مبنای علمی برای کاربرد جدید سیستانچ

تماس: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ایمیل:audrey.hu@wecistanche.com

سان ویدونگ1، چن فی2، سان یون2

(1. یانگژو بیمارستان طب سنتی چینی، یانگژو 225009، جیانگ سو؛ 2. دانشکده پزشکی، دانشگاه یانگژو، یانگژو 225001، جیانگ سو)

چکیده: مدل هیپرپلازی پروستات beg nin (BPH) موش صحرایی ایجاد شد و سه گروه دوز اکتئوزید به مدت 4 هفته به صورت خوراکی تجویز شد تا اثر اکتئوزید تقطیر شده ازCistanche tubulosaبر آپوپتوز و فوق ریزساختار غده پروستات در موش های صحرایی مبتلا به BPH تغییر فراساختاری غده پروستات با میکروسکوپ الکترونی عبوری مشاهده شد. نتایج نشان داد که آپوپتوز پروستات نرمال موش صحرایی مشهود نبوده است

میزان آپوپتوز پروستات در گروه مدل، در آکتئوزید با دوز بالاCistanche tubulosaدرمان، آپوپتوز پروستات موش صحرایی به طور قابل توجهی بالاتر از آن از مدل بود.

کلید واژه ها:سیستانچ, Cistanche tubulosaاکتئوزید؛ موش صحرایی شروع هیپرپلازی پروستات؛ آپوپتوز؛ فراساختاری

گیاه سیستانچ

در فرآیند هیپرپلازی خوش خیم پروستات (BPH)، آپوپتوز سلولی یکی از مکانیسم هایی است که در حال حاضر توجه را به خود جلب می کند. کدگذاری ژن آن را تعیین می‌کند و سلول‌ها را قادر می‌سازد تا مرگ برنامه‌ریزی شده سلولی را با پاسخ به سیگنال‌های خاص کنترل کنند.

پس از اینکه پروستات به اندازه بزرگسالان رشد کرد، نرخ تکثیر سلول های پروستات از طریق تعادل متوسط ​​نرخ آپوپتوز بین 1 تا 2 درصد حفظ می شود. هنگامی که تعادل شکسته شود، علت BPH در نظر گرفته می شود. در شرایط عادی، سطح استروژن و آندروژن و گردش خون طبیعی در پروستات نوعی حالت تعادل خود است که در فرآیند تکثیر و آپوپتوز وجود دارد. هنگامی که تعادل بین تکثیر و آپوپتوز از تعادل خارج شود، منجر به رشد و انبساط بیشتر غده می شود که عمدتاً باعث گسترش محفظه سلول های اپیتلیال می شود [1].

در این آزمایش، ما یک مدل هیپرپلازی پروستات موش صحرایی را برای مشاهده و تجزیه و تحلیل اثر اکتئوزید (گلیکوزید شبه انعقادی)، یکی از اجزای شیمیایی پروستات ایجاد کردیم.سیستانچدر آپوپتوز و تغییرات فراساختاری سلول های پروستات موش صحرایی، به منظور ارزیابی اثر اکتئوزید اثر مهار هیپرپلازی پروستات یک مبنای علمی برای توسعه و استفاده از کاربردهای جدید طب چینی سیستانچ فراهم می کند.

سیستانچاستخراج کردن

1 مواد و روش ها

1. 1 حیوان آزمایشی

پنجاه موش صحرایی نر با سن 6-7 هفته، درجه تمیز، با وزن 80-100 گرم، توسط مرکز طب مقایسه‌ای دانشگاه یانگژو ارائه شده است.

1. 2 معرف ها و داروها

تزریق پروپیونات تستوسترون از شرکت داروسازی عمومی شانگهای است، مشخصات آن 25 میلی‌گرم در میلی‌لیتر-1 است و شماره دسته آن 060708 است. محلول رنگ PI از مرکز آزمایش دانشگاه یانگژو است. محتوای Aktiside 945 گرم در کیلوگرم است^-1تهیه شده توسط دپارتمان تجزیه و تحلیل طب چینی، دانشگاه داروسازی چین.

