مزایای اکتئوساید - درمان گلیوبلاستوما

تماس: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ایمیل:audrey.hu@wecistanche.com

TAE WOONG HWANG;DONG HUN KIM; DA BI KIM1؛ TAE WON JANG؛ GUN-HWA KIM؛ Minho Moon؛ KYUNG AH YOON؛ DAE EUN CHO؛ JAE HO PARK؛ JWA-JIN KIM

1. مقدمه

گلیوبلاستوماشایع‌ترین نوع تومور بدخیم مغزی اولیه و مهاجم‌ترین و مخرب‌ترین تومور اولیه مغزی است (1،2)، با نرخ بقای متوسط ​​18 ماه با درمان چندوجهی تهاجمی. تصمیمات درمانی فعلی محدود است و شامل پرتودرمانی، شیمی درمانی و جراحی در ترکیب با عامل آلکیله کننده تموزولومید (TMZ) است (3،4). با وجود در دسترس بودن درمان های تهاجمی، بیماران مبتلا بهگلیوبلاستومامعمولاً پیش آگهی بدی دارند (5). TMZ اصلی ترین داروی شیمی درمانی است که در درمان بالینی بدخیم استفاده می شودگلیوبلاستوما(6-8)؛ به عنوان یک عامل آلکیله کننده در این سری، قادر به نفوذ به سد خونی مغزی است (9-11). در طول پیشرفت گلیوبلاستوما بدخیم و تهاجم گسترده در سراسر مغز، افزایش مداوم مقاومت دارو به TMZ اثر درمانی آن را کاهش می دهد (12،13). بر این اساس، داروهای جدید درمانی برای مقابله باگلیوبلاستومافوری جستجو می شوند.

مطالعات قبلی گزارش کرده‌اند که سلول‌های گلیوما از طریق اتوفاژی یا مرگ سلولی برنامه‌ریزی‌شده نوع II در پاسخ به TMZ دچار مرگ سلولی می‌شوند (14،15). اتوفاژی را می توان توسط 3-متیل آدنین (3-MA) ​​از طریق تبدیل پروتئین زنجیره سبک 1 3 (LC3)-I مرتبط با میکروتوبول به LC3-II مهار کرد، بنابراین کاهش می یابد.گلیوبلاستومامرگ سلولی (16،17); با این حال، نقش اتوفاژی به بافت سلولی بستگی دارد. به استثنای نقش سیتوتوکسیک در طی عمل TMZ، القای اتوفاژی توسط استرس سلولی یک فرآیند محافظ سلولی است که تجمعات سیتوپلاسمی، اندامک‌ها و ماکرومولکول‌های ناشی از استرس را در سلول‌های پستانداران از طریق سیستم لیزوزومی حذف می‌کند. به نوبه خود، سلول های درگیر در حفظ هموستاز انرژی را از طریق این فرآیندهای کاتابولیک دریافت می کنند (18،19). نقش های پیچیده اتوفاژی نشان می دهد که یک فعال کننده اتوفاژی ممکن است اثرات ضد سرطانی در ترکیب با درمان TMZ با القاء داشته باشد.گلیوبلاستومااتوفاژی سلولی بدون اعمال اثرات مضر یا ایجاد فواید برای بافت های طبیعی. نکته قابل توجه، TMZ اثرات درمانی هم افزایی را در ترکیب با ویتامین D از خود نشان داده است، از جمله سرکوب زنده ماندن سلولی و افزایش اتوفاژی درگلیوبلاستوماسلول ها. علاوه بر این، نشان داده شده است که ترکیب TMZ و ویتامین D اثرات ضد سرطانی در داخل بدن، از جمله کاهش اندازه تومور و میزان بقای طولانی مدت، دارد. این مطالعات نشان می دهد که درمان ترکیبی ممکن است اثرات ضد سرطانی هم افزایی از طریق مکانیسم های اتوفاژیک در TMZ داشته باشد.گلیوبلاستومادرمان (15).

