اثر درمانی و مکانیسم گلیکوزیدهای فنیل اتانول سیستانچ بر اسپرماتوژنز ناشی از سیکلوفسفامید در موش

تماس: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ایمیل:audrey.hu@wecistanche.com

ZHAODong-hai1، ZHANGLei2، ZHANGYan3، QILing1، ZOU Xiang-ming4

[خلاصه]

هدف:برای کشف اثر درمانیگلیکوزیدهای فنیل اتانوئید سیستانچروی موش‌هایی که اسپرم‌زایی ناشی از سیکلوفسفامید دارند و مکانیسم اثر آن را به طور مقدماتی روشن می‌کند.روش:روش استخراج اتانول برای استخراجگلیکوزیدهای فنیل اتانوئید سیستانچ. چهل موش BALB/C به طور تصادفی به یک گروه کنترل، یک گروه مدل، یک گروه با دوز کم تقسیم شدند.گلیکوزید فنیل اتانوئید سیستانچگروه (50 mg·kg-1)، و یک گروه با دوز بالا (100 mg·kg-1)، با 10 موش در هر گروه. به جز گروه کنترل، موش‌های گروه‌های دیگر سیکلوفسفامید (80 میلی‌گرم بر کیلوگرم-1) هر روز به مدت 5 روز متوالی برای تهیه مدل‌های موشی اختلالات اسپرم‌زایی تزریق شدند. پس از آخرین تجویز، موش‌ها در گروه‌های با دوز پایین و دوز بالا قرار گرفتندگلیکوزیدهای فنیل اتانوئید سیستانچدوزهای مربوطه توسط گاواژ داده شد و به موش‌های گروه کنترل و گروه مدل، همان حجم نرمال سالین با گاواژ، یک بار در روز به مدت 30 روز داده شد. بیست و چهار ساعت پس از آخرین گاواژ، بافت بیضه موش گرفته شد. برای تعیین سطح تستوسترون در هموژن بافت بیضه موش، از روش ایمونوسوربنت متصل به آنزیم استفاده شد. تراکم اسپرم، تحرک اسپرم و میزان ناهنجاری اسپرم در هر گروه مقایسه شد. تغییرات مورفولوژیکی بافت بیضه با رنگ‌آمیزی HE مشاهده شد. یافته‌ها: در مقایسه با گروه شاهد، تراکم اسپرم و سرعت حرکت اسپرم در گروه مدل کاهش یافت (P<0.01), the="" rate="" of="" sperm="" deformity="" increased=""><0.01), and="" the="" level="" of="" testosterone="" in="" the="" testicular="" tissue="" homogenate="" decreased=""><0.01). 0.01);="" compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" sperm="" density="" and="" sperm="" motility="" of="" mice="" in="" each="" dose="" group="" of="">گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید سیستانچبه طور قابل توجهی افزایش یافتند (P<0.01), the="" rate="" of="" sperm="" deformity="" decreased=""><0.01), and="" the="" testicular="" tissue="" the="" level="" of="" testosterone="" in="" the="" homogenate="" increased=""><0.05 or=""><0.01). histological="" observations="" showed="" that="" the="" seminiferous="" tubules="" in="" the="" testis="" of="" the="" model="" group="" were="" atrophied="" and="" degenerated,="" the="" seminiferous="" epithelium="" was="" significantly="" thinner,="" the="" arrangement="" of="" spermatogenic="" cells="" was="" disordered,="" and="" the="" number="" of="" sperm="" in="" the="" cavity="" decreased;="" the="" number="" of="" the="" seminiferous="" epithelium="" in="" the="" testes="" of="" the="">گلیکوزید فنیل اتانوئید سیستانچگروه به طور قابل توجهی افزایش یافت، لایه ها متمایز هستند، سلول های اسپرماتوژن به طور منظم، محکم و منظم چیده شده اند و اسپرم در لومن دیده می شود.نتیجه: گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید سیستانچاثر درمانی قابل توجهی بر اختلال اسپرماتوژنز ناشی از سیکلوفسفامید در موش دارد و مکانیسم آن ممکن است با بهبود سطح تستوسترون در بافت های بیضه مرتبط باشد.

