مداخلات ضد پیری بر تغییر پذیری طول عمر در رابطه جنسی، کرنش، رژیم غذایی و مد وابسته به مواد مخدر تاثیر می گذارد

Contact:jerry.he@wecistanche.com

Andrzej Bartke1, Tracy R. Evans2, and C.J.M. Musters3

1Department of Internal Medicine, Geriatrics Research, Southern Illinois University School of Medicine, Springfield, IL 62794, USA

2Illinois دولت موزه تحقیقات و مجموعه مرکز، اسپرینگفیلد، ایلینوی 62703، ایالات متحده آمریکا

3Institute of Environmental Sciences, Leiden University, Leiden 2333 CC, The Netherlands

مکاتبات با: آندرزیج بارتکه؛ ایمیل: abartke@siumed.edu

واژه های کلیدی: طول عمر، واریانس، هورمون رشد، راپامیسین، آکاربوز، 17 آلفا استردیول، محدودیت کالری، موش

دریافت: ۱۵ بهمن ۱۳۹۷ پذیرش: ۲۲ خرداد ۱۳۹۸ انتشار: ۳ خرداد ۱۳۹۸

کپی رایت: بارتکه و همکاران. این مقاله دسترسی آزاد توزیع شده تحت شرایط مجوز اسناد عوام خلاق (CC BY 3.0) ، که اجازه استفاده بدون محدودیت ، توزیع ، و تولید مثل در هر رسانه ، به شرطی که نویسنده اصلی و منبع اعتبار است.

سیستانچه اثر ضد پیری دارد

چکيده

به تازگی گزارش شده است که عوامل اجتماعی و اقتصادی مربوط به تفاوت در امید به زندگی انسان با تفاوت در واریانس سن در مرگ همراه است. تا مشخص شود که آیاضد پیریمداخلات همچنین واریانس طول عمر را تغییر می دهند، ما داده های موش های تحت درمان با داروهایی را که بر پیری یا محدودیت کالری و از موش های جهش یافته طولانی مدت تأثیر می گذارد، مورد تجزیه و تحلیل قرار داده اند. رابطه تغییرات طول عمر و واریانس طول عمر به رابطه جنسی و درمان و ظاهراً به کرنش نیز بستگی دارد. افزایش طول عمر موش های نر تحت درمان با موثرضد پیریداروها با کاهش واریانس سن در مرگ و کاهش ظاهری مرگ و میر اوایل زندگی همراه بودند. گسترش زندگی ناشی از جهش های مرتبط با هورمون رشد و محدودیت کالری تمایل به افزایش واریانس طول عمر در زنان تنها. نتیجه می گیریم که تاثیرضد پیریمداخلات در مورد واریانس سن در مرگ و توزیع طول عمر فردی در موش های آزمایشگاهی وابسته به درمان و دی مورف جنسی است.

مقدمه

در مطالعات پیری، تغییرات طول عمر معمولاً با مقایسه میانگین (میانگین) یا طول عمر میانه مورد تجزیه و تحلیل قرار می گیرد. به طور مکرر برخی برآوردهای طول عمر حداکثری نیز در نظر گرفته می شود. در حالی که مقادیر انحرافات استاندارد یا خطاهای استاندارد میانگین به طور معمول گزارش می شوند، توزیع سن فردی در هنگام مرگ به ندرت مورد تجزیه و تحلیل یا بحث قرار می گیرد. این در تضاد با علاقه اخیر به تجزیه و تحلیل توزیع نشانگرهای زیستی پیری با استفاده از اندازه گیری فاصله آماری [1] برای تخمین سطح اختلال فیزیولوژیک و ارتباط آن با تاب آوری و استحکام در طول پیری [2].

در یک نشریه اخیر بر اساس تجزیه و تحلیل داده های جمعیتی، ون رالته و همکارانش گزارش دادند که وضعیت اقتصادی اجتماعی نه تنها بر میانگین طول عمر بلکه تغییر پذیری طول عمر انسان تأثیر می گذارد [۳]. این محققان با استفاده از نمونه ای از زنان فنلاندی نشان دادند که کاهش میانگین طول عمر افراد کمتر تحصیل کرده و کمتر مرفه با تغییر پذیری بیشتر طول عمر همراه است. رابطه معکوس امید به زندگی و تنوع طول عمر نیز در سایر جمعیت های انسانی دیده شد [3]. مفهوم عملی این یافته ها این است که هم برای افراد و هم برای سیستم های مراقبت های بهداشتی پیش بینی سن در مرگ افراد کمتر ممتاز دشوارتر از اقشار ممتازتر یا برای کل جمعیت است.

