Echinacoside در سرطان کبد فعالیت ضد توموری دارد

مخاطب:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساپ: 008618081934791

ون لی*، جینگ ژو، یاجی ژانگ، جینگ ژانگ، زو لی، کیائو یان، جیابینگ هان و فانگدی هو*

خلاصه

زمینه:Echinacoside (ECH) ماده اصلی فعال گیاه Cistanches Herba است که به داشتن اثرات درمانی روی تومورهای متاستاتیک معروف است. با این حال، اثرات ECH بر سرطان کبد هنوز نامشخص است. این مطالعه به منظور بررسی اثرات ECH بر پرخاشگری سلول های سرطانی کبد بود.

مواد و روش ها:دو نوع سلول سرطانی کبد Huh7 و HepG2 با دوزهای مختلف ECH در زمان‌ها و شیب‌های مختلف درمان شدند. سنجش MTT و تشکیل کلونی برای تعیین اثرات ECH بر زنده ماندن سلول های Huh7 و HepG2 مورد استفاده قرار گرفت. سنجش ترانسول و سنجش فلوسیتومتری برای تشخیص اثرات درمان ECH بر تهاجم، مهاجرت، آپوپتوز و چرخه سلولی سلول‌های Huh7 و HepG2 استفاده شد. از آنالیز وسترن بلات برای تشخیص اثرات ECH بر سطوح بیان TGF- 1، smad3، smad7، پروتئین‌های مرتبط با آپوپتوز (کاسپاز{10}}، کاسپاز-8) و Cyto C استفاده شد. در سلول های سرطانی کبد رابطه بین miR{12}}p و TGF- 1 با استفاده از تجزیه و تحلیل بیوانفورماتیک و سنجش گزارشگر لوسیفراز شناسایی شد.

نتایج:نتایج نشان داد که ECH تکثیر، تهاجم و مهاجرت سلول‌های Huh7 و HepG2 را به روشی وابسته به دوز و زمان مهار می‌کند. علاوه بر این، ما دریافتیم که ECH با مسدود کردن سلول‌ها در فاز S باعث آپوپتوز سلولی Huh7 و HepG2 می‌شود. علاوه بر این، بیان miR{6}}p در بافت‌های تومور کبد کاهش می‌یابد، اما درمان ECH بیان miR{7}}p را در سلول‌های Huh7 و HepG2 افزایش می‌دهد. علاوه بر این، متوجه شدیم که TGF{10}} به عنوان هدف بالقوه miR-503-3p شناسایی شده است. ECH فعال شدن مسیر سیگنالینگ TGF- 1/Smad را ترویج کرد و سطوح بیان Bax/Bcl-2 را افزایش داد. علاوه بر این، ECH می تواند باعث آزاد شدن سیتو C میتوکندری شود و باعث واکنش درجه کاسپاز شود.

نتیجه گیری:این مطالعه نشان می‌دهد که ECH فعالیت ضد توموری را از طریق محور miR-503-3p/TGF- 1/Smad در سرطان کبد اعمال می‌کند و یک عامل ضد تومور ایمن و مؤثر برای سرطان کبد فراهم می‌کند.

کلید واژه ها: اکیناکوزید، سرطان کبد، آپوپتوز، MiR-503-3p، TGF- 1/smad

سیستانچ یک عامل ضد تومور ایمن و موثر برای سرطان کبد است.

مقدمه

سرطان کبد یکی از شایع ترین تومورهای بدخیم با میزان بروز بالا است و بروز سرطان کبد به سرعت در حال رشد است [1]. هپاتکتومی بهترین راه برای درمان سرطان کبد برای بیماران در مراحل اولیه است [2]. با این حال، اکثر بیماران پس از جراحی عود و متاستاز دارند. میزان بقای سالانه 5- تنها حدود 3-5 درصد است [2]. بنابراین، رویکردها و عوامل درمانی جدید به فوریت مورد نیاز است.