[کلید واژه ها]گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید سیستانچ; سیکلوفسفامید؛ اختلال در تولید اسپرم؛ موش، BALB/C

برای محصولات سیستانچ کلیک کنید

به دلیل تسریع ریتم اجتماعی، عادات بد زندگی و آلودگی های محیطی و عوامل دیگر، کیفیت غیرطبیعی اسپرم مانند اولیگواسپرمی و آستنواسپرمی عامل اصلی ناباروری مردان شده است [1]. در حال حاضر داروهای کمتری برای درمان اولیگواسپرمی و آستنواسپرمی وجود دارد و اثر درمانی آن مشخص نیست. نسخه‌های طب سنتی چینی یا مواد فعال تأثیرات خوبی در بهبود عملکرد تولید مثل مردان دارند [2-6]. با این حال، به دلیل گستردگی داروهای تجویزی، رابطه بین اثرات دارویی و مواد موثره دارو مشخص نیست، که ترویج و کاربرد داروهای اسپرم‌زا را محدود می‌کند. تحقیق و توسعه مواد موثره طب چینی و بررسی اثرات درمانی آن در آسیب های باروری از ارزش کاربردی خوبی برخوردار است.گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید سیستانچیکی از مهم ترین مواد فعال درCistanche deserticola. آنها معمولاً گلیکوزیدهای طبیعی حاوی پیوندهای استری و پیوندهای اکسو گلیکوزیدی با گلوکز به عنوان هسته هستند. آنها به طور گسترده در گیاهان دو لپه ای یافت می شوند [7]. مطالعات [8] نشان داده استسیستانچفنیل اتانوئیدگلیکوزیدهامی تواند از اسپرم موش در برابر آسیب اکسیداتیو در شرایط آزمایشگاهی محافظت کند، اما هیچ گزارشی در مورد اسپرم زایی آن وجود ندارد. این آزمایش اثر درمانی گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید سیستانچ را بر عملکرد اسپرم زایی موش های دارای اسپرم زایی ناشی از سیکلوفسفامید مورد مطالعه قرار می دهد و مبنایی تجربی و نظری برای کاربردگلیکوزیدهای فنیل اتانوئید سیستانچدر درمان اختلالات اسپرماتوژنز

1. مواد و روش ها

1.1. حیوانات آزمایشگاهی، معرف های اصلی و ابزار

40 موش بالغ BALB/C کلاس SPF، 6-8 هفته سن، با توده بدنی 20-22 گرم، از مرکز آزمایشی حیوانات دانشکده پزشکی پایه دانشگاه جیلین و شماره گواهی حیوان خریداری شدند. : SCXK (قرقیزستان) 2008-005. موش ها به مدت 5 روز قبل از آزمایش به صورت سازگار پرورش داده شدند. شرایط تغذیه: 22 درجه تا 25 درجه، ریتم شبانه روزی (12 ساعت در 12 ساعت)، آب آشامیدنی و غذای رایگان. سیستانچ محصول شرکت بازرگانی سین کیانگ داکانگ است. سیکلوفسفامید تزریقی از شرکت دارویی جیانگسو هنگروی (به شماره دسته 11061921) خریداری شد. کیت ایمونواسی مرتبط با آنزیم تستوسترون هموژن بافت بیضه از Tianjin Jiuding Medical Bioengineering Co., Ltd. (شماره دسته) 20120812 خریداری شده است، سایر معرفها همگی درجات تحلیلی تولید داخل هستند. میکروپلیت خوان PLUS384 (MDC در ایالات متحده)، میکروسکوپ معکوس TE2000U (Nikon، ژاپن) و سانتریفیوژ J{15}}XP (Nanodrop، ایالات متحده).