اکتئوزیدیک گلیکوزید فنیل اتانوئیدی است که به طور گسترده در چندین داروی گیاهی سنتی چینی مقوی توزیع شده است (20،21). تعدادی از اقدامات دارویی، از جمله اثرات آنتی اکسیدانی، ضد سرطانی، ضد التهابی، ضد نفریتی و ضد متاستاتیک، بااکتئوزید(22-24). مطالعات قبلی نشان داده استاکتئوزیداثرات محافظتی در برابر آسیب کبدی ناشی از تتراکلرید کربن و دی گالاکتوزامین دارد. مکانیسم‌های زیربنایی اثرات محافظتی اکتئوزید احتمالاً به ظرفیت آن برای مهار فعال‌سازی زیستی با واسطه P450 و اثرات مهار رادیکال‌های آزاد ناشی از قرار گرفتن در معرض تتراکلرید کربن مرتبط است (25،26).

بنابراین، شواهد نشان می دهد که هر دواکتئوزیدو TMZ از طریق مرگ سلولی اثرات ضد سرطانی را القا می کنند. با این حال، ارتباط آنها و اثرات ضد سرطانی در زمینهگلیوبلاستوماباقی مانده است که روشن شود. بنابراین، هدف از مطالعه حاضر بررسی اثرات هم افزایی ضد سرطانی بوداکتئوزیدهمراه با TMZ درگلیوبلاستومادرمان. یک سنجش زنده ماندن سلولی برای تجزیه و تحلیل اثرات ضد سرطانی درمان ترکیبی در C6 انجام شدگلیوبلاستوماسلول ها (یک موش صحراییگلیوبلاستومارده سلولی)، و نتایج با نتایج پس از درمان با TMZ به تنهایی مقایسه شد. برای بررسی بیشتر مکانیسم مرگ سلولی ناشی از درمان همزمان بااکتئوزیدو ژن‌های مرتبط با TMZ، آپوپتوز و اتوفاژی در سلول‌های C6 مورد بررسی قرار گرفتند.

ضد تومور اکتئوزیدی

2. مواد و روش ها

کشت سلولی:

موش C6گلیوبلاستومارده سلولی از مجموعه فرهنگ نوع آمریکایی (Rockville, MD, USA) خریداری شد. سلول ها تحت شرایط استریل در دمای 37 درجه سانتیگراد در یک محیط مرطوب با 5 درصد CO2 در محیط Eagle اصلاح شده Dulbecco (DMEM) همراه با 10 درصد سرم جنین گاو (FBS) و 1 درصد آنتی بیوتیک ها و ضد قارچ ها (همه Welgene, Daegu) کشت داده شدند. ، کشور کره).

ماده ی گیاهی:

Abeliophyllum distichum Nakai [کوپن شماره. Park1001 (ANH)] در پارک موضوعی Misun-hyang، جنگل تفریحی Seongbul-Mountain، کره جمع آوری شد.

القای پینه:

برای ایجاد کالوس (27)، ریزنمونه های برگ 1 سانتی متر مربع از گیاهان تازه جدا شدند. ریزنمونه روی محیط کشت موراچیج و اسکوگ (4 درصد ساکارز، 0.9 درصد آگار حاوی 1 میلی گرم در لیتر نفتالین استیک اسید و 1 میلی گرم در لیتر 2،4-دی کلرو فنوکسی استیک اسید، pH 5.7) در محیط کشت داده شد. 25 درجه سانتی گراد کالوس 20 روز بعد ایجاد شد. مقدار کافی ازاکتئوزیداز طریق خرده فرهنگ برای جداسازی و خالص سازی به دست آمداکتئوزیداز پینه (شکل 1). دسته های مختلف تصفیه شدهاکتئوزیددر هر آزمایش استفاده شد. هر آزمایش سه بار با استفاده از یک دسته متفاوت انجام شد.