در چند سال گذشته، توسعه داروی سرطان و تحقیقات روی فیتوکمیکال ها شروع به توجه به قوم فارماکولوژی کرده است [3، 4]. تعداد زیادی از مطالعات بالینی و تجربی نشان داده‌اند که مونومرهای دارویی می‌توانند از تکثیر، متاستاز سلول‌های کارسینومای کبدی، القای آپوپتوز و تمایز سلول‌های سرطانی جلوگیری کنند [5]. گیاه سیستانچ هربا گیاهی از خانواده گیاهان است که طب سنتی چینی است و به «جنسنگ صحرایی» معروف است [6]. Cistanches Herba از نظر انواع ترکیبات شیمیایی غنی است و محققان داخل و خارج از آن بیش از صد ترکیب از جمله گلیکوزیدهای فنیل اتانول، لیگنان ها، ترپن های سیکلوآلیفاتیک، قندها، اسیدهای آمینه و غیره را از آن جدا کرده اند [7]. Echinacoside (ECH) جزء اصلی Cistanches Herba است و همچنین به طور کلی ماده فعال اصلی آن در نظر گرفته می شود [6]. در سال‌های اخیر، مطالعات نشان داده‌اند که ECH ممکن است یک گزینه درمانی جدید برای تومورهای تهاجمی یا متاستاتیک گسترده باشد [8]. مطالعات نشان داده اند که ECH می تواند سرطان پانکراس، لوسمی، سرطان معده، سرطان آندومتر و بسیاری از تومورهای دیگر را مهار کند [9]. با این حال، گزارشی در مورد تأثیر ECH بر پیشرفت سرطان کبد وجود ندارد.

MiRNA ها نقش اساسی در تنظیم بیان ژن پس از رونویسی دارند (10). مطالعات گسترده نشان داده است که miRNA ها ارتباط نزدیکی با سرطان کبد [11] و مولتیپل اسکلروزیس دارند. MiR{3}}p یک miRNA تازه کشف شده است که در تکثیر، مهاجرت و تهاجم سلول های تومور نقش دارد [12]. با این حال، عملکرد آن در سرطان کبد نامشخص است. در حال حاضر، تحقیق بر روی ژن‌های هدف پایین‌دست miRNA در مرحله نسبتاً بالغی است، اما بسیاری از مکان‌های ژن هدف کشف نشده باقی مانده‌اند. مسیر انتقال سیگنال Te TGF- 1/Smad3 به ویژه برای تومورزایی و توسعه مهم است [13]. مشخص شد که مسیر TGF- 1/Smad3 در مدل هپاتوم فعال شده است، که نشان می‌دهد مسیر TGF- 1/Smad3 نقش مهمی در ایجاد سرطان کبد بازی می‌کند [14]. بیان بالای مسیر TGF- 1/Smad3 یکی از دلایل کلیدی برای بروز سرطان کبد در نظر گرفته می‌شود [15]. به منظور بررسی بیشتر مکانیسم اساسی که واسطه اثرات ECH بر سرطان کبد است، مسیر miRNA/TGF- 1/Smad3 مورد بررسی قرار گرفت.

در این مطالعه، ما اثرات ECH را بر پیشرفت سلول‌های سرطانی کبد ارزیابی کردیم و دریافتیم که ECH از طریق محور miR-503-3p/TGF- 1/Smad در سرطان کبد، یک فعالیت ضد توموری اعمال می‌کند. و یک عامل ضد تومور ایمن و موثر برای سرطان کبد فراهم می کند.

cistanche tcmضد سرطان است

روش ها و مواد

مواد

Echinacoside (ECH) (purity>98 درصد، مونوهیدرات) از Hetian Dichen sashing Pharmaceutical Development Co., Ltd (سین کیانگ، چین) به دست آمد. فرمول ساختاری در شکل 1 نشان داده شده است.

کشت و ترانسفکشن سلولی

رده های سلولی سرطان کبد انسان Huh7 و HepG2 از FENGHUISHENGWU (هونان، چین) خریداری شدند. سلول ها در محیط DMEM حاوی 10 درصد سرم جنین گاوی (FBS, Gibco, USA) در دمای 37 درجه در انکوباتور سلولی 5 درصد CO2 کشت داده شدند. MiR{6}}p mimic و miR-NC از شرکت دارویی ژن شانگهای (شانگهای، چین) به دست آمد. تمام ترانسفکشن ها با استفاده از معرف Lipofectamine 2000 (Invitrogen) طبق دستورالعمل سازنده انجام شد. پس از 24 تا 48 ساعت اضافی، سلول های ترانسفکت شده جمع آوری و برای مطالعات بیشتر پردازش شدند.