1.2 تهیه سیستانش فنیل اتانول گلوکوزید

10 گرم پودر سیستانچ با رفلاکس با اتانول 70 درصد، دو بار، هر بار 2 ساعت، برای به دست آوردن کنسانتره گلیکوزید فنتیل الکل استخراج شد. محلول غلیظ بر روی ستون رزین ماکرو متخلخل D101 کروماتوگرافی شد و با 70 درصد اتانول شستشو داده شد تا الکل فنکوزید سیستانچ بدست آید. اسپکتروفتومتر UV عصاره را در طول موج 333 نانومتر شناسایی کرد.

1.3 تهیه مدل حیوانی و روش تجویز دارو

پس از اینکه 40 موش نر BALB/C به مدت 5 روز به صورت تطبیقی ​​تغذیه شدند، موش ها به طور تصادفی به 4 گروه (10 موش در هر گروه) تقسیم شدند: گروه کنترل، گروه مدل، سیستانچ.گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید سیستانچگروه با دوز کم وگلیکوزیدهای فنیل اتانوئید سیستانچگروه با دوز بالا به جز گروه کنترل، به سه گروه دیگر از موش‌ها تزریق داخل صفاقی سیکلوفسفامید 80 میلی‌گرم بر کیلوگرم{2}} برای هر موش به مدت 5 روز متوالی داده شد تا مدل‌های حیوانی اختلالات اسپرم‌زایی تهیه شود. پس از تهیه مدل، موش‌ها در دو گروه کم و با دوز بالا قرار گرفتندسیستانچفنیل اتانوئید به ترتیب 50 و 100 mg·kg-1·d-1 داده شد. به موش های گروه کنترل و گروه مدل، حجم مساوی نرمال سالین داده شد. یک بار در روز به مدت 30 روز. تمام موش‌ها 24 ساعت پس از آخرین تجویز دارو قربانی شدند و آزمایش‌های دوطرفه انجام شد. بیضه سمت راست با فرمالدئید فیکس شد. اپیدیدیم و بیضه از سمت چپ گرفته شد. بیضه هموژنیزه شد و در 3،{7}} دقیقه به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ شد. مایع رویی گرفته شد و برای آزمایش در یک جعبه یخ در -20 درجه نگهداری شد. اپیدیدیم چپ برای تراکم اسپرم، تحرک اسپرم و میزان تغییر شکل آزمایش شد.

1.4 تعیین تراکم اسپرم، تحرک اسپرم و میزان تغییر شکل

یک لوله آزمایش حاوی 10 میلی لیتر محلول مغذی اسپرم [9] را در یک حمام آب با دمای ثابت قرار دهید تا تا دمای 37 درجه گرم شود، یک اپیدیدیم یک طرفه برای برداشتن بافت همبند و چربی برداشته، بافت را برش دهید و در لوله آزمایش قرار دهید. 37 درجه به مدت 10 دقیقه پس از آزاد شدن کامل اسپرم، 1 قطره را روی صفحه شمارش سلول خون بریزید و تراکم اسپرم را طبق روش سلول شماری محاسبه کنید. نتیجه به صورت تعداد اسپرم در میلی لیتر بیان می شود. علاوه بر این، 5 میکرولیتر سوسپانسیون اسپرم و همان مقدار ائوزین-Y را از لوله آزمایش بگیرید، خوب مخلوط کنید، آن را به مدت 10 دقیقه در دمای اتاق قرار دهید، یک لیوان پوششی اضافه کنید و با میکروسکوپ نوری مشاهده کنید. اسپرم‌های مرده به رنگ صورتی، اسپرم‌های زنده رنگ‌آمیزی نمی‌شوند و سیتوپلاسم شفاف است. هر نمونه 200 اسپرم را می‌شمارد، زنده‌مانی اسپرم را محاسبه می‌کند، نتیجه به صورت درصد بیان می‌شود، زنده ماندن اسپرم=تعدادی اسپرم زنده / تعداد کل اسپرم × 100 درصد . 5 میکرولیتر دیگر از سوسپانسیون اسپرم به مدت 5 دقیقه در متانول تثبیت شد، خشک شد و با محلول آبی ائوزین 2 درصد به مدت 1 ساعت رنگ آمیزی شد، شسته و خشک شد. به دنبال قسمت هایی با همپوشانی اسپرم کمتر در زیر یک عدسی کم مصرف باشید و از یک لنز با قدرت بالا برای بررسی مورفولوژی اسپرم به ترتیب استفاده کنید. هر موش 1،{20}} اسپرم کامل را بررسی کرد. سرهای اسپرم بدون قلاب، موزی شکل، بی شکل، سر چاق و سر دوتایی به عنوان ناهنجاری در نظر گرفته شدند. میزان تغییر شکل اسپرم محاسبه شد و نتایج به صورت درصد بیان شد. نرخ تغییر شکل اسپرم=تعدادی اسپرم تغییر شکل یافته / تعداد کل اسپرم × 100 درصد.