به دلیل اهمیت بالقوه این رابطه برای تجزیه و تحلیل داده های مرگ و میر و نشانگرهای زیستی فیزیولوژیک در مطالعات پیری و همچنین برای ملاحظات مختلف بهداشت عمومی، ما فکر کردیم که آن را

جدول 1. برآوردها از ضریب رگرسیون خط نصب شده طول عمر در برابر واریانس، سیخ، و کورتوز.

در هر گروه آزمون، طول عمر به عنوان میانه سن در مرگ، واریانس به عنوان میانه انحراف مطلق (MAD) سن در مرگ، سیخ شدن به عنوان سیخ سن در مرگ، و کورتوز به عنوان کورتوز سن در مرگ اندازه گیری می شود. برآورد، خطای استاندارد (SE) و t-value از مدل های مختلط خطی با سایت تحقیقاتی به عنوان متغیر اثر تصادفی است. ² و p-value از یک آزمون نسبت احتمال (LRT) هستند که در آن مدل با متغیر مستقل با مدل بدون آن متغیر مقایسه می شود.

مورد علاقه برای تعیین اینکه آیا مداخلات شناخته شده برای گسترش متوسط (و یا متوسط و حداکثر) طول عمر حیوانات تجربی هر گونه تاثیر بر تغییر پذیری طول عمر. ما این فرضیه را مطرح کردیم که گسترش طول عمر به وسیله های ژنتیکی، غذایی یا فارماکولوژیک منجر به کاهش تغییر پذیری طول عمر می شود. با این حال، بازرسی از داده ها از موسسه ملی برنامه تست مداخلات پیری (ITP) [4] و از مطالعات ما از تعاملات ژن های طول عمر مورین با محدودیت کالری (CR) [5-7] نشان داد که تغییرات متقابل طول عمر و تغییر پذیری آن به طور مداوم مشاهده نمی شود. این پیشنهاد کرد که فرضیه ما به احتمال زیاد نیاز به رد شدن خواهد داشت و سوال جدیدی را مطرح خواهد کرد، یعنی اینکه چه عواملی بر تغییر پذیری طول عمر تأثیر می گذارد. در اینجا نتایج یک مطالعه را با هدف تجزیه و تحلیل اثرات رابطه جنسی، کرنش، مداخلات گسترش دهنده زندگی و تعاملات آنها بر تنوع طول عمر گزارش می کنیم.

نتیجه

هنگامی که طول عمر موش ها در مجموعه داده های ITP با واریانس طول عمر همبستگی داشت، کاهش شدید واریانس با افزایش طول عمر مشاهده شد. سیخ شدن نیز کاهش یافت، در حالی که کورتوز، به معنی غیر مسطح بودن، افزایش یافت (جدول ۱). با این حال، هنگامی که جنسیت در این روابط گنجانده شد، متوجه شدیم که به شدت بر نتایج تأثیر می گذارد (تصویر 1؛ جدول 2).

قابل توجه ترین یافته این بود که واریانس طول عمر به شدت از نظر جنسی دی مورف است (انجیر 1) (جدول 2: ² = 20.47; df = 1; p< 0.001).="" in="" females="" the="" variance="" did="" not="" decrease="" with="" the="" increased="" longevity="" (table="" 2:="" ²="0.95;" df="1;" p="0.329)," while="" that="" in="" males="" did="" (²="20.47;" df="1;" p="">< 0.001).="" the="" skewness="" decreased="" (²="33.74;" df="1;" p="">< 0.001),="" equally="" in="" both="" female="" and="" males="" (²="0.35;" df="1;" p="0.556)." kurtosis="" increased="" slightly="" (²="4.51;" df="1;" p="0.034)," but="">

شکل 1. رابطه طول عمر و واریانس (a)، کبود بودن (b)، و کورتوز (c). ماده ها: دایره های قرمز؛ مردان: دایره های آبی; حلقه های پر شده: درمان; و دایره های پر نشده؛ درمان نشده .