سنجش گزارشگر لوسیفراز

RNA های کل از سلول ها استخراج شد و TGF- با استفاده از پرایمرهای WT و MUT تقویت شد. قطعه ای از TGF- 1 در وکتور گزارشگر pGL3-Bashc لوسیفراز به نام TGF- -WT-Luc وارد شد. ناحیه اتصال 1 و miR{6}}p جهش زایی شد تا یک پلاسمید جهش یافته به نام TGF- 1-Mut-Luc را تشکیل دهد. TGF 1-WT-Luc و TGF- 1-Mut-Luc همزمان به سلول‌هایی با miR{14}}p mimic و pRLTK منتقل شدند. سلول ها 6 ساعت پس از ترانسفکشن جمع آوری شدند. کیت سنجش گزارشگر دوگانه لوسیفراز (Promega، Madison، WI، USA) برای تعیین فعالیت لوسیفراز استفاده شد.

سنجش رشد سلولی

سلول‌های Huh7 و HepG2 (2×105) در صفحات چاهک قرار گرفتند. سپس سلول ها با ECH به مدت 24، 36 و 48 ساعت تحت درمان قرار گرفتند. پس از آن، 10 میلی لیتر محلول MTT به هر چاهک اضافه شد و سلول ها به مدت 4 ساعت انکوبه شدند. پس از آن، 150 میکرولیتر DMSO به چاهک ها اضافه شد. و جذب در 570 نانومتر توسط یک ELISA reader (Aoweiya، پکن، چین) اندازه گیری شد.

تشکیل کلنی

سوسپانسیون تک سلولی از سلول های ترانسفکت شده تهیه و به مدت 7 روز در انکوباتور کشت داده شد. پس از دور ریختن محیط، سلول ها به مدت 5 دقیقه با رنگ آمیزی رایت رنگ آمیزی شدند و سپس با محلول رنگی گیمسا و محلول بافر فسفومولیبدات سورنسن (1:9) به مدت 10 دقیقه رنگ آمیزی شدند. پس از شستشو، کلنی ها در زیر میکروسکوپ شمارش شدند.

سنجش ترانس ول

سنجش مهاجرت و تهاجم در محفظه‌های Transwell (Costar، Badhoevedorp، Te Netherland) با یا بدون Maribel (BD Biosciences) در سطح فوقانی غشاء {{0}} میکرومتر (اندازه منافذ) انجام شد. برای سنجش مهاجرت، سلول‌های Huh7 و HepG2 ترانسفکت شده مجدداً در 200 میکرولیتر محیط DMEM بدون سرم معلق شدند و در اتاقک‌های بالایی کاشته شدند. برای سنجش تهاجم، ماتریژل (30 میکروگرم در چاه) از قبل روی غشای اتاق‌های فوقانی پوشانده شد و مراحل دیگر همانند روش مهاجرت بود. پس از 24 ساعت انکوباسیون، سلول‌هایی که از طریق غشاء به سطح زیرین مهاجرت یا حمله کرده بودند، با اتانول تثبیت شدند و با 0.2 درصد کریستال ویولت رنگ‌آمیزی شدند. در نهایت سلول ها در پنج میدان تصادفی با استفاده از میکروسکوپ مشاهده و شمارش شدند.

تجزیه و تحلیل چرخه سلولی

سلول های Huh7 و HepG2 در 6-صفحه چاهی با تراکم 1×1{5}}5 سلول در میلی لیتر کاشته شدند. سلول ها پس از درمان با ECH به مدت 0، 24، 48 ساعت جمع آوری شدند. سپس سلول‌های Tese را با 1 میلی‌لیتر یخ 75 درصد اتانول از پیش سرد شده، به مدت 2 ساعت در دمای 20 درجه اضافه کردند. پس از آن، سلول ها با محلول رنگ آمیزی PI اضافه شدند و به مدت 15 دقیقه در تاریکی انکوبه شدند. سپس چرخه سلولی توسط فلوسایتومتری آنالیز شد.