1.5 تعیین هورمون های تولید مثل

بیضه از غشاء جدا شد و در یک ظرف ویال قرار داده شد و محیط همگن از قبل سرد شده (0.01mol·L-1 ساکارز، 0.01mol) · L-1 Tris-HCl، 0.1mmol·L{10}} محلول EDTA-Na2، pH 7.4، بافت بیضه را با قیچی چشم برش دهید، آن را در یک لوله همگن شیشه ای ریخته و در 4 سانتریفیوژ کنید. 000×g به مدت 10 دقیقه در دمای پایین، و مایع رویی را بگیرید، از کیت سنجش ایمونوسوربنت متصل به آنزیم برای اندازه گیری سطح تستوسترون در هموژن بافت بیضه استفاده کنید و 3 نمونه موازی را برای هر نمونه آزمایش کنید. مراحل و روش های آزمایشی مطابق با دستورالعمل کیت تکمیل شد.

1.6 مشاهده مورفولوژیکی بیضه

بخش های پارافینی از بیضه موش را که با HE رنگ آمیزی شده است، بردارید و توزیع اسپرماتوگونی و سلول های اسپرماتوژن را در بافت بیضه در زیر میکروسکوپ نوری مشاهده کنید.

1.7 تجزیه و تحلیل آماری

تجزیه و تحلیل آماری با استفاده از نرم افزار آماری SPSS17.{1}} انجام شد. تراکم اسپرم، سرعت تحرک اسپرم، نرخ تغییر شکل اسپرم و سطح تستوسترون بیضه موش‌های هر گروه به صورت x±s بیان شد و مقایسه بین گروه‌ها با تجزیه و تحلیل واریانس تک عاملی انجام شد.

2. نتایج

2.1. تراکم اسپرم، تحرک اسپرم و میزان تغییر شکل اسپرم در هر گروه از موش ها

در مقایسه با گروه کنترل، تراکم اسپرم و زنده ماندن اسپرم در گروه مدل کاهش یافت (P<0.01), and="" the="" sperm="" deformity="" rate="" increased=""><0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" sperm="" density="" and="" sperm="" motility="" rate="" of="" mice="" in="" each="" dose="" of="">گلیکوزید فنوکسی اتانول سیستانچافزایش یافت (P<0.05 or=""><0.01), and="" the="" rate="" of="" sperm="" deformity="" decreased=""><0.05 and=""><0). .01).="" compared="" with="" the="" low-dose="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" glycoside="" group,="" the="" high-dose="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" glycoside="" group="" had="" higher="" sperm="" density="" and="" sperm="" motility=""><0.05), and="" the="" rate="" of="" sperm="" deformity="" decreased=""><0.05). see="" table="">

2.2 سطح تستوسترون در بافت بیضه موش های هر گروه

سطح تستوسترون در همگن بافت بیضه گروه شاهد و گروه مدل (10.26.26±0.57) و (5.33±0.84) نانومول·L-1 بود. به ترتیب. سطح تستوسترون گروه مدل به طور معنی داری کمتر از گروه کنترل بود (P<0.01). the="" testosterone="" levels="" in="" the="" testicular="" tissue="" homogenate="" of="" the="" low-dose="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" glycoside="" group="" were="" (7.55±1.21)="" and="" (10.35±0.94)="" nmol·l-1.="" the="" level="" of="" testosterone="" in="" the="" low="" and="" high-dose="" groups="" of="" cistanche="" cistanche="" ethanol="" glycosides="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" the="" model="" group=""><0.05 or=""><0.01). the="" testosterone="" level="" in="" the="" testicular="" tissue="" homogenate="" of="" the="">سیستانچگروه دوز بالا فنتیل گلیکوزید cistanche به طور معنی داری بیشتر از گروه با دوز پایین بود (P<>