جداسازی و تصفیه:

فراکسیون های اتیل استات در خلاء غلیظ شدند و به عنوان نمونه ای برای خالص سازی اکتئوزید استفاده شدند.اکتئوزیدتوسط سیستم جداسازی کروماتوگرافی تسریع شده (Isolera™ Spektra، Biotage، Uppsala، سوئد) با استفاده از کارتریج های SNAP KPHOSPHO-SIL و SNAP Ultra (Biotage) جدا و خالص شد. ایناکتئوزیدخالص‌شده از کالوس با استفاده از آکتئوزید استاندارد با آنالیز HPLC-PDA مورد تجزیه و تحلیل کمی قرار گرفت. در نهایت، اکتئوزید با خلوص بیشتر یا برابر با 95 درصد از کالوس به دست آمد و به عنوان نمونه ای برای شیمی درمانی با پایه تموزولوماید استفاده شد.گلیوبلاستوما.

سنجش 3-(4،5-دی متیل تیازول-2-l)-5-دی فنیل تترازولیوم بروماید (MTT):

برای شناسایی نیمه حداکثر غلظت بازدارندگی TMZ (مقدار IC50) در برابر سلول‌های C6، 104×1 سلول در سوسپانسیون‌های تک سلولی در چاهک‌های جداگانه صفحات 96 چاهی کاشته شدند و به مدت 24 ساعت در دمای 37 درجه سانتی‌گراد قبل از تیمار TMZ در مکان مشخص شده انکوبه شدند. غلظت های (1، 5، 10 و 20 میلی مولار) در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 24 ساعت. پس از تعیین مقدار TMZ IC50 به عنوان 5 میلی متر، سلول ها به مدت 24 ساعت با 5 میلی مولار TMZ، 50 میکرومولار تیمار شدند.اکتئوزید، یا ترکیبی از این دو (5 میلی مولار TMZ و 50 میکرومولاراکتئوزید). محلول MTT (5 میلی گرم در میلی لیتر) به هر چاهک (10 میکرولیتر) اضافه شد و در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 2 ساعت کشت داده شد. پس از آن، محیط حذف شد و DMSO در حجم 200 میکرولیتر به هر یک اضافه شد و در دمای اتاق به مدت 30 دقیقه واکنش نشان داد. جذب در 595 نانومتر برای تعیین زنده ماندن سلول اندازه گیری شد.

سنجش ترمیم زخم:

یک سوسپانسیون سلولی C6 در 1 میلی لیتر در یک صفحه 12 چاهی کشت داده شد و تا محل تلاقی رشد کرد. سلول ها با TMZ تیمار شدند،اکتئوزید، یا TMZ plusاکتئوزیدو سپس با نوک پیپت استریل 10- میکرولیتری برای ایجاد زخم مصنوعی خراشیده می شود. در 0 و 24 ساعت پس از زخم، تصاویر دیجیتالی از روند بهبود زخم با استفاده از میکروسکوپ معکوس گرفته شد. مهاجرت سلولی با اندازه گیری اندازه اسکار در 0 و 24 ساعت با استفاده از نرم افزار تجزیه و تحلیل تصویر، نرم افزار ImageJ 1.43u/Java1.6.{9}} (NIH، Bethesda، مریلند، ایالات متحده آمریکا) اندازه گیری شد. هر آزمایش سه بار و اندازه گیری ها در سه تکرار انجام شد.

بلات ایمنی:

سلول های C6 با TMZ تیمار شدند،اکتئوزید، یا TMZ plusاکتئوزیدبه مدت 24 ساعت سلول ها توسط بافر لیز RIPA (25 میلی مولار Tris-HCl، pH 7.5، 15{8}} میلی مولار NaCl، 1 درصد Nonidet P-40، 1 درصد دئوکسی کولات سدیم، 0.1 درصد SDS) روی یخ لیز شدند. با کوکتل مهارکننده های پروتئاز و فسفاتاز (روش، بازل، سوئیس) به مدت 30 دقیقه تکمیل شد. پس از سانتریفیوژ در xg 18341 به مدت 15 دقیقه در دمای 4 درجه سانتی گراد، مایع رویی به دست آمد. غلظت پروتئین با استفاده از سنجش پروتئین برادفورد (Bio-rad، Hercules، CA، USA) تعیین شد. مقادیر مساوی از کل پروتئین (30 میکروگرم) در چاهک های منفرد بارگذاری شد و از طریق الکتروفورز از طریق SDS-PAGE 10-15 درصد تکه تکه شد. پروتئین ها به غشاهای پلی وینیلیدین دی فلوراید (EMD Millipore, Bedford, MA, USA) به صورت الکتریکی منتقل شدند. پس از انکوباسیون در محلول مسدود کننده حاوی 5 درصد شیر بدون چربی در سالین Tween/Tris-buffer به مدت 30 دقیقه در دمای اتاق. لکه‌ها با آنتی‌بادی‌های اولیه رقیق‌شده 1: 1،000 (شماره گربه 9662، کاسپاز 3؛ Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, MA, USA)، لنفوم سلول B0 (sc-2) بررسی شدند. 7382، Bcl-2)، پروتئین X مرتبط با Bcl-2 (گروه شماره 2772، Bax)، فسفریله (p-)p53 (sc-101762)، توتال-p53 (sc-6243)، -اکتین (cat. شماره 4970؛ همه؛ Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TX, USA, LC-3 (L8918, Sigma; Merck KGaA, Darmstadt, Germany), Rab7 (شماره گربه 9367, Cell Signaling Technology, Inc. )، p62 (شماره گربه 114)، p-p38 (شماره گربه 9211)، total-p38 (شماره گربه 9212)، p-c-jun N- ترمینال کیناز (شماره گربه 9251، ص ‑JNK)، total‑JNK (شماره گربه 9252)، کیناز تنظیم شده با سیگنال خارج سلولی (شماره گربه 9101، p‑ERK)، total-ERK (شماره گربه 9102؛ همه Cell Signaling Technology, Inc. .) یک شب در 4 درجه سانتیگراد. پس از آن، انکوباسیون با آنتی‌بادی‌های ثانویه کونژوگه با پراکسیداز ترب (1:2،000؛ LF-SA8001A، ضد موش بز IgG-HRP) یا LF-SA8002A (Goat Anti-Rabbit IgG-HR) انجام شد. مرزی، سئول، کره) به مدت 2 ساعت در دمای اتاق. سپس پروتئین ها با قرار گرفتن در معرض Chemi-Doc (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, cA, USA) مشاهده شدند.

رنگ آمیزی ایمونوفلورسانس:

پروتئین غشایی 1 مرتبط با لیزوزومی (LAMP1) و LC3 نشانگرهایی برای لیزوزوم و اتوفاژی هستند. سلول‌ها (سلول 105×1/چاه) در سه نسخه بر روی پوشش‌های شیشه‌ای استریل شده (BD Biosciences، Franklin Lakes، NJ، USA) آماده شدند. پس از درمان با TMZ،اکتئوزید، یا TMZ plusاکتئوزیدبه مدت 24 ساعت، سلول ها در 4 درصد پارافورمالدئید به مدت 30 دقیقه ثابت شدند، با 5 درصد سرم مرغ طبیعی مسدود شدند (S‑3000; Vector Laboratories, Inc., Burlingame, CA, USA), 0.1 درصد Triton X -100 و سپس 1 ساعت برای نفوذپذیری و برای جلوگیری از تعاملات غیراختصاصی پروتئین-پروتئین انکوبه شد. سپس سلول ها با anti-LAMP1 (1:200؛ sc-19992، Santa Cruz Biotechnology, Inc.) و anti-LC3 (1:400؛ PM036، MBL International، Woburn، MA، ایالات متحده) در یک شب در 4 درجه انکوبه شدند. سی. سپس سلول ها دو بار با PBS شسته شدند و به مدت 2 ساعت دیگر در تاریکی با مخلوطی از آنتی بادی های ثانویه الکسا فلور 488 و 594 (1:200؛ الکسا فلور 488 (A-11008) و 594 (A-11007) انکوبه شدند. Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA) و دوباره با PBS شسته شد. هسته ها با استفاده از 4،6-diamidino-2-phenylindole (Sigma؛ Merck KGaA) رنگ آمیزی شدند و سپس دو بار با PBS شسته شدند. سپس اسلایدها نصب شدند و تصاویر زیر میکروسکوپ کانفوکال لیزری LSM-700 گرفته شد.