جدول 2. برآوردهای تضاد مدل های طول عمر در برابر واریانس، سیخ شدن و کورتوز، از جمله جنسیت و تعامل بین جنسیت و متغیرهای مستقل.

برآورد، خطای استاندارد و مقدار t از مدل های مختلط خطی با سایت تحقیقاتی به عنوان متغیر اثر تصادفی است. ² و p-value از یک آزمون نسبت احتمال (LRT) هستند که در آن مدل با متغیر مستقل با مدل بدون آن متغیر مقایسه می شود.

به طور قابل توجهی در مردان کمتر از ماده (² = 29.16; df = 1; p<>

بازنمایی گرافیکی واریانس در طول عمر موش های کنترل در مقابل موش های تحت درمان با موثرضد پیریترکیبات نشان داد که جدا از اثر ترکیبات بر طول عمر میانه، عمدتاً به نظر می رسید که مرگ زودهنگام در نرها کاهش می یابد (انجیر ۲).

مجموعه داده های مطالعات ژن های طول عمر/CR هیچ همبستگی کلی بین طول عمر میانه در هر گروه آزمون و واریانس طول عمر نشان داد که به صورت MAD در هر گروه آزمون اندازه گیری شد (² = 0.25; df = 1; p = 0.617). هنگامی که جنسیت مورد توجه قرار گرفت و مطالعات با توجه به اثر رژیم غذایی، ژنوتیپ، یا رژیم غذایی به علاوه ژنوتیپ تقسیم شدند، مشخص شد که زمانی که موش ها دارای طول عمر در حال گسترش ژنوتیپ ها بودند و با آن درمان می شدند

شکل 2. توطئه های تراکم سن در مرگ موش های کنترل (a) و موش های تحت درمان با موثرضد پیریداروسازی (ب). آزمون کاکس برای تفاوت بین ماده ها (خط قرمز جامد) و نرها (خط آبی تیره) در بقا با محل تحقیق به عنوان متغیر اثر تصادفی: موش های کنترل: z = 11.02، 02/0p< 0.001;="" treated="" mice:="" z="6.95," p=""><>

جدول شماره 3. برآورد تضاد مدل های طول عمر با واریانس شامل جنسیت و تعامل بین جنسیت و متغیرهای مستقل؛ CR، زندگی در حال گسترش جهش، یا هر دو.

برآورد، خطای استاندارد، و مقدار t از مدل های مخلوط خطی با کرنش به عنوان متغیر اثر تصادفی است. ² و p-value از یک آزمون نسبت احتمال (LRT) هستند که در آن مدل با متغیر مستقل با مدل بدون آن متغیر مقایسه می شود.

CR, واریانس زنان در نزدیکی اهمیت آماری افزایش یافت (² = 3.25; df = 1; p = 0.071), در حالی که در مردان این مورد به نظر می رسید (شکل 3; جدول 3).

بازنمایی گرافیکی واریانس در طول عمر موش های کنترل در مقابل موش های جهش یافته دیرینه درمان شده با CR نشان داد که به غیر از اثر گسترش دهنده زندگی درمان بر طول عمر میانه، تفاوت جنسیتی طول عمر عمدتاً به دلیل مرگ نسبتاً زودهنگام برخی نرها بوده است (انجیر ۴).

بحث

نتایج مطالعه حاضر نشان می دهد که مداخلاتی که طول عمر را در موش های آزمایشگاهی گسترش می دهند نیز می توانند توزیع و واریانس سن در مرگ را تغییر دهند. حضور، بزرگی، و ظاهراً جهت این تغییرات به جنس حیوانات و ماهیت مداخلات بستگی دارد. در مجموعه داده های بزرگ از مطالعات ITP، افزایش طول عمر با کاهش واریانس در نرها همراه بود (05/0p<0.001) but="" not="" in="" females.="" moreover,="" the="" distribution="" of="" the="" data="" suggested="" a="" possible="" trend="" for="" variance="" in="" female="" data="" changing="" in="" the="" opposite="" direction="" (fig="" 1).="" in="" long-lived="" mice="" with="" gh-related="" mutations,="" subjected="" to="" cr,="" the="" variance="" was="" not="" related="" to="" longevity="" in="" males="" but="" seemed="" to="" increase="" with="" longevity="" in="" females="" (p="">

دی مورفیسم جنسی در پاسخ به مداخلات گسترش طول عمر غیرمنتظره نیست و یافته های ما نشان می دهد که رابطه توزیع سن فردی در داده های مرگ به میانگین طول عمر جمعیت نیز وابسته به جنس است. بنابراین ، نتایج حاضر اضافه کردن به بدن در حال رشد از شواهد که جنبه های مختلف پیری ، از جمله طول عمر ، و همچنین پاسخ به مختلفضد پیریمداخلات، نمی تواند از داده های به دست آمده در افراد از جنس های مختلف پیش بینی [8].