تجزیه و تحلیل سلول آپوپتوز

سلول ها در صفحات {0}چاهی با تراکم 5×105 سلول در چاهک قرار گرفتند. پس از جمع آوری، سلول ها سانتریفیوژ شدند و 195 میکرولیتر از محلول اتصال Annexin V-FITC برای معلق مجدد سلول ها اضافه شد. سپس 5 میکرولیتر Annexin V-FITC و 10 میکرولیتر محلول رنگ‌آمیزی پروپیدیوم یدید اضافه شد. سلول ها در تاریکی انکوبه شدند و سپس در حمام یخ قرار گرفتند.

سیستانچ از کبد محافظت می کند.

رونویسی معکوس کمی PCR (qRT-PCR)

RNA کل توسط معرف TRIZol (Haigene، Haerbin، چین) استخراج شد. سیستم Real-time PCR Te viiA™ 7 برای qRT-PCR استفاده شد. RNA با استفاده از کیت سنتز cDNA رشته اول BeyoRT (موسسه بیوتکنولوژی Beyotime) به cDNA معکوس رونویسی شد. U6 به عنوان کنترل درون زا استفاده شد [16]. توالی پرایمر به شرح زیر بود:

miR-503-3p: جلو: 5′-CTGATGGTTAAGAGAATGT-3′،

miR-503-3p: معکوس: 5′-GTCCTTGGACATCCGGGCCG-3′،

U6: جلو: 5′-GACAGATTCGGTCTGTGGCAC-3′،

U6: معکوس: 5′-GATTACCCGTCGGCCATCGATC-3′.

تجزیه و تحلیل وسترن بلات

سلول های ترانسفکت شده جمع آوری و پروتئین کل استخراج شد. غلظت پروتئین با استفاده از کیت سنجش پروتئین BCA تعیین شد. نمونه های پروتئینی با 10 درصد SDS-PAGE جدا شده و روی غشای پلی وینیلیدین فلوراید منتقل شدند. سپس غشا با anti-TGF- 1 (1:1000، Shifeng، شانگهای، چین)، SMAD3 (1:1000، Shifeng، شانگهای، چین)، SMAD 7 (1:1000، Shifeng، شانگهای، انکوبه شد. China), Bcl{12}} (1:1000, Shifeng, Shanghai, China), Bax (1:1000, Shifeng, Shanghai, China), Cyto C (1:1000, Shifeng, Shanghai, China), کاسپاز{ {19}} (1:1000، شیفنگ، شانگهای، چین)، کاسپاز{22}} (1:1000، شیفنگ، شانگهای، چین) و آنتی بادی ضد اکتین (1:1000، شیفنگ، شانگهای) ، چین) یک شبه. 10 غشا با آنتی بادی ثانویه ضد خرگوش (1:1000، Shifeng، شانگهای، چین) انکوبه شد [17].

روش های آماری

داده ها به عنوان میانگین ± انحراف استاندارد (SD) ارائه شد. تمامی تجزیه و تحلیل های آماری با نرم افزار SPSS 13 انجام شد. برای مقایسه از آزمون تی دانشجویی استفاده شد. p-value < 0.05="" معنی="" دار="" در="" نظر="" گرفته="">

نتایج

اثر ECH بر فعالیت و تکثیر سلول های سرطانی کبد انسان

برای بررسی اثر ECH بر عملکرد سلول های سرطانی کبد انسان، سنجش MTT انجام شد و نتایج نشان داد که زنده ماندن سلول های HepG2 (شکل 2a) و Huh7 (شکل 2b) به تدریج با افزایش دوز و زمان کاهش می یابد. درمان ECH در مقایسه با گروه کنترل (p < 0.01).="" پس="" از="" 48="" ساعت="" قرار="" گرفتن="" در="" معرض="" ech،="" بقای="" سلول="" کمترین="" میزان="" بود،="" بنابراین="" مواجهه="" 48="" ساعته="" ech="" برای="" آزمایش="" بیشتر="" انتخاب="" شد.="" نتایج="" سنجش="" تشکیل="" کلنی="" نشان="" داد="" که="" تعداد="" کلنی‌های="" سلول‌های="" hepg2="" (شکل="" 2c)="" و="" huh7="" (شکل="" 2d)="" به="" تدریج="" با="" درمان="" ech="" به="" صورت="" وابسته="" به="" دوز="" در="" مقایسه="" با="" گروه="" کنترل="" کاهش="" یافت="" (p="">< 0="" 0.01،="" p=""><0.001). این="" نتایج="" نشان="" می="" دهد="" که="" ech="" نقش="" مهمی="" در="" فعالیت="" و="" تکثیر="" سلول="" های="" hcc="" ایفا="" می="">