شکل 1. ساختار شیمیایی اکتئوزید.

فلوسیتومتری.

سلول ها برای Mitotracker Green و MitoSOX توسط فلوسیتومتری با استفاده از فلوسیتومتر FACSCanto II، همانطور که توسط سازنده (BD Biosciences) نشان داده شده است، تجزیه و تحلیل شدند. پس از دو بار شستشو با PBS، سلول‌ها در پارافورمالدئید 4 درصد به مدت 3{2}} دقیقه در دمای اتاق ثابت شدند و با 25/0 درصد Triton X-100 در PBS به مدت 20 دقیقه نفوذپذیر شدند. سلول ها با آنتی بادی های اولیه یک شب در دمای 4 درجه سانتی گراد (1:200) و سپس با آنتی بادی های ثانویه به مدت 1 ساعت روی یخ رنگ آمیزی شدند. پس از دو بار شستشو با PBS، سلول ها در پارافورمالدئید 4 درصد تثبیت شدند و بلافاصله مورد سنجش قرار گرفتند. داده های فلوسیتومتری با استفاده از 10 سلول جمع آوری شد و با استفاده از نرم افزار FlowJo 7.6.1 (Tree Star, Inc., Ashland, OR, USA) آنالیز شد.

تحلیل آماری:

تمامی داده ها با استفاده از GraphPad Prism 5.{1}} تجزیه و تحلیل شدند و به صورت میانگین ± خطای استاندارد میانگین ارائه می شوند. داده ها با تجزیه و تحلیل واریانس یک طرفه با آزمون تعقیبی مقایسه های چندگانه توکی برای مقایسه مقادیر میانگین در بین گروه های متعدد مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. پ<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

سیستانش اکیناکوزید: ضد آپوپتوز

3. نتایج

3.1 درمان همزمان با TMZ و سرکوب کننده های اکتئوزیدیگلیوبلاستوماتکثیر و مهاجرت سلولی

درمان ترکیبی با TMZ واکتئوزیدزنده ماندن سلول های C6 را مهار می کند. TMZ زنده ماندن سلولی را به روشی وابسته به دوز کاهش داد (شکل 2A)، در حالی که اکتئوزید به تنهایی هیچ اثر قابل توجهی در هیچ سطح درمانی نداشت (شکل 2B). پس از انکوباسیون در یک محیط کشت حاوی TMZ با یا بدون آکتئوزید به مدت 24 ساعت، یک سنجش MTT برای مقایسه سمیت سلولی سطوح مختلف تیمار انجام شد. TMZ به طور قابل توجهی زنده ماندن سلول را سرکوب کرد، در حالی که اکتئوزید رشد سلول را به طور قابل توجهی سرکوب نکرد. درمان ترکیبی با TMZ و اکتئوزید به طور قابل توجهی باعث کاهش زنده ماندن سلول شد (شکل 2C). درمان با TMZ یا اکتئوزید به تنهایی باعث کاهش توانایی التیام زخم شد (شکل 3A). فاصله زخم (درصد) با استفاده از نتایج نشان داده شده در شکل 3A با نرم افزار ImageJ اندازه گیری شد. فاصله زخم پس از درمان ترکیبی به طور قابل توجهی افزایش یافت (شکل 3B)، در مقایسه با هر درمان فردی. این نتایج نشان می‌دهد که درمان همزمان با TMZ و اکتئوزید یک مهارکننده موثر بودگلیوبلاستوماتکثیر و مهاجرت سلولی