رابطه متقابل طول عمر انسان و تغییر پذیری آن که ون رالته، و همکارانش [3] در مجموعه داده های مختلف یافت شدند، از بخش هایی از همان جمعیت بودند که بر اساس درآمد، دستیابی آموزشی، و/یا نوع اشتغال از هم جدا شده بودند. اعتقاد بر این است که اساس زیستی تأثیر مستند عوامل اجتماعی و اقتصادی بر پیری انسان شامل تفاوت در رژیم غذایی، رفتارهای مرتبط با سلامت، و دسترسی به و همچنین کیفیت مراقبت های بهداشتی است، اگرچه اهمیت عوامل اخیر در فنلاند و دیگر کشورهایی که سیستم های مراقبت های بهداشتی عالی دارند، احتمالاً کوچک یا غایب است.

از آنجا که حیوانات در هر یک از چهار همگروهی مورد بررسی از نظر ژنتیکی نامتگن بودند و سه تا از چهار همگروهی نسبتاً کوچک بودند، این مطالعه اجازه هیچ نتیجه گیری قاطعی در مورد تفاوت های احتمالی بین سویه ها را نمی دهد. مطالعاتی از جمله جمعیت های بزرگ متمایز ژنتیکی، سویه های مختلف inbred، و ترجیحاً صلیب های آن ها نیز برای رسیدگی به این موضوع مورد نیاز خواهد بود.

شکل 3. اثرات CR، جهش های گسترش دهنده زندگی یا هر دو بر رابطه با طول عمر و واریانس در موش های ماده و نر. ماده ها: دایره های قرمز؛ مردان: دایره های آبی; حلقه های پر شده: درمان; و دایره های پر نشده؛ درمان نشده .

آنچه از تحلیل ما می توان نتیجه گرفت این است که در مطالعاتضد پیریمداخلات در حیوانات آزمایشگاهی تغییرات تغییر پذیری طول عمر را نمی توان از تغییرات طول عمر پیش بینی کرد. جالب است حدس بزنید که این ممکن است مربوط به تفاوت در مکانیسم های مسئول گسترش طول عمر توسط مداخلات مختلف باشد.

در مجموعه داده هایی که مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتیم، نمونه هایی از تفاوت نسبت مرگ و میر زودهنگام در ماده ها و نرها و همچنین در حیوانات طولانی مدت (جهش یافته، محدود به کالری یا درمان شده با مواد مخدر) در مقابل کنترل (نوع وحشی، لیبیتوم آگهی تغذیه شده، یا درمان نشده) وجود داشت و دامنه منحنی های بقا نیز در برخی موارد متفاوت بود. سیخ و کورتوز همان طور که انتظار می رفت بود. تفاوت در توزیع طول عمر فردی ممکن است به تفاوت های مشاهده شده در تنوع کمک کرده باشد. به عنوان مثال، کاهش وقوع مرگ و میر زودهنگام به احتمال زیاد به طول عمر مردان تحت درمان با مواد مخدر در مطالعات ITP کمک کرده است [9]. این و نمونه های دیگر از نقش مرگ های زودهنگام در تعیین طول عمر کل همگروهی شبیه یافته های جمعیتی بر اثرات عوامل اجتماعی و اقتصادی در جمعیت های انسانی است [3].