2.3 مورفولوژی بیضه موش در هر گروه

با مشاهده میکروسکوپ نوری، لوله‌های اسپرم‌ساز در بیضه‌های گروه نرمال به‌طور متراکم چیده شدند، سطح و تعداد سلول‌های زاینده زیاد بود، اپیتلیوم منی‌ساز به‌طور مرتب چیده شد و لوله‌های اسپرم‌ساز همگی با تشکیل اسپرم مشاهده شدند. در گروه مدل، لوله های اسپرم ساز در بیضه موش ها آتروفی و ​​تحلیل رفت، اپیتلیوم اسپرم ساز به طور قابل توجهی نازک شد، تعداد لایه های اپیتلیال کاهش یافت، نظم و ترتیب به هم خورد و تعداد اسپرم ها در حفره کاهش یافت. در مقایسه با گروه مدل، دوز پایین ازگلیکوزید فنتیل الکل سیستانچ.

در گروه، تعداد لایه‌های اپیتلیال منی‌ساز لوله‌های منی‌ساز افزایش یافت، ترتیب اپیتلیوم منظم‌تر بود و آسیب لوله‌های اسپرم‌ساز به وضوح بهبود یافت. ساختار لوله های منی ساز در دوز بالاگلیکوزید فنیل اتانوئید سیستانچگروه به طور قابل توجهی بهبود یافت و تعداد و تعداد لایه های اپیتلیال منی ساز به طور قابل توجهی افزایش یافت. با چیدمان منظم، اسپرم های بالغ در لوله های اسپرم ساز وجود دارد و ساختار اساساً به حالت عادی بازگشته است. شکل 1 (Inset 6) را ببینید.

3 بحث

سیکلوفسفامید یک داروی رایج ضد تومور و سرکوب کننده ایمنی است که عمدتاً با انواع عملکردهای بیولوژیکی داخل سلولی از طریق آلکیلاسیون DNA تداخل می کند. سمیت تولید مثلی یکی از عوارض جانبی اصلی سیکلوفسفامید [3] است که به راحتی می تواند منجر به آسیب DNA اسپرم و رشد غیر طبیعی اسپرم شود. مطالعات بالینی [10-11] نشان می‌دهد که سمیت تولید مثلی سیکلوفسفامید می‌تواند باعث آزواسپرمی یا اولیگواسپرمی شود. ، منجر به ناباروری یا بروز نقص یا ناهنجاری های ژنتیکی در فرزندان می شود.

Cistanche tubulosaیک گیاه انگلی چند ساله از خانواده لیدن است. این یک داروی چینی معروف است که کلیه و یانگ را تغذیه می کند، خون را تغذیه می کند و روده ها را تغذیه می کند. این یک داروی معمولی است که برای درمان سنتی اختلال تولید مثل مردان استفاده می شود [12].گلیکوزیدهای فنیل اتانوئیدیکی از مهم ترین اجزای فعال هستندسیستانچ[13] و دارای طیف گسترده ای از اثرات دارویی مانند ضد اکسیداسیون، ضد پیری و ضد تومور است [14].