3.2 Acteoside و TMZ بر آپوپتوز در سلول های C6 تأثیر می گذارند.

نتایج تجزیه و تحلیل وسترن بلات نشان داد که سطوح کاسپاز-3، Bax، و p53 فسفریله شده بیشتر و سطوح Bcl-2 به دنبال درمان ترکیبی با TMZ و کمتر بود.اکتئوزیدنسبت به درمان با TMZ به تنهایی (شکل 4A).اکتئوزیدعملکرد میتوکندری با واسطه و تولید گونه‌های اکسیژن فعال (ROS)، که واسطه‌های کلیدی سیگنال‌دهی آپوپتوز هستند، سپس در سلول‌های C6 تیمار شده با TMZ مشاهده شد. برای تأیید توده میتوکندری، تجزیه و تحلیل مرتب‌سازی سلولی فعال شده با فلورسانس با استفاده از MitoTracker Green انجام شد. درمان همراه با TMZ واکتئوزیدمنجر به توده میتوکندریایی بالاتر از درمان با TMZ به تنهایی شد (شکل 4B). تولید ROS پس از درمان همزمان با TMZ و اکتئوزید به طور قابل توجهی بیشتر از تیمار با TMZ به تنهایی بود (شکل 4C). این نتایج نشان می دهد که تولید ROS و عملکرد میتوکندری در آپوپتوز ناشی از درمان با TMZ به علاوه اکتئوزید مهم هستند. درمان همزمان با TMZ و اکتئوزید باعث ایجاد اتوفاژی در سلول های C6 می شود. گزارش شده است که TMZ باعث اتوفاژی می شود (28،29). بنابراین، مطالعه حاضر به بررسی میزان ایجاد اتوفاژی توسط TMZ به علاوه درمان اکتئوزید پرداخت. سلول های C6 با TMZ با یا بدون اکتئوزید تحت درمان قرار گرفتند. پس از 24 ساعت، و سلول ها برای ایمونوفلورسانس رنگ آمیزی شدند تا LAMP1 و LC3 را به عنوان نشانگرهای اتوفاژی شناسایی کنند. سطوح بیان بالاتر LAMP1 و LC3 به دنبال تیمار ترکیبی مشاهده شد (شکل 5A). بیان پروتئین مربوط به اتوفاژی نیز مورد بررسی قرار گرفت و مشخص شد که TMZ تبدیل LC3-I به LC3-II را القا می کند که نشانه ای از تولید اتوفاگوزوم است. نرخ بالاتری از تبدیل LC3-I به LC3-II پس از درمان همزمان با TMZ و اکتئوزید نسبت به درمان با TMZ به تنهایی مشاهده شد. سطوح بیان Rab7 و p62 القای اتوفاژی را در سلول های تیمار شده با TMZ نشان داد (شکل 5B). این یافته‌ها نشان می‌دهد که درمان همزمان با TMZ و اکتئوزید باعث افزایش فرآیند اتوفاژیک در آن می‌شودگلیوبلاستوماسلول ها.

3.3 Acteoside بیان ژن مسیر MAPK را در درمان مبتنی بر TMZ القا می کند.

مطالعات قبلی نشان داده اند که TMZ مسیر MAPK را تنظیم می کند، از جمله p38، JNK و ERK (30). بنابراین، مطالعه حاضر بررسی کرد که آیااکتئوزیدبر بیان ژن MAPK مرتبط با TMZ تأثیر می گذارد. سلول های C6 با TMZ با یا بدون درمان شدنداکتئوزید. پس از 24 ساعت، درمان TMZ منجر به سطوح بیان بالاتر p-p38، p-JNK و p-ERK شد. بیان ژن‌های تنظیم‌شده با TMZ به‌طور قابل‌توجهی پس از درمان TMZ به علاوه آکتئوزید بیشتر از درمان با TMZ به تنهایی بود (شکل 6). این مشاهدات نشان می دهد کهاکتئوزیدمکانیسم های درمانی مبتنی بر TMZ را از طریق مسیر MAPK تحت تاثیر قرار می دهد.

