% فاصله اطمینان (CI) 0.68-0.89) برای تشخیص لپتوسپیروز [77]). این امتیاز احتمال تایلندی-لپتو در پذیرش می‌تواند یک ابزار تشخیصی برای تشخیص زودهنگام احتمالی لپتوسپیروز در بیمارانی باشد که مشکوک بالینی شدید به این بیماری هستند.