1. 3 تجهیزات آزمایشی

میکروسکوپ الکترونی عبوری Philips Tecnai 12 از فیلیپس در هلند است. فلوسیتومتر FACSAria از BD در ایالات متحده است.

1. 4 گروه بندی و مدل سازی

پس از اخته کردن طبق روش ادبیات [3]، موش‌ها 5 میلی‌گرم (kg·d) تزریق شدند.^-1تستوسترون پروپیونات در پشت موش ها به مدت 4 هفته برای ایجاد یک مدل هیپرپلازی پروستات. موش‌های مدل به‌طور تصادفی به گروه‌های مدل تقسیم شدند: مدل به‌علاوه گروه با دوز بالا اکتئوزید، مدل به‌علاوه گروه با دوز متوسط ​​آکتئوزید، گروه مدل به‌علاوه آکتئوزید با دوز پایین، ده موش در هر گروه. ده موش سالم دیگر به عنوان گروه کنترل بودند.

1. 5 روش مدیریت

یک هفته پس از مدل‌سازی، به گروه‌های اکتئوزید با دوز بالا، متوسط ​​و کم به ترتیب 60، 30، 15 mg·(kg·d){3}} با گاواژ داده شد. به گروه مدل و گروه شاهد به مدت چهار هفته یک بار در روز نرمال سالین با حجم مساوی داده شد، هفته ای یک بار وزن شد و دوز با توجه به وزن بدن تنظیم شد.

1. 6 جمع آوری و پردازش نمونه

1) آماده سازی مواد و نمونه: 24 ساعت پس از آخرین تزریق موش های ناشتا را وزن کرده و موش ها را با دررفتگی دهانه رحم قربانی کنید. بلافاصله قسمت پایین شکم را باز کنید، بافت های اطراف پروستات را جدا کنید، پروستات را آزاد کنید و بخشی از پروستات را برای استفاده در حمام یخ ببرید. هموژنایزر بافت همگن شد، سوسپانسیون تک سلولی پروستات تهیه کرد و با روش یک مرحله ای پروپیدیوم یدید رنگ آمیزی شد [4]. قسمت دیگری از بافت پروستات در 25 گرم در لیتر گلوتارآلدئید تثبیت شد تا مقاطع بسیار نازکی تهیه شود.

2) سوسپانسیون تک سلولی تهیه کنید: در شرایط آسپتیک، پروستات موش را به طور کامل خارج کرده و در پتری دیش قرار دهید، خون و لخته های خون روی سطح بافت پروستات را با PBS بشویید و چربی اطراف، الیاف اضافی را جدا کنید. و غشاهای سلولی از همان پروستات موش، بافت تازه پروستات به اندازه حدود 0.5 سانتی متر³گرفته شد و برای تهیه سوسپانسیون سلولی پروستات به قطعات بریده شد [5]. بلوک بافت پروستات را در یک ظرف پتری قرار دهید و مقدار کمی PBS اضافه کنید. با استفاده از قیچی چشمی، بافت را در یک حمام یخ برش دهید، هموژنایزر را به یک سوسپانسیون آسیاب کنید، 1{2}} میلی لیتر PBS اضافه کنید، بافت هموژنه را پیپت کنید، و از مش نایلونی با اندازه منافذ 0.074 میلی متری استفاده کنید که داخل لوله آزمایش فیلتر شد، سانتریفیوژ شد. در 1 500 r دقیقه^-1به مدت 3 دقیقه، و رسوب سه بار با PBS، هر بار در 500 دور دقیقه شسته شد.^-1سانتریفیوژ کوتاه‌مدت با سرعت پایین برای حذف بقایای سلولی، تا 0.۰۳۷ میلی‌متر فیلتر مش نایلونی اندازه منافذ برای حذف توده‌های سلولی. سلول ها را بشمارید و غلظت سلول را به 2×109 سلول·L تنظیم کنید^-1. با 1 میلی لیتر محلول رنگ آمیزی PI رنگ آمیزی کنید، از نور در دمای 4 درجه به مدت 10 دقیقه محافظت کنید.

3) آماده سازی مقطع فوق نازک: برای تهیه بخش فوق نازک بافت، به ادبیات [6] مراجعه کنید.

2 نتایج و تجزیه و تحلیل

شکل 1 آپوپتوز مدل موش BPH و عمل القایی اکتئوزید

آ. گروه عادی؛ ب گروه مدل; ج گروه دوز بالا Acteoside؛ د گروه دوز کم اکتئوزید

2. 1 اثر اکتئوزید بر آپوپتوز پروستات موش صحرایی

شکل 1 پیک آپوپتوز شناسایی شده توسط فلوسیتومتری را نشان می دهد که نشان می دهد اکتئوزید دارای اثر پرو آپوپتوز است. تجزیه و تحلیل آماری نتایج آپوپتوز سلولی نشان داد که میزان آپوپتوز سلولی موش صحرایی به طور معنی‌داری (1.85±24.7) درصد و (1.{12}}}4±16.1) درصد پس از درمان با دوزهای بالا، متوسط ​​و پایین از موش صحرایی افزایش یافت. اکتئوزید ، (14.5±0.68) درصد، و گروه نرمال (1.1±{{2{{0}}.06) درصد، گروه مدل (9.5±0.5) درصد، گروه مثبت (9.83±9.83) درصد 0.76) تفاوت در درصد مقایسه معنی دار است (P<0.01), indicating="" that="" aktidine="" can="" induce="" cell="" apoptosis,="" the="" effect="" is="" stronger="" than="" that="" of="" the="" positive="" control="" drug="" qianliekang="" (figure="">

شکل 2 رادیوی آپوپتوز در مدل موش BPH و اثر اکتئوزید

2.2 اثر اکتئوزید بر فراساختار سلول های هیپرپلازی پروستات.

مشاهدات میکروسکوپ الکترونی نشان می دهد که پروستات موش طبیعی دارای هسته کامل، آشکارا هسته و توزیع یکنواخت کروماتین هسته ای است. شبکه آندوپلاسمی خشن دارای اندازه یکسان است، مرتب چیده شده است و واکوئل ندارد. هیچ میکروویلی انگشت مانندی در سطح اپیتلیوم وجود ندارد، هیچ تورم میتوکندری و ترشحات کمی در حفره وجود دارد. هسته سلول های پروستات در گروه مدل تغییر شکل داده و منقبض شد و سیتوپلاسم فراوان بود. شبکه آندوپلاسمی خشن به شکل کیست مانند منبسط شد و کیست با ذرات پروتئین با چگالی بالا پر شد. میتوکندری ها کمی متورم بودند (واکوئل هایی نیز وجود داشت)، ترشحات با چگالی متوسط ​​در حفره وجود دارد و دانه های متراکم ترشح گرد در برخی سلول ها یافت شد. در موش های تحت درمان با اکتئوزید، هسته در مقایسه با گروه مدل دست نخورده بود. هسته متمرکز شد، چگالی هسته افزایش یافت، هتروکروماتین انباشته شد، سیتوپلاسم واکوئل داشت، و واکوئل های شبکه آندوپلاسمی خشن کاهش یافت. گروه آکتئوزید با دوز پایین هسته‌های کمی چروکیده، سیتوپلاسم نامنظم، غنی‌تر و کاهش شبکه آندوپلاسمی خشن داشتند (شکل 3).

فواید سیستانچ: ضدآپوپتوز

3 بحث

آپوپتوز فرآیندی از مرگ برنامه ریزی شده سلولی در موجودات چند سلولی است که رشد بدن را تنظیم می کند و ثبات محیط داخلی را حفظ می کند و کدهای ژنتیکی آن را تعیین می کند.

سلول های آپوپتوز دارای ویژگی های مورفولوژیکی و بیولوژیکی منحصر به فرد خود هستند: انقباض کروماتین هسته ای، تجزیه و تکه تکه شدن گسترده DNA، انقباض کامل سلول ها، انقباض غشای سلولی و برآمدگی های بیرونی پوشاننده اندامک ها (مانند میتوکندری و ریبوزوم ها) و تشکیل هسته های مشخصه. قطعات اجسام آپوپتوز، سلول های آپوپتوز نه تنها ساختار و عملکرد کامل غشای سلولی را حفظ می کنند، بلکه ساختار کاملی از اندامک ها را نیز دارند که با نکروز سلولی متفاوت است.

مکانیسم مولکولی آپوپتوز سلولی تاکنون به طور کامل مشخص نشده است. مطالعات [7] نشان داده اند که ژن های زیادی در تنظیم ژن آپوپتوز سلولی نقش دارند.

آپوپتوز فرآیند BPH است که در حال حاضر توجه بیشتری را به خود جلب کرده است. با کدگذاری ژن مشخص می شود و سلول ها را قادر می سازد تا با پاسخ دادن به سیگنال های خاص، مرگ سلولی را کنترل کنند [1]. پس از اینکه پروستات به اندازه بزرگسالان رشد کرد، نرخ تکثیر سلول های پروستات از طریق تعادل نرخ آپوپتوز بین 1 تا 2 درصد حفظ می شود. از بین رفتن این تعادل همیشه به عنوان عامل BPH در نظر گرفته شده است [8]. در شرایط عادی، سطح استروژن و آندروژن و گردش خون منظم در پروستات نوعی حالت تعادل خود است که در فرآیند تکثیر و آپوپتوز وجود دارد. هنگامی که تکثیر و آپوپتوز از تعادل خارج می شود، باعث رشد و انبساط بیشتر غدد می شود که عمدتاً به دلیل گسترش بخش سلول های اپیتلیال است [9]. قطع این تعادل ممکن است به دلیل تغییرات در سطوح یا عملکرد آندروژن باشد. همچنین ممکن است به دلیل هر پاسخی باشد که توسط تحریک AR DHT یا تغییرات در سطوح فاکتور رشد با واسطه DHT ایجاد می شود [2]. در این مطالعه، FCM آپوپتوز سلولی را تشخیص داد و دریافت که میزان آپوپتوز سلول‌های پروستات در موش‌هایی که دوزهای بالایی از اکتئوزید دریافت کردند، به طور قابل‌توجهی افزایش یافت. نتایج میکروسکوپ الکترونی نشان داد که هسته سلول‌های پروستات در گروه مدل تغییر شکل داده است، شبکه آندوپلاسمی خشن به شکل کیست‌مانند به شدت منبسط شده است و کیست با ذرات پروتئین با چگالی بالا پر شده و واکوئله‌ای پیدا شده است. میتوکندری ها به طور خفیف متورم شده بودند، و مطالعات مرتبط[ 10-11 ] این گزارش سازگار است.

پس از مداخله اکتئوزید، میزان هیپرپلازی پروستات در موش‌ها کمتر بود. گروه با دوز بالا همچنین علائم اولیه آپوپتوز را نشان داد: هسته سلول های پروستات دست نخورده باقی ماند و واکوئل های شبکه آندوپلاسمی به طور قابل توجهی کمتر بود. تراکم هسته‌ها، افزایش چگالی هسته‌ای، تجمع هتروکروماتین، مشابه خصوصیات سلول‌های بافت پروستات در موش‌های صحرایی پس از اخته کردن [12-13]. این نشان می دهد که اکتئوزید ازسیستانچمی تواند آپوپتوز سلولی را در موش های مبتلا به هیپرپلازی پروستات القا کند، تعادل آپوپتوز و تکثیر سلول های پروستات را تنظیم و بازگرداند و در مهار تکثیر سلولی پروستات نقش داشته باشد. نتایج این مطالعه و مطالعات قبلی [14] نشان می دهد که اثر مهاری اکتئوزید، یک جزء شیمیاییCistanche tubulosaدر هیپرپلازی پروستات ممکن است به ارتقاء آپوپتوز سلولی، کاهش AR و بیان TGF-UR1 مربوط باشد. مکانیسم دقیق عمل هنوز نیاز به مطالعه بیشتر دارد.

مزیت سیستانچ: بهبود ایمنی

منابع:

[1] جاکومو ان، آنتونیو جی، رافا ال بی بی، و همکاران. التهاب، آپوپتوز، و BPH، شواهد چیست [J]. مکمل های اورولوژی اروپایی، 2006(5): 401-408.

[2] Car son IC، Rittmaster R. نقش دی هیدروتستوسترون در هیپرپلازی خوش خیم پروستات [J]. اورولوژی، 2003، 61: 2-7.

[3] خو شویون، بیان جولیان، چن یوکسیو. روش شناسی آزمایش فارماکولوژیکی [M]. ویرایش 3. پکن: انتشارات پزشکی مردم، 2002: 1552-1553.

[4] Zhai Qiwei، Ji Hongbin، Yan Mingda، و همکاران. استفاده از یک سیستم بیان القایی tet-off برای مطالعه عملکرد Akt[J]. بولتن علوم چینی، 2000، 45( 16): 1738-1741.

[5] Xia Anzhou، Xing Shuhua، Zhu Xuewen، و همکاران. مطالعه مقایسه ای روش های آماده سازی سوسپانسیون تک سلولی بافت کلیه [J]. Journal of Xuzhou Medical College, 2004, 24( 1):50-53.

[6] سون یون، وانگ دجون، لیو شیائومی، و همکاران. تغییرات فراساختار ریه در موش های آزمایشگاهی پیر و اثر پلی ساکارید Cistanche deserticola [J]. بولتن دارویی چینی، 2002، 18(1): 84-87.

[7] لیو چینگ مینگ، لو مینگجی. پیشرفت تحقیقات در پاتوژنز تکثیر سلولی هیپرپلازی خوش خیم پروستات و آپوپتوز [J]. علوم آزمایشگاهی پزشکی جیانگشی، 2005، 23( 2): 141-143.

[8] Sharia t SF، اشفق R، Roehrborn CG، و همکاران. بیان بیومارکرهای survivin و آپوپتوتیک در هیپر پلاسمای خوش خیم پروستات [J]. J Urol، 2005، 174: 2046-2050.

[9] Unter G، Madersbacher S، Berg er P. هیپرپلازی خوش خیم پروستات: بازسازی بافت مرتبط با سن [J]. Exp Gerontol، 2005، 40: 121-128.

[10] ژنگ هنگ، شائو چونلی، کیان جیاکینگ. اثر مهاری هیدروکلراید بر هیپرپلازی پروستات در موش صحرایی [J]. Journal of Tongji Medical University, 1999, 28( 3):227-229.

[11] ژونگ وی، کیو شدونگ، قایقرانی جیانگ. تغییرات مورفولوژیکی هیپرپلازی خوش خیم پروستات و تفاوت بیان ARmRN A [J]. مجله دانشگاه پزشکی شیان، 1999، 20( 2): 145-149.

[12] Niu Yuanjie، Dong Kequan، Bai Jingwen، و همکاران. تغییرات پاتولوژیک پویا پروستات سگ پس از اخته [J]. مجله اورولوژی چینی، 1998، 19( 7): 429-433.

[13] Ye Zhangqun، Lan Ruzhu، Zhou Yusheng، و همکاران. تغییرات دینامیکی در ریزساختار پروستات شکمی موش پس از اخته [J]. مجله اورولوژی چینی، 2001، 22( 8): 468-472.

[14] سان ویدونگ، چن فی، سون یون. اثر مهاری Aktiside بر مدل تجربی هیپرپلازی خوش خیم پروستات [J]. مجله دانشگاه یانگژو: کشاورزی و علوم زیستی

نسخه، 2008، 29(3): 55-58.