ضد اکتئوزیدیگلیوبلاستوما

بحث

نتایج مطالعه حاضر نشان می دهد که درمان ترکیبی با TMZ بااکتئوزیدپتانسیل درمانی را برایگلیوبلاستومادرمان، و ارائه شواهدی مبنی بر اینکه حساسیت شیمیایی به ترکیبی از TMZ واکتئوزیدمی تواند از طریق افزایش اتوفاژی رخ دهد. به عنوان جهش ازگلیوبلاستوماسلول ها می توانند منجر به غیرفعال شدن مسیر آپوپتوز، القای اتوفاژی توسط TMZ plus شونداکتئوزیددرمان کمکی ممکن است یک روش جایگزین برایگلیوبلاستومادرمان. با این حال، این که آیا اتوفاژی تنها مکانیسم برای آن است یا خیرگلیوبلاستومادرمان با TMZ plusاکتئوزیددرمان کمکی باید روشن شود.

اتوفاژی یک مکانیسم سلولی ضروری برای تخریب پروتئین ها و اندامک های سیتوپلاسمی است. مزیت کاتابولیک اتوفاژی القایی ممکن است در شرایط استرس زا مهم باشد. بنابراین، القای اتوفاژی ممکن است یک مکانیسم تطبیقی ​​برای پیشگیری از مرگ سلولی باشد (31-33). مطالعات قبلی گزارش کرده اند که کاهش اتوفاژی با سرطان در ارتباط است (34-36). علاوه بر این، چندین پروتئین و مسیرهای سیگنال دهی مرتبط با اتوفاژی در طول تبدیل بدخیم از تنظیم خارج می شوند و در نتیجه فعالیت اتوفاژی کاهش می یابد. سطح بیان بالای LC3 نیز با افزایش نرخ بقا در بیماران مبتلا به آن مرتبط استگلیوبلاستومابا نمرات عملکرد ضعیف (37،38). به طور مشابه، نتایج مطالعه حاضر نشان می دهد که بازیابی اتوفاژی طبیعی ممکن است یک استراتژی پنهان برایگلیوبلاستومادرمان، و ممکن است به عنوان مکانیزمی برای محدود کردن رشد غیر طبیعی سلول های تومور عمل کند.

در اتوفاژی طبیعی، اجزای سیتوپلاسمی خاصی در اتوفاگوزوم‌ها جدا می‌شوند که سپس با یک لیزوزوم ترکیب می‌شوند تا تجزیه و بازیافت شوند (39،40). هنگامی که اتوفاژی تنظیم می شود، نرخ تشکیل اتوفاگوزوم از نرخ تخریب لیزوزومی پیشی می گیرد. این وضعیت استرس اتوفاژیک نامیده می شود. اگر استرس یا اتوفاژی غیرطبیعی ادامه یابد، مرگ سلولی می تواند از طریق کاهش انرژی یا تغییر در تعادل beclin-1/Bcl-2 رخ دهد. آپوپتوز همچنین می تواند توسط بیش فعالی اتوفاگوزومی، درگیر شدن اندامک های سیتوپلاسمی از جمله میتوکندری یا شبکه آندوپلاسمی ایجاد شود (41). پیشنهاد شده است که اتوفاژی عمومی می تواند باعث مرگ سلولی در طول گردش طبیعی سیتوپلاسمی و اندامک در سلول های سالم شود. در این فرآیند، سلول خود را از درون «آدم‌خواری» می‌کند که یکی از ویژگی‌های کلیدی مرگ سلولی برنامه‌ریزی‌شده نوع II است. اگرچه مکانیسم هایی که توسط آناکتئوزیداثر درمانی مبتنی بر TMZ را افزایش می دهدگلیوبلاستومادرمان باید به طور کامل روشن شود، اثرات ضد سرطانی نشان داده شده توسط درمان ترکیبی بررسی شده در مطالعه حاضر ممکن است با این مکانیسم های اتوفاژیک مرتبط باشد.