اثرات ECH بر مهاجرت و تهاجم سلول های سرطانی کبد انسان

برای بررسی بیشتر اثر ECH بر عملکرد سلول سرطانی کبد انسان، مهاجرت و تهاجم سلولی شناسایی شد. همانطور که در شکل.<0.01,><0.001), suggesting="" that="" ech="" inhibited="" the="" migration="" and="" invasion="" of="" huh7="" and="" hepg2="">

ECH توزیع سلول های سرطانی کبد انسان و آپوپتوز را تنظیم کرد

به منظور بررسی اثر ECH بر آپوپتوز سلول سرطانی کبد، فلوسیتومتری انجام شد. همانطور که در شکل 4a نشان داده شده است، در مقایسه با گروه کنترل، درصد سلول های Huh7 و HepG2 در فاز G0/G1 به طور قابل توجهی پس از درمان ECH به صورت وابسته به دوز کاهش یافت (p<0.01), and="" the="" percentage="" of="" huh7="" and="" hepg2="" cells="" in="" the="" s="" phase="" was="" gradually="" increased="" after="" ech="" treatment="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.01), but="" there="" was="" no="" change="" of="" the="" percentage="" of="" huh7="" and="" hepg2="" cells="" in="" g2/m="" phase="" after="" ech="" treatment="" (p="">0.05)، نشان می‌دهد که ECH باعث توقف فاز S سلول‌های Huh7 و HepG2 می‌شود. علاوه بر این، با افزایش دوز ECH، میزان آپوپتوز سلول های Huh7 و HepG2 به تدریج در مقایسه با گروه کنترل افزایش یافت (شکل 4b، p.<0.01,><0.001). these="" results="" indicated="" that="" ech="" induced="" the="" apoptosis="" of="" huh7="" and="" hepg2="">

اثرات ECH بر مسیر TGF-1/Smad

مشخص است که مسیر سیگنالینگ TGF- 1/Smad به خوبی در آپوپتوز سلولی نقش دارد. به منظور بررسی مکانیسم آپوپتوز ناشی از ECH در سلول های HepG2. بیان مسیر سیگنالینگ TGF- 1/Smad شناسایی شد. در مقایسه با گروه کنترل، دریافتیم که درمان ECH به طور قابل توجهی سطوح بیان TGF- 1 و Smad3 را در هر دو سطح mRNA (شکل 5a) و پروتئین (شکل 5b) کاهش داد و به طور قابل توجهی بیان را تنظیم کرد. Smad7 به روشی وابسته به دوز در هر دو سطح mRNA و پروتئین (ص<0.01,><0.001). these="" results="" indicated="" that="" ech="" inhibited="" the="" activation="" of="" the="" tgf-β1/smad="" signaling="">

TGF-1 هدف مستقیم miR-503-3p بود

علاوه بر این، ابزار پیش بینی آنلاین Starbase v2. نشان داد که TGF- 1 یک هدف بالقوه miR-503-3p بود (شکل 6a). نتایج سنجش ژن گزارشگر لوسیفراز نشان داد که فعالیت لوسیفراز سلول‌های HepG2 و سلول‌های Huh7 هم ترانسفکت شده با miR{7}}p mimic و TGF- 1-WT به طور قابل‌توجهی کاهش می‌یابد، اما سلول‌های همتراسفکت شده با miR {10}}p mimic و TGF{11}}MUT (شکل 6b، p<0.01). similarly,="" the="" luciferase="" activity="" of="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" co-transfected="" with="" mir-503-3p="" inhibitor="" and="" tgf-β1-="" mut="" was="" signifcantly="" increased,="" but="" not="" the="" cells="" co-transfected="" with="" mir-503-3p="" inhibitor="" and="" tgf-β1-wt="" (fig.="" 6c,=""><0.01). furthermore,="" the="" expression="" levels="" of="" tgf-β1="" were="" signifcantly="" reduced="" in="" the="" mir-503-3p="" mimic="" group="" compared="" with="" that="" in="" the="" nc="" group="" (fig.="" 6d,=""><0.01), but="" signifcantly="" increased="" in="" the="" mir-503-3p="" inhibitor="" group="" (fig.="" 6d,=""><0.05). these="" results="" suggested="" that="" tgf-β1="" was="" a="" direct="" target="" of="" mir-503-3p.="" to="" further="" investigate="" whether="" mir-503-3p="" mediated="" the="" effect="" of="" ech="" on="" liver="" cancer,="" the="" expression="" of="" mir-503-3p="" was="" detected="" in="" liver="" cancer="" tissues="" and="" it="" showed="" that="" the="" expression="" levels="" of="" mir-503-3p="" were="" decreased="" in="" liver="" cancer="" tissues="" compared="" with="" that="" in="" normal="" liver="" tissues="" (fig.="" 6f,=""><0.01). moreover,="" the="" expression="" levels="" of="" mir503-3p="" were="" further="" decreased="" in="" metastasis="" liver="" cancer="" tissues="" than="" that="" in="" nonmetastatic="" liver="" cancer="" tissues="" (fig.="" 6g,=""><0.01). the="" expression="" levels="" of="" mir-503-3p="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" were="" gradually="" increased="" after="" ech="" exposure="" (fig.="" 6e,=""><0.05,><0.01). taken="" together,="" these="" results="" suggest="" that="" mir-503-3p/tgf-β1="" may="" mediate="" the="" effect="" of="" ech="" on="" liver="">