تجزیه و تحلیل توزیع سن فردی در ارزش های مرگ نشان می دهد تاثیر دیانتی از مورد بررسیضد پیریمداخلات در بخش های مختلف تاریخ زندگی. این امر به نوبه خود به احتمال زیاد مربوط به مکانیسم های مختلف اعمال آن ها است. ارتباط معنی دار طول عمر گسترده با کاهش واریانس مرگ فردی در جمعیت های مختلف انسانی [3] و در موش های نر از همگروهی ITP (انجیر 1)، ممکن است به دلیل، در بخشی از، به "اثر سقف" به عنوان طول عمر نزدیک به ارزش حداکثر طول عمر برای گونه بوده است. به احتمال زیاد، بخش بیشتری از مرگ و میر زودهنگام را منعکس می کند

شکل 4. توطئه های تراکم سن مرگ موش های کنترل (a) و موش های تحت درمان با یکضد پیریرژیم غذایی و همچنین داشتن ژنوتیپ های ضد پیری (ب). آزمون کاکس برای تفاوت بین ماده ها (قرمز جامد) و نرها (آبی تیره) در بقا با کرنش به عنوان متغیر اثر تصادفی: موش های کنترل: z = 0.57، p = 0.57؛ موش های تحت درمان: z = 3.97, p<>

جدول 4. افزایش درصدی طول عمر میانه به دلیل عوامل فارماکولوژیک تجویز شده در برنامه آزمایش مداخلات.

پاورقی: برای برخی از داروهای ذکر شده در بالا، مطالعات اضافی با استفاده از دونه های مختلف و یا شروع درمان در سنین مختلف انجام شد که منجر به گسترش تا حدودی متفاوت ٪ میانه طول عمر شد.

ریشه شناسی های مختلف در گروه های با طول عمر میانه کوتاه تر. به طور جذابی، مسیر چندین فرایند فیزیولوژیکی که از نظر مکانیستی مربوط به پیری هستند، در کوتاه مدت متغیرتر از افراد فوق العاده طولانی مدت [۱۰] هستند.

صرف نظر از مکانیسم های درگیر، داده های ما حاکی از آن است که تجزیه و تحلیل تغییرات در تغییر پذیری طول عمر در پاسخ به مداخلات مختلف می تواند اطلاعات اضافی در مورد ماهیت اثرات مشاهده شده ارائه دهد.

مواد و روش ها

ما از داده های مربوط به طول عمر موش های فردی (سن در مرگ اندازه گیری شده در روزها) از ITP [4] و از مطالعات انجام شده در دانشگاه ایلینوی جنوبی (SIU) [5-7] استفاده کردیم. در ITP، موش های ماده و نر مشتق شده از صلیب های چهار سویه اینبرد از نظر ژنتیکی با ترکیبات مختلفی که از اوایل بزرگسالی شروع می شوند و تا زمانی که مردند یا اتانازی شدند، درمان شدند. این مطالعات به موازات سه مؤسسه همکار انجام شده است. هر دو گسترش معنی دار طول عمر و عدم وجود اثرات در ادبیات داوری همتا گزارش شد [9, 11- 15]. فهرستی از ترکیبات، اقدامات آن ها و افزایش درصدی طول عمر میانه حیوانات درمان شده در جدول ۴ همراه با اشاراتی به نشریاتی که داده های طول عمر را گزارش می کنند، ذکر شده است.

اثرات فارماکولوژیکضد پیریمداخلات در مطالعات ITP با استفاده از داده های موش های تحت درمان با گسترش عمر مستند و کنترل های تطبیق مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. این گروه ها شامل حیوانات تحت درمان با آکاربوز [9]، آسپیرین [11]، 17-α استردیول [9]، گلیسین رژیم غذایی [15]، نوردیهیدروگوایارتیک اسید [9، 11]، پروتاندیم تی ام (مخلوط عصاره گیاه) [14]، یا راپاماسین [16]. واریانس طول عمر در رابطه با درمان و رابطه جنسی در حالی که با در نظر گرفتن تفاوت در آزمایشگاه های تست مورد بررسی قرار گرفت [4].

مجموعه داده های دوم با داده های طول عمر فردی موش ها از سه آزمایش جداگانه بر روی تعامل محدودیت کالری (CR) با یکی از سه جهش گسترش دهنده زندگی [5-7] ایجاد شد. این آزمایش ها از موش هایی با سرکوب هورمون رشد (GH) سیگنالینگ با جهش تداخل با افتراق سه نوع سلول هیپوفیز قدامی منجر به هیپوپیتویتاریسم از جمله کمبود GH استفاده کردند [17, 18]، کاهش ژن هورمون آزاد کننده GH (GHRH) منجر به کمبود GH جدا شده [19]، و یا از بین رفتن ژن گیرنده GH (GHR) منجر به مقاومت GH [20]. حدود نیمی از حیوانات در هر ژنوتیپ / گروه جنسی libitum آگهی (AL) تغذیه شد، در حالی که باقی مانده تحت محدودیت کالری (CR) با شروع در اوایل بزرگسالی با تغذیه آنها 60-70٪ از مقدار مواد غذایی مصرف شده در طول هفته قبل بر اساس سن، جنس، و ژنوتیپ با موش AL همسان شد. جهش های شاغل بر روی یک زمینه ژنتیکی نامتگن حفظ شدند که برای هر جهش متفاوت و متفاوت از آرایش ژنتیکی موش های ITP بود. هر یک از سه جهش مورد استفاده در این مطالعات طول عمر هر دو ماده و نر را افزایش می دهد در حالی که اثرات CR بر طول عمر جهش و وابسته به جنس [5-7] بود. افزایش درصدی طول عمر میانه در هر گروه ژنوتیپ/جنس/رژیم غذایی در جدول 5 ذکر شده است.

واریانس طول عمر در رابطه با گروه های مختلف (ژنوتیپ، رژیم غذایی و ترکیب جنسی) مورد بررسی قرار گرفت. مداخلاتی که بی اثر بودند (مانند CR در GHR

جدول 5. اثرات تعاملی محدودیت کالری و سرکوب ژنتیکی سیگنالینگ هورمون رشد بر طول عمر میانه در هر ژنوتیپ / جنس / گروه رژیم غذایی.

24 گروه وجود دارد: سه سویه (Ames, GHR, GHRH); دو جنس؛ دو رژیم غذایی (CR و AL)؛ و دو ژنوتیپ (نرمال و کوتوله یا ناک اوت). طبیعی (N) نشان دهنده خواهر و برادر طبیعی موش های جهش یافته است.

-/- موش ها) برای این احتمال که CR می تواند واریانس را بدون تغییر میانه تغییر دهد، گنجانده شدند.

ما تمام تجزیه و تحلیل های آماری را با استفاده از نرم افزار R 3.4.4 [21] انجام داده است. برای بررسی رابطه طول عمر و واریانس در طول عمر، میانه سن در مرگ زنان و مردان تمام گروه های آزمون موجود را محاسبه کرد. ما میانه را به جای میانگین انتخاب کردیم زیرا نمی توانستیم فرض کنیم که واریانس طول عمر به طور معمول توزیع شده است. برای واریانس طول عمر، ما MAD را محاسبه کردیم، به عنوان عبارت دیگر، میانه انحراف مطلق، یک تناسب متریک قوی برای توزیع های غیر عادی [22]. میانه، MAD، سیخ و کورتوز همگی با تابع توصیف شده () روان بسته محاسبه شدند [23]. برای آزمایش روابط طول عمر و واریانس، سیخ شدن و کورتوز، lmer تابع () بسته lme4 [24] برای مدل های ترکیبی-اثر خطی، همراه با تابع drop1() برای آزمون نسبت احتمال (LRT) به کار گرفته شد. برای آزمایش تفاوت بقا بین ماده ها و نرها، از آزمون کاکس برای اثرات مختلط استفاده شد، به عنوان یکی از روباه های تابع () روباه بسته [25]. به عنوان یک متغیر اثر تصادفی، سایت تحقیق در تمام تحلیل های داده های ITP و کرنش در تمام تحلیل های داده های SIU (جهش/CR) گنجانده شد. گراف ها با استفاده از قطعه های پراکنده() و چگالی ()، هر دو ماشین بسته [26] ساخته شدند. ما توطئه های تراکم را بر توطئه های بقای کاپلان-مایر ترجیح دادیم، زیرا آنها واضح تر نشان می دهند که تفاوت های بین ماده ها و نرها در کجا رخ داده است.

اذعان ها

ما از دکتر ریچارد میلر برای مفیدترین نظرات و پیشنهادات و دکتر اسکات پلچر برای نظرات خود را در مورد تفسیر یافته های ما سپاسگزاریم. این اثر توسط NIA از طریق برنامه ITP پشتیبانی شد و اعطا AG031736، AG019899، و AG038850، و توسط انجمن دیابت آمریکا، کمک هزینه 1- 19-IBS-

126.

تضاد منافع

نویسندگان هیچ منافع مالی رقیبی را اعلام نمی کنند.