اکتئوزیدیک گلیکوزید فنیل اتانوئیدی است که از گیاهان به دست می آید (22،26). مطالعات قبلی در مورد فعالیت های بیولوژیکی مختلف اکتئوزید گزارش شده است. تغییرات در سطح بیان کاسپاز-3 و LC3 بریده شده در مطالعه حاضر نشان می دهد که درمان با ترکیبی از TMZ واکتئوزیدالقای آپوپتوز و اتوفاژی در سلول های C6 (شکل 4 و 5). نشان داده شد که درمان ترکیبی اثر هم افزایی بر روی داردگلیوبلاستوماسلول ها. اگرچه مکانیسم های احتمالی دیگر این اثرات هم افزایی هنوز مشخص نشده است، مطالعه حاضر القای اتوفاژی را به عنوان یک مکانیسم تومورکشی مهم شناسایی کرد.اکتئوزیدحساسیت شیمیایی در طول TMZ مبتنی برگلیوبلاستومادرمان.

اکتئوزید گلیوبلاستوما را درمان می کند

منابع

1. Friedman HS، Kerby T و Calvert H: Temozolomide و درمان گلیوما بدخیم. Clin Cancer Res 6: 2585-2597، 2000.

2. Mrugala MM و Chamberlain MC: مکانیسم های بیماری: Temozolomide وگلیوبلاستوما- به آینده نگاه کن Nat Clin Pract Oncol 5: 476-486، 2008.

3. Agarwala SS و Kirkwood JM: Temozolomide، یک عامل آلکیله کننده جدید با فعالیت در سیستم عصبی مرکزی، ممکن است درمان ملانوم متاستاتیک پیشرفته را بهبود بخشد. انکولوژیست 5: 144-151، 2000.

4. Stevens MF، Hickman JA، Stone R، Gibson NW، Baig GU، Lunt E و Newton cG: ایمیدازوتترازین های ضد تومور. 1. سنتز و شیمی 8-carbamoyl-3-(2-chloroethyl)imidazo[5,1-d]-1,2,3, 5-tetrazine-4(3H)-one، یک ضد تومور جدید با طیف وسیع عامل. J Med Chem 27: 196-201، 1984.

5. Fulda S: درمان مبتنی بر مرگ سلولیگلیوبلاستوما. Cell Death dis 9: 121, 2018.

6. Chen PH، Shen WL، Shih CM، Ho KH، Cheng CH، Lin CW، Lee CC، Liu AJ و Chen KC: مسیر Notch3 مهار شده توسط CHAC1 در سمیت سلولی گلیوما ناشی از تموزولوماید نقش دارد. Neuropharmacology 116: 300-314، 2017.

7. Oshiro S، Tsugu H، Komatsu F، Ohmura T، Ohta M، Sakamoto S، Fukushima T و Inoue T: اثربخشی درمان تموزولوماید در بیماران مبتلا به گلیوما درجه بالا. Anticancer Res 29: 911-917، 2009.

8. Van den Bent MJ: درمان کمکی گلیوماهای با درجه بالا. Ann Oncol 17 (ضمیمه 10): x186‑x190، 2006.

9. Shen W، Hu JA و Zheng JS: مکانیسم اثرات ضد توموری ناشی از تموزولومید بر سلول های گلیوما. J Int Med Res 42: 164-172، 2014.

10. Barciszewska AM، Gurda D، Głodowicz P، Nowak S و Naskręt-Barciszewska MZ: یک مکانیسم اپی ژنتیکی جدید از عمل تموزولومید در سلول های گلیوما. PLoS One 10: e0136669، 2015.