در این مطالعه از سیکلوفسفامید برای تهیه مدل موشی اختلال اسپرم زایی استفاده شد و اثر درمانی گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید سیستانچ بر اختلال اسپرماتوژنز ناشی از سیکلوفسفامید مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد که در مقایسه با گروه نرمال، تراکم اسپرم در گروه مدل کاهش، میزان بقا کاهش و میزان تغییر شکل افزایش یافت. در مقایسه با گروه مدل، همه گروه‌های دوز گلیکوزیدهای فنوکسی اتانول سیستانچ می‌توانند به طور موثری تراکم اسپرم را افزایش دهند، تحرک اسپرم را افزایش داده و میزان تغییر شکل اسپرم را کاهش دهند. نتایج فوق نشان می دهد که گلیکوزیدهای فنوکسی اتانول سیستانش می توانند اسپرم زایی را تقویت کرده و از بیضه آسیب دیده محافظت کنند. نتایج مورفولوژی بیضه نشان داد که پس از درمان باگلیکوزید فنیل اتانوئید سیستانچتعداد اپیتلیوم اسپرم ساز در بیضه موش های مدل به طور قابل توجهی افزایش یافت، لایه ها متمایز بودند، سلول های اسپرم زا به طور منظم، محکم و منظم چیده شدند و اسپرم در لومن دیده می شود که نشان می دهد کهفنیل اتانوئید سیستانچمی تواند تغییر کند شانه ساختار و مورفولوژی اپیتلیوم منی ساز را پس از آسیب تولید مثلی بازیابی می کند.

تستوسترون تمایز سلول های زایای مردانه را تنظیم می کند و شرط لازم برای رشد طبیعی بیضه و بروز طبیعی اسپرم است. برخی از مطالعات [15] گزارش کردند که حذف انتخابی گیرنده های آندروژن در سلول های سرتولی بیضه باعث اختلال در رشد اسپرم و عقیمی مردان می شود. در این مطالعه از سیکلوفسفامید برای تولید اسپرماتوژن استفاده شد.

پس از مدل آسیب مانع، سطح تستوسترون در بافت بیضه موش ها به طور قابل توجهی کمتر از گروه عادی بود. پس از عمل گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید سیستانچ، سطح تستوسترون در هر گروه دوز افزایش یافت و سطح تستوسترون در گروه با دوز بالا به طور قابل توجهی بیشتر از گروه با دوز پایین بود. پیشنهاد می شود که گلیکوزیدهای فنوکسی اتانول سیستانچ ممکن است با افزایش سطح تستوسترون در بافت بیضه برای درمان اختلالات اسپرماتوژنز باعث افزایش اسپرماتوژنز شوند، اما مکانیسم اثر آن بر تستوسترون نیاز به تحقیق و بحث بیشتری دارد.

تستوسترون تمایز سلول های زایای مردانه را تنظیم می کند و شرط لازم برای رشد طبیعی بیضه و بروز طبیعی اسپرم است. برخی از مطالعات [15] گزارش کردند که حذف انتخابی گیرنده های آندروژن در سلول های سرتولی بیضه باعث اختلال در رشد اسپرم و عقیمی مردان می شود. در این مطالعه از سیکلوفسفامید برای تولید اسپرماتوژن استفاده شد.

پس از مدل آسیب مانع، سطح تستوسترون در بافت بیضه موش ها به طور قابل توجهی کمتر از گروه عادی بود. پس از اقدام ازگلیکوزیدهای فنیل اتانوئید سیستانچسطح تستوسترون در هر گروه با دوز افزایش یافت و سطح تستوسترون در گروه با دوز بالا به طور قابل توجهی بیشتر از گروه با دوز پایین بود. پیشنهاد می شود که گلیکوزیدهای فنوکسی اتانول سیستانچ ممکن است با افزایش سطح تستوسترون در بافت بیضه برای درمان اختلالات اسپرماتوژنز باعث افزایش اسپرماتوژنز شوند، اما مکانیسم اثر آن بر تستوسترون نیاز به تحقیق و بحث بیشتری دارد.

[منابع]

[1] وانگ ییسین، ژنگ جوفن. پیشرفت جدید در تحقیقات ناباروری مردان [J]. مجله چینی آندرولوژی، 2006، 12(9): 771-774.

[2] Xie Jianxing، وانگ جون، چن مینگ، و همکاران. اثر کپسول Guilingji بر موش های مدل مبتلا به الیگواسپرمی. نقش تولید اسپرم و تاثیر آن بر هورمون های جنسی [J]. مجله پزشکی و داروسازی سنتی چینی دانشگاه گوانگژو، 2011، 28 (6): 621-623.