اثر ECH بر فعالیت سیتوکروم C و کاسپازها

همانطور که در شکل 7a نشان داده شده است، در مقایسه با گروه کنترل، دریافتیم که درمان ECH باعث کاهش قابل توجهی در سطوح بیان Bcl{1}} به روشی وابسته به دوز شد (p<0.01,><0.001), while="" the="" expression="" levels="" of="" bax="" were="" signifcantly="" increased="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.01,><0.001). it="" was="" demonstrated="" that="" bcl-2="" and="" bax="" were="" involved="" in="" ech-induced="" apoptosis="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells.="" in="" addition,="" the="" expression="" levels="" of="" cyto="" c,="" caspase-8,="" and="" caspase-3="" were="" signifcantly="" increased="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" (fig.="" 7b,=""><0.01,><0.001), indicating="" that="" the="" release="" of="" cyto="" c="" and="" the="" activation="" of="" caspase-8="" and="" caspase-3="" were="" involved="" in="" ech-induced="" apoptosis="" in="" hepg2="" and="" huh7="">

بحث

برداشتن جراحی روش اصلی درمان بیماران مبتلا به سرطان کبد است و میزان عود و متاستاز پس از برداشتن کبد بالا است [18، 19]. در این مطالعه، ما دریافتیم که ECH اثر مهاری خاصی بر تومورهای کبدی دارد و یک عامل ضد تومور ایمن و موثر برای سرطان کبد ارائه می‌کند. عمل بالینی نشان داده است که طب سنتی چینی می تواند به طور موثر علائم بالینی بیماران مبتلا به سرطان کبد را کاهش دهد [20]. برای ECH، مطالعات نشان داده اند که ECH دارای اثرات آنتی اکسیدانی، ضد افسردگی، ضد التهابی، ضد ویروسی، ضد توموری و ضد باکتریایی است [21، 22]. در سرطان کولورکتال، ECH می‌تواند با تنظیم کردن کاسپاز و جدا کردن آنزیم‌های ترمیم DNA برای القای اکسیداسیون DNA، آپوپتوز سلول تومور را القا کند [23]. در این مطالعه، برای اولین بار دریافتیم که ECH از طریق محور miR 503-3p/TGF- 1/Smad در سرطان کبد، فعالیت ضد توموری را اعمال می‌کند.

فاز بین سلولی چرخه سلولی سلول های یوکاریوتی را می توان به G1، S و G2 تقسیم کرد. نقاط تنظیم چرخه سلولی در دوره های مختلف توسط عوامل تنظیمی مختلف تنظیم می شود [24]. این مطالعه نشان داد که درصد سلول‌های Huh7 و HepG2 در فاز G0/G1 و G2/M کاهش یافته است و درصد سلول‌های فاز S پس از ECH افزایش یافته است که نشان می‌دهد ECH باعث توقف فاز S می‌شود. سلول های Huh7 و HepG2. عدم تعادل آپوپتوز یکی از مکانیسم های اصلی تومورهای انسانی است. گزارش شده است که داروهای شیمی درمانی ضد تومور به طور کلی آپوپتوز سلول های سرطانی را القا می کنند و پیشرفت سرطان را کنترل می کنند. در مطالعه ما، ما همچنین دریافتیم که ECH می‌تواند آپوپتوز سلول سرطانی کبد را به روشی وابسته به دوز القا کند، که نشان می‌دهد القای آپوپتوز سلول سرطانی ممکن است یکی از مکانیسم‌های اساسی ECH در سرطان کبد باشد.

MiRNA ها نقش کلیدی در تنظیم تکثیر سلولی HCC، چرخه، آپوپتوز، مهاجرت از طریق برهمکنش با مسیرهای سیگنالینگ و مولکول های مختلف دارند [25، 26]. به عنوان مثال، مشخص شد که miR{2}}a در سلول‌های طبیعی کبد به‌شدت بیان می‌شود، اما به طور قابل‌توجهی در سلول‌های سرطانی کبد کاهش می‌یابد و تکثیر را مهار می‌کند [27]. بیان بیش از حد miR{4}P باعث آپوپتوز سلول های سرطانی ریه می شود و از تهاجم و مهاجرت سلولی جلوگیری می کند [28]. علاوه بر این، تعداد زیادی از مطالعات نشان داده اند که مسیر سیگنالینگ TGF- 1/Smad نقش اساسی در ایجاد سرطان کبد ایفا می کند [7]. علاوه بر این، هنگامی که سرطان کبد به پیشرفت خود ادامه می دهد، بیان TGF{8}} به تدریج افزایش می یابد [29]. در این مطالعه، ما دریافتیم که ECH TGF- 1 و Smad3 را کاهش می‌دهد و Smad7 را تنظیم می‌کند، که نشان می‌دهد ECH فعال‌سازی مسیر سیگنالینگ TGF- 1/Smad را مهار می‌کند. در این مطالعه، متوجه شدیم که بیان miR{16}}p در بافت‌های تومور کبد کاهش می‌یابد، اما درمان ECH بیان miR{17}}p را در سلول‌های Huh7 و HepG2 افزایش می‌دهد. علاوه بر این، ما دریافتیم که TGF{20}} به عنوان یک هدف بالقوه miR-503-3p شناسایی شد. ECH فعال شدن مسیر سیگنالینگ TGF- 1/Smad را ترویج کرد و سطوح بیان Bax/Bcl-2 را افزایش داد. این نتایج نشان می‌دهد که مسیر سیگنالینگ miR-503-3p/ TGF- 1/Smad ممکن است تأثیرات ECH بر سرطان کبد را واسطه کند. مشخص شده است که افزایش نسبت Bax/Bcl{26}} ممکن است باعث آزاد شدن سیتو C در میتوکندری به داخل سیتوپلاسم شود. سیتو C با کاسپاز تعامل می‌کند-8 و یک بدن آپوپتوتیک را تشکیل می‌دهد که سپس کاسپاز را جذب و فعال می‌کند-3، که باعث آبشار کاسپازها و ترویج مرگ سلولی می‌شود [30]. در این مطالعه متوجه شدیم که ECH باعث کاهش بیان Bcl{30}} و افزایش بیان Bax، Cyto C، کاسپاز{31}} و کاسپاز-3 شد. این نتایج نشان می دهد که ECH می تواند آسیب میتوکندری را تا حدودی ترمیم کند.

نتیجه گیری در این مطالعه متوجه شدیم که درمان ECH از تکثیر، تهاجم و مهاجرت جلوگیری می کند و باعث القای آپوپتوز سلول های سرطانی کبد می شود. مکانیسم اساسی درمان ECH بر روی سلول‌های سرطان کبد مرتبط با مسیر سیگنالینگ miR-503-3p/TGF- 1/Smad است. این مطالعه مبنای تجربی خاصی را برای تحقیق ECH در مورد ضد تومور فراهم می کند. شایان ذکر است که مطالعه حاضر به دلیل عدم انجام آزمایشات حیوانی محدود شده است. بنابراین، مطالعه آینده ما برای تایید بیشتر یافته های ما، آزمایش های حیوانی انجام خواهد داد.

مزایای سیستانچ بیابانیمحافظت از کبد

برای اطلاعات بیشتر اینجا را کلیک کنید.