[3] ژانگ چانگ چنگ، جیا لیانگلیانگ، لی شوچائو، و همکاران. فلاونوئیدهای تام اپیمدیوم باعث به حداقل رساندن سیکلوفسفامید می شوند. پزشکی ثبت اختراع چینی، 2010، 32 (12): 2052-2055.

[4] زو لی، وانگ روئی، ژانگ ویکسینگ، و همکاران. گرانول‌های Shengjing بر روی اختلال اسپرم ناشی از سیکلوفسفامید مانع از تأثیر درمانی موش‌ها می‌شوند [J]. مجله دانشگاه ژنگژو: نسخه علوم پزشکی، 2008، 43(2): 267-270.

[5] وانگ روئی، زو لی، ژانگ ویکسینگ، و همکاران. تأثیر گرانول‌های Shengjing طب چینی بر روی موش‌های آسیب‌دیده در اسپرم‌زایی تحقیقات تجربی بر روی اثرات درمانی [J]. مجله چینی آندرولوژی، 2008، 14 (11): 1046-1049.

[6] Guo Kaihua، Gao Fulu، Niu Siyun، و همکاران. اثر جوشانده Heshouwu بر بافت بیضه موش های مسن تأثیر مسیر انتقال سیگنال سلولی Rb/p53 [J]. مجله آناتومی، 2010، 41(3): 435-439.

[7] وو هایهونگ، ژوان گوئودونگ، لیو چون کوان. اثر استخراج رفلاکس سیستانش فنیل اتانول گلوکزید با تحقیق فاکتور اتانول [J]. علوم کشاورزی جیانگ سو، 2009 (1): 250-251.

[8] لی گانگ، ژو ونبین، نیو فی، و همکاران. اثرات گلوکزید فنیل اتانول سیستانچ بر روی اسپرم موش تحقیق در مورد اثر محافظتی آسیب اکسیداتیو خارجی [J]. Lishizhen Traditional Chinese Medicine and Materia Medica، 2010، 21(9): 2205-2207.

[9] Chen Deyu، Liu Limin، Xie Qingdong، و غیره. آنتی بادی های ضد مایع منی بر عملکرد میتوکندری اسپرم تاثیر [J]. مجله دانشکده پزشکی دانشگاه شانتو، 2008، 21(1): 4-6.

[10] KenneyLB، Laufer MR، Grant FD، و همکاران. خطر بالای اطلاعات Highdoseccyclophaphamiddeforsarcomaduring childhood [J]. Cancer, 2001, 91(3): 613-621.

[11] JahunkainenK، EhmckeJ، Houm، و همکاران. عملکرد بیضه و حفظ باروری در بیماران سرطانی [J]. BestPrect ResClinEndocrinol Metab، 2011، 25: 287-302.

[12] گائو ژانیو، ژو هایتائو، لین کیانگ. توانایی سیستانچ در مقاومت در برابر خستگی ورزش در موش‌ها و تأثیر رادیکال‌های آزاد مغز [J]. علوم کشاورزی آنهویی، 2011، 39(16): 9592-9595.

[13] رن لو، گو شیائوونگ، تانگ جیان، و همکاران. گلیکوزیدهای فنیل اتانول در تحقیقات استخراج و خالص سازی سیستانچ کشت شده [D]. Wuxi: دانشگاه جیانگ نان، 2006، 25(3): 33-36. [14] جینگهویی، زو جیانفنگ، لی جیائوشه. پیشرفت در تحقیقات فارماکولوژیک گلیکوزیدهای فنوکسی اتانول نمایشگاه [J]. Lishizhen Medicine and Materia Medica، 2006، 17(3): 440-441.

[15] ChangC، ChenYT، YehSD، و غیره. Infomedia بهار TheandrogenreceptorinSertolicells [J]. ProcNatlAcadSci USA, 2004, 101 (18): 6